Name: Modello di carcinogenesi cutanea indotta dalla sostanza chimica utilizzando Dimethylbenz a Anthracene e 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-12-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 12 s
Description: Scopri il modello di carcinogenesi cutanea a due stadi con DMBA e TPA per studiare l'inflamazione e la progressione tumorale. Questo metodo permette di analizzare l'angiogenesi e il sistema immunitario nel cancro della pelle.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato finanziato dall'Accademia di Finlandia (concede 25013080481 e 25013142041 (I.J.), 286377 e 295814 (M.P.), 287907 (T.J.)), P'ivikki e Sakari Sohlberg Foundation (M.P.), T.J.), Finnish Medical Foundation (T.P.), The Competitive State Research (Fondazione Medica Finlandese) (T.P.), The Competitive State Research (Fondazione Medica Finlandese) Finanziamento dell'Expert Responsibility Area of Tampere University Hospital (grant 9V049 e 9X044 (M.P.), 9X011 e 9V010 (T.J.), The Competitive State Research Financing of the Expert Responsibility Area of Fimlab Laboratories (Grant X51409 (I.J.)), Tays Fondazione di sostegno (I.J., M.P., T.J.), Tampere Tuberculosis Foundation (I.J., M.P., T.J.), la Fondazione Culturale Finlandese (M.V.), la Fondazione Paulo (T.P.), la Cancer Society of Finland (M.P.) e la Fondazione Emil Aalton (T.P.).

