Modello di carcinogenesi cutanea indotta dalla sostanza chimica utilizzando Dimethylbenz[a]Anthracene e 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

La carcinogenesi cutanea a due stadi è indotta da due sostanze chimiche applicate topicamente. Un mutagen 7,12-dimethylbenz[a]anthracene) provoca mutazioni nelle cellule epidermiche e una continua applicazione dello stimolatore di crescita generale 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetato accelera la formazione di papilloma cutaneo.

Questo modello di cancro della pelle in due fasi consente lo studio del ruolo dell'infiammazione nel cancro della pelle e consente allo studio l'iniziazione del tumore come processo separato dalla progressione tumorale. La formazione tumorale in questo modello è indotta chimicamente e consente l'uso di ceppi knockout per studiare gli effetti di fattori ambientali o candidati terapeutici. Il modello è adatto per studiare il ruolo del sistema immunitario e l'angiogenesi nel cancro.

Dimostra una patologia della malattia simile al carcinoma a cellule squamose nei pazienti umani. Sebbene questo metodo sia relativamente facile da condurre, è essenziale un tempismo accurato. È anche importante adottare misure di sicurezza appropriate durante la manipolazione del DMBA, che è cancerogeno.

Prima di iniziare l'esperimento, ospita eventuali topi aggressivi di sette o nove settimane in gabbie separate per evitare combattimenti e lesioni cutanee. Per l'induzione del papilloma cutaneo, prima radere le pelli della schiena degli animali da esperimento e pesare i topi individualmente. 48 ore dopo la rasatura, utilizzare una pipetta per applicare 50 microgrammi di DMBA in 200 microlitri di acetone sull'area rasata di ogni topo anestetizzato.

Per la promozione del papilloma cutaneo, sette giorni dopo l'applicazione DMBA trattare la pelle con cinque microgrammi di TPA in 200 microlitri di acetone due volte a settimana fino alla fine dell'esperimento. Esamina gli animali per papillomi e fotografa e registra le dimensioni di ogni singolo papilloma su una mappa ogni settimana. Una massa palpabile di diametro superiore a un millimetro è considerata un papilloma se rimane più lunga di una settimana.

Quando la risposta tumorale raggiunge un plateau, raccogliere il materiale campione appropriato dagli animali 24 ore dopo l'ultima applicazione TPA e raccogliere pezzi di pelle a pieno spessore per l'analisi immunoistochimica. Utilizzare un punzone di biopsia per raccogliere pezzi di pelle da campioni di papilloma e pelle non papilloma per l'espressione genica e o anaylses proteici e utilizzare un bisturi per raccogliere pezzi da papilloma e pelle non papilloma per l'analisi immunoistochimica. Quindi raccogliere i linfonodi drenanti della pelle e un pezzo della milza per l'analisi citometrica del flusso come desiderato.

Una differenza statisticamente significativa nel tempo libero del papilloma e nel numero di papillomi tra i gruppi sperimentali è tipicamente osservata nel modello tumorale TPA DMBA. Le analisi istologiche sono adatte per studiare la struttura dei papillomi, la morfologia della pelle o l'infiltrazione di cellule immunitarie di interesse. È essenziale applicare il DMBA e il TPA in modo uniforme sulla pelle e applicare il TPA a intervalli costanti.

È anche importante contare regolarmente i papillomi. I meccanismi che influenzano il numero e il tempo della formazione tumorale possono essere studiati utilizzando diversi metodi, tra cui immunoistochimica, citometria del flusso, PCR quantitativa e analisi proteica. Questa tecnica convenzionale può essere facilmente adattata e applicata per studiare gli effetti di diversi geni, fattori ambientali o terapie di interesse sull'iniziazione e la progressione del tumore.

È necessaria cautela quando si esegue la tecnica poiché il DMBA è cancerogeno e l'acetone evapora rapidamente. Si consiglia una maschera respiratoria adatta e l'uso dell'armadio a flusso.