Il protocollo qui descritto è stato approvato dal Comitato Nazionale Per l'Etica animale della Finlandia (numero di protocollo ESAVI/23659/2018).
1. Animali sperimentali, reagenti e attrezzature
<ol><li>Usa l'età e i topi abbinati al sesso. Iniziare lo studio a 7-9 settimane di età, perché la pelle nella maggior parte dei topi è in telogen (la fase di riposo) intorno a quell'età2.</li>
	<li>Osservare il comportamento degli animali durante lo studio e se combattono, che spesso accade con i maschi, ospitarli separatamente. I combattimenti possono causare tagli nella pelle, che promuovono la formazione del tumore. I topi femminili sono preferiti a causa del loro comportamento meno aggressivo. La dimensione tipica del gruppo sperimentale varia tra 8-20 animali per gruppo24,25,26,27. NOTA: I calcoli di potenza basati sulla varianza biologica osservata negli studi precedenti aiutano a scegliere una dimensione di gruppo sufficientemente grande. I ceppi utilizzati come esempi in questo articolo includono Balb/c e C57BL/6. Tuttavia, molti altri ceppi di mouse come SENCAR e FVB sono stati utilizzati con il modello DMBA-TPA, così come i ratti Wistar e Sprague-Dawley2,28,29. Prima dell'inizio dello studio è necessaria una licenza del comitato nazionale o locale per il lavoro sugli animali. Oltre alle considerazioni generali sul benessere, gli endpoint specifici del modello sono in genere il carcinoma a cellule squamose (SCC) e un'infezione della pelle. Graffi nella pelle a causa di prurito dopo l'applicazione delle sostanze chimiche tumorigene in acetone è tipico, ma per il resto gli animali dovrebbero non mostrare segni di disagio. La pesatura regolare (ad esempio, 2 volte al mese) aiuta a valutare il benessere degli animali.</li>
	<li>Utilizzare il DMBA e il TPA, entrambi diluiti in acetone. La concentrazione di lavoro di DMBA è di 250 g/L. Una dose per un animale è di 50 g di DMBA in 200 -L di acetone. La concentrazione di magazzino di TPA è di 125 g/L e la concentrazione di trattamento 25 g/L. Una dose di TPA per un animale è di 5 g in 200 l di acetone. PRUDENTE: DMBA è dannoso se ingerito e può causare il cancro. L'acetone evapora rapidamente ed è infiammabile. Può causare vertigini e irritare gli occhi. Utilizzare una maschera di respirazione e/o lavorare sotto un flusso di vuoto. Cambiare i guanti dopo aver maneggiato una qualsiasi di queste sostanze chimiche. Le gabbie ventilate individualmente impediscono la diffusione delle sostanze chimiche durante l'alloggiamento dei topi. Dopo l'applicazione, raccogliere le punte pipette utilizzate per la gestione del DMBA e smaltire come rifiuti pericolosi. NOTA: Il DMBA deve essere protetto dalla luce. Il TPA diluito è immagazzinato in -20 gradi centigradi, preferibilmente protetto dalla luce.</li>
	<li>Procurare la seguente attrezzatura: una scala, un rasoio ordinario per la pelliccia, pipette e punte di dimensioni appropriate, un righello ordinario, una fotocamera digitale, un blocco note e una penna o un computer per la registrazione dei papillomi, un sistema di anestesia inalato o un restrainer per topi con un'apertura sul piano posteriore, e un sistema di narcosi di anidride carbonica per sacrificare i topi.</li>
</ol>2. Skin Papilloma Induzione e promozione
<ol><li>Rasare la pelle posteriore e pesare l'animale. Successivamente, radere la pelle quando necessario, ma non al momento dell'esposizione chimica. NOTA: Fare attenzione quando la rasatura intorno ai papillomi ed evitare di fare eventuali tagli sulla pelle. Pesare ogni animale ogni 2 settimane per notare qualsiasi potenziale perdita di peso.</li>
	<li>Applicare 50 g di DMBA in 200 -L di acetone topicamente sulla zona rasata utilizzando una pipetta 48 h dopo aver rasato la pelliccia. Se necessario, trattenere l'animale usando anestesia per inalazione leggera o un restrainer per topi.</li>
	<li>Dopo 7 giorni, dare la prima dose tPA. Applicare il 5o g di TPA in 200 -L topically con una pipetta 2 volte a settimana, preferibilmente lunedì e giovedì o martedì e venerdì.</li>
	<li>Conta, registra e fotografa i papillomi ogni settimana. Una massa palpabile di 1 mm di diametro è considerata un papilloma se rimane più lunga di 1 settimana. Segna ogni singolo papilloma su una mappa ed elenca le sue dimensioni ogni settimana. Memorizzare fotografie digitali.</li>
</ol>3. Sacrificio animale e collezione di campioni
<ol><li>Continuare il trattamento fino a quando la risposta del tumore raggiunge un altopiano. Generalmente, il carico di papilloma dovrebbe aumentare 10-20 settimane dopo l'avvio, a seconda del ceppo del topo utilizzato. L'altopiano è atteso tra 15-20 settimane. Una piccola parte dei papillomi (sotto il 3%) possono svilupparsi in CCN entro 20-50 settimane2.</li>
	<li>Sacrificare gli animali 24 h dopo l'ultima applicazione TPA. Utilizzare la narcosi di anidride carbonica con lussazione cervicale o un altro metodo adatto.</li>
	<li>A seconda della domanda di ricerca, raccogliere il materiale campione appropriato dagli animali30,31.<ol>
<li>Ad esempio, prelevare campioni di sangue prima di sacrificarsi e separare il plasma.</li>
		<li>Tagliare pezzi della pelle per la colorazione immunoistochimica (IHC) (ad esempio, ematossialina ed eosina, cellule proliferanti o infiammatorie).</li>
		<li>Utilizzare punzoni di biopsia per raccogliere pezzi di pelle con tessuto papilloma o pelle non papilloma (trattata) per l'espressione genica (ad esempio, qPCR) e/o analisi proteiche (ad esempio, macchia occidentale o ELISA).</li>
		<li>Raccogliere un pezzo dei linfonodi che drenano la milza e della pelle per l'analisi della citometria del flusso se si desidera un'analisi più dettagliata delle popolazioni di cellule immunitarie. È inoltre possibile separare gli strati epidermici e dermici per ulteriori analisi.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Statistiche
<ol><li>Disegna una curva di sopravvivenza Kaplan-Meier del tempo senza papilloma e usa il test di rango di log Mantel-Cox per la sopravvivenza. Disegnare una curva lineare del numero di papillomi a settimana. Poiché si tratta di dati di conteggio, utilizzare un modello di regressione non lineare. Se necessario, consultare uno statistico.</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Il cancro della pelle indotta da DMBA-TPA è uno dei modelli tumorali più comunemente usati perché è altamente riproducibile e fornisce informazioni sulla progressione del tumore dall'inizio alla malignità. La misura dei risultati chiave, la formazione del papilloma, è facilmente e in modo affidabile quantitativo. Il modello affronta sia l'inizio tumorale (sopravvivenza senza tumore) che la progressione (numeri e dimensioni del tumore) contemporaneamente. Il modello è adatto per studiare diversi composti, come potenziali ...

Il cancro è una delle principali cause di morte nel mondo. Pertanto, vi è la richiesta di sviluppare modelli di malattia sperimentale affidabili per ottenere una migliore comprensione della malattia e per esplorare potenziali approcci terapeutici. Uno dei modelli sperimentali in vivo più comunemente utilizzati per studiare lo sviluppo del cancro della pelle è il modello di carcinogenesi cutanea a due stadi indotto chimicamente1,2. Il modello fornisce uno strumento per studiare l'inizio del tumore, la promozione e la progressione, oltre a eventi specifici come l'infiltrazione delle cellule immunitarie e l'angiogenesi.
Per utilizzare il modello di carcinogenesi cutanea a due stadi, la pelle posteriore dei topi viene trattata con due diverse sostanze chimiche che insieme inducono la formazione del tumore. Il modello viene avviato con una dose bassa del mutageno, DMBA, seguita da un'esposizione prolungata al promotore del tumore, TPA3 (Figura 1). DMBA muta il DNA in modo casuale formando addotti covalenti con il DNA delle cellule epidermiche e delle cellule staminali primarie cheratinociti4,5,6,7. Alcune di queste mutazioni casuali avvengono in un proto-oncogene, come Hras1 (vengono rilevate anche mutazioni in Kras e Nras) e la conversione dei proto-oncogeni in oncogeni guida la formazione del tumore sotto stimoli adeguati. TPA, a sua volta, è l'agente di promozione della crescita del tumore più comunemente usato. Il suo obiettivo molecolare è la chinasi proteica C (PKC)8. TPA attiva anche la segnalazione Wnt/z-catenin che è cruciale per la formazione del tumore nel modello9. L'esposizione ripetuta e prolungata all'agente promotore porta a una migliore segnalazione cellulare, a una maggiore produzione di fattori di crescita e a una reazione infiammatoria locale, che sono evidenti a causa di una maggiore sintesi del DNA e infiltrazione infiammatoria delle cellule nella pelle trattata.
I principali mediatori infiammatori nel modello DMBA-TPA sono stati identificati10. L'interleucina-17A (IL-17A) è noto per essere particolarmente cancerogeno nel modello DMBA-TPA11,12. Lavora in sinergia con l'interleuchino 6 (IL-6) e partecipa al reclutamento di macrofagi e neutrofi13,14. Inoltre, CD4- cellule T e neutrofili hanno dimostrato di essere cancerogeni nel modello DMBA-TPA. Infine, i macrofagi possono anche promuovere la tumorigenesi nel modello15,16,17.
Durante la fase di promozione, la proliferazione cellulare delle cellule mutate è migliorata e un'iperplasia sostenuta dell'epidermide viene mantenuta1. Questo porta allo sviluppo del papilloma nella pelle in 10-20 settimane, dopo di che i papillomi iniziano a convertirsi in tumori maligni, carcinomi a cellule squamose (SCC)2. Tuttavia, meno del 10% dei papillomi progredisce verso la malignità, anche se questa percentuale dipende anche dal background genetico dei topi2,18. Per decenni non si sapeva quale tipo di cellule fossero inizialmente mutate nei tumori che portavano alla malignità, anche se alcuni studi avevano riportato caratteristiche chiaramente distinte nei tumori maligni rispetto ai papillomi benigni19,20. Tuttavia, studi recenti hanno notevolmente aumentato la nostra comprensione sull'origine clonale della formazione del tumore nel modello DMBA-TPA21. 22. 23.È stato dimostrato che sia le cellule epiteliali derivate dal midollo osseo che le cellule staminali del follicolo pilifero contribuiscono alla formazione del tumore22. Studi di tracciamento del lignaggio specifico dello stadio hanno svelato che i papillomi benigni sono di origine monoclonale, ma reclutano nuove popolazioni di cellule epiteliali21,23. Tuttavia, solo uno dei cloni cellulari funziona come conducente della carcinogenesi; contiene una mutazione Hras23. La progressione verso la formazione di carcinoma è associata a uno sweep clonale23.
Il DMBA cancerogeno avvia la formazione del papilloma e il TPA promuove la crescita del tumore. Quindi, l'inizio del tumore può essere studiato separatamente dalla promozione interrompendo l'esperimento prima del periodo di trattamento TPA. Come la progressione del tumore è studiato settimanalmente offre una grande opportunità per l'analisi dettagliata della crescita del tumore in tutto lo studio. Poiché i tumori sono generati da sostanze chimiche esterne, una mutazione oncogenica nella linea germinale non è necessaria. Così, lo studio degli effetti di un background genetico (ad esempio, knockout/transgene vs tipo selvaggio) sulla tumorigenesi è semplice2. In sintesi, il modello di cancro della pelle DMBA/TPA è un approccio particolarmente utile per studiare il ruolo del sistema immunitario nella progressione tumorale, nonché per la valutazione delle fasi di avvio e promozione del tumore in modo indipendente o interdipendente.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60445/60445fig1a.jpg"> Figura 1: contorno del modello di carcinogenesi cutanea indotta da DMBA-TPA. La DMBA cancerogena è applicata topicamente per indurre mutazioni del DNA nella fase di avvio del modello. L'agente di promozione della crescita TPA viene somministrato 2volte a settimana per migliorare la proliferazione cellulare durante la fase di promozione, portando allo sviluppo di papillomi nella pelle. Gli animali vengono sacrificati dopo che la risposta al papilloma raggiunge un altopiano, di solito entro settimane 15-20, a seconda del background genetico dei topi. Una piccola parte dei papillomi può svilupparsi ulteriormente in CCN entro 20-50 settimane. Per studiare i primi eventi nella fase di avvio e promozione precoce, è possibile raccogliere campioni (ad esempio, poco dopo la seconda applicazione TPA). Una fotografia rappresentativa e ematossilina e eosina macchiato sezione trasversale di papillomi su una pelle di topo C57BL/6 dopo 19 settimane di trattamento sono mostrati. Barra di scala - 0,1 mm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60445/60445fig1large.jpg" target="_blank">Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.</a>

<table><tbody><tr><td>1000 ul RPT XL Puntale Filtrante Graduato (Sterile), Ricarica</td><td>Starlab</td><td>S1182-1730-C</td><td></td></tr><tr><td>300 ul RTP Puntale Filtrante Graduato (sterile), Ricarica</td><td>Starlab</td><td>S1180-9710-C</td><td></td></tr><tr><td>7,12-Dimetilbenz[a]antracene (DMBA)</td><td>Sigma</td><td>D3254-100MG</td><td>Dannoso se ingerito e può causare il cancro. Conservare al riparo dalla luce.</td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Sigma</td><td>1000141011</td><td>Evapora rapidamente ed è infiammabile.</td></tr><tr><td>Attane vet 1000 mg/g</td><td>Piramal Critical Care Limited</td><td></td><td>Isoflurano liquido per inalazione</td></tr><tr><td>Clipper a batteria Isis</td><td>Albert Kerlb GmbH</td><td>GT421</td><td>Per la rasatura della pelliccia</td></tr><tr><td>CONTRAfluran-Restgasfilter</td><td>ZeoSys GmbH</td><td></td><td>Per anestesia</td></tr><tr><td>Linex Nature N1030 Righello 30 cm</td><td>Graffe Business Advantage</td><td>60383</td><td>Per misurare i</td></tr> <tr><td>papillomiCamera di CO2 media 300 x 200 x 200 mm - Red</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN045AR</td><td>Per sacrificio</td></tr><tr><td>Mekasoft</td><td>Mekalasi</td><td>23008</td><td>Copritavolo</td></tr><tr><td>Topi (Balb/c JRj)</td><td>Janvier labs</td><td></td><td>Altri ceppi possibili anche</td></tr><tr><td>Topi (C57BL/6JRj)</td><td>Janvier labs</td><td></td><td>Altri ceppi possibili anche</td></tr><tr><td>Panasonic Lumix DMC-FS5 Fotocamera digitale</td><td>Panasonic</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeide</td><td>Merck</td><td>30525-89-4</td><td>Per campioni istologici</td></tr><tr><td>Phorbol 12-miristate 13-acetato aka 12-Otetradecanoylphorbol-13-acetato (TPA)</td><td>Enzo</td><td>BML-PE160-0001</td><td></td></tr><tr><td>Bilancia di precisione PLJ-C/PLJ-G</td><td>KERN & SOHN GmbH</td><td>PLJ 600-3CM</td><td></td></tr> Sistema <tr><td>di CO2 preimpostato-2 Camera-Alloggiamento in acciaio inox</td><td>VetTech Solutions Ltd</td><td>AN044BX</td><td>Per il sacrificio</td></tr><tr><td>RNAlater</td><td>Qiagen</td><td>76104</td><td>Per campioni di acido nucleico</td></tr><tr><td>Pipetta Tacta 100-1000 ul</td><td>Sartorius</td><td>LH-729070</td><td></td></tr><tr><td>Pipetta Tacta 20-200 ul</td><td>Sartorius</td><td>LH-729060</td><td></td></tr><tr><td>UNO Riempitivo per chiavi anestesiologiche</td><td>Strumentazione Scintica inc.</td><td></td><td>Per anestesia</td></tr><tr><td>Maschera facciale UNO per</td><td>strumentazione Mouse Scintica inc.</td><td></td><td>Per anestesia</td></tr><tr><td>UNO FM2200 Flussimetro</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Per anestesia</td></tr><tr><td>Unità di scarico gas UNO</td><td>Strumentazione Scintica inc.</td><td></td><td>Per anestesia</td></tr><tr><td>UNO Induction Box</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Per anestesia</td></tr><tr><td>UNO200VAP Vaporizzatore</td><td>Scintica instrumentation inc.</td><td></td><td>Per anestesia</td></tr></tbody></table>

modello di carcinogenesi cutanea indotta dalla sostanza chimica utilizzando dimethylbenz[a]anthracene e 12-o-tetradecanoyl phorbol-13-acetate (dmba-tpa)

Chemical-Induced Skin Carcinogenesis Model Using Dimethylbenz[a]Anthracene and 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

Il cancro è una delle malattie umane più devastanti. I modelli sperimentali di cancro sono importanti per ottenere informazioni sulla complessa interazione di diversi tipi di cellule e geni nella promozione della progressione tumorale e per fornire una piattaforma per testare l'efficacia di diversi approcci terapeutici. Uno dei modelli di carcinogenesi infiammatoria sperimentale più comunemente utilizzati è il modello di carcinogenesi cutanea a due stadi DMBA-TPA. La formazione del tumore è indotta in questo modello dall'applicazione topica di due diverse sostanze chimiche, 7,12-dimethylbenz[a]anthracene (DMBA) e 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetato (TPA), che insieme causano formazione di papilloma nella pelle. Poiché il risultato principale è la formazione di papilloma nella pelle, il modello è un modo ideale, affidabile e riproducibile per affrontare sia l'inizio del tumore (sopravvivenza senza tumore) che la progressione del tumore (numero e dimensione dei tumori visibili). Gli effetti del trattamento DMBA-TPA sono trasmessi attraverso un meccanismo infiammatorio, che rende questo modello particolarmente adatto per studiare il ruolo del sistema immunitario nella formazione del tumore. Tuttavia, questo modello è limitato alla pelle e ad altre superfici su cui possono essere applicate le sostanze chimiche. In questo articolo viene fornito un protocollo dettagliato per utilizzare correttamente il modello.

Il risultato principale è il tempo di sopravvivenza (cioè senza papilloma) tra i gruppi di trattamento o genotipi. Il risultato secondario è il numero di papillomi a settimana in ogni gruppo (Figura 2). I risultati attesi sono una differenza statisticamente significativa nel tempo libero del papilloma e nel numero di papillomi tra i gruppi sperimentali (due o più). Si raccomanda di contare il numero di papillomi e disegnare una curva durante la fase di promozione (TPA) per avere un'idea dell...

La carcinogenesi cutanea a due stadi è indotta da due sostanze chimiche applicate topicamente. Un mutagen 7,12-dimethylbenz[a]anthracene) provoca mutazioni nelle cellule epidermiche e una continua applicazione dello stimolatore di crescita generale 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetato accelera la formazione di papilloma cutaneo.

Modello di carcinogenesi cutanea indotta dalla sostanza chimica utilizzando Dimethylbenz[a]Anthracene e 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

Cancer is one of the most devastating human diseases. Experimental cancer models are important to gain insight into the complex interplay of different ...

Questo modello di cancro della pelle in due fasi consente lo studio del ruolo dell'infiammazione nel cancro della pelle e consente allo studio l'iniziazione del tumore come processo separato dalla progressione tumorale. La formazione tumorale in questo modello è indotta chimicamente e consente l'uso di ceppi knockout per studiare gli effetti di fattori ambientali o candidati terapeutici. Il modello è adatto per studiare il ruolo del sistema immunitario e l'angiogenesi nel cancro.Dimostra una patologia della malattia simile al carcinoma a cellule squamose nei pazienti umani. Sebbene questo metodo sia relativamente facile da condurre, è essenziale un tempismo accurato. È anche importante adottare misure di sicurezza appropriate durante la manipolazione del DMBA, che è cancerogeno.Prima di iniziare l'esperimento, ospita eventuali topi aggressivi di sette o nove settimane in gabbie separate per evitare combattimenti e lesioni cutanee. Per l'induzione del papilloma cutaneo, prima radere le pelli della schiena degli animali da esperimento e pesare i topi individualmente. 48 ore dopo la rasatura, utilizzare una pipetta per applicare 50 microgrammi di DMBA in 200 microlitri di acetone sull'area rasata di ogni topo anestetizzato.Per la promozione del papilloma cutaneo, sette giorni dopo l'applicazione DMBA trattare la pelle con cinque microgrammi di TPA in 200 microlitri di acetone due volte a settimana fino alla fine dell'esperimento. Esamina gli animali per papillomi e fotografa e registra le dimensioni di ogni singolo papilloma su una mappa ogni settimana. Una massa palpabile di diametro superiore a un millimetro è considerata un papilloma se rimane più lunga di una settimana.Quando la risposta tumorale raggiunge un plateau, raccogliere il materiale campione appropriato dagli animali 24 ore dopo l'ultima applicazione TPA e raccogliere pezzi di pelle a pieno spessore per l'analisi immunoistochimica. Utilizzare un punzone di biopsia per raccogliere pezzi di pelle da campioni di papilloma e pelle non papilloma per l'espressione genica e o anaylses proteici e utilizzare un bisturi per raccogliere pezzi da papilloma e pelle non papilloma per l'analisi immunoistochimica. Quindi raccogliere i linfonodi drenanti della pelle e un pezzo della milza per l'analisi citometrica del flusso come desiderato.Una differenza statisticamente significativa nel tempo libero del papilloma e nel numero di papillomi tra i gruppi sperimentali è tipicamente osservata nel modello tumorale TPA DMBA. Le analisi istologiche sono adatte per studiare la struttura dei papillomi, la morfologia della pelle o l'infiltrazione di cellule immunitarie di interesse. È essenziale applicare il DMBA e il TPA in modo uniforme sulla pelle e applicare il TPA a intervalli costanti.È anche importante contare regolarmente i papillomi. I meccanismi che influenzano il numero e il tempo della formazione tumorale possono essere studiati utilizzando diversi metodi, tra cui immunoistochimica, citometria del flusso, PCR quantitativa e analisi proteica. Questa tecnica convenzionale può essere facilmente adattata e applicata per studiare gli effetti di diversi geni, fattori ambientali o terapie di interesse sull'iniziazione e la progressione del tumore.È necessaria cautela quando si esegue la tecnica poiché il DMBA è cancerogeno e l'acetone evapora rapidamente. Si consiglia una maschera respiratoria adatta e l'uso dell'armadio a flusso.

chemical-induced-skin-carcinogenesis-model-using

Research

Ricerca

JoVE Journal

Cancer Research

Ricerca sul cancro

Dimostriamo un protocollo in cui somministrazione del azoxymethane agente genotossico (AOM) seguito da tre cicli di pro-infiammatoria agente destrano solfato di sodio (DSS) rapidamente e genera costantemente tumori del colon in topi con somiglianze morfologiche e molecolari a quelli osservati negli colite umana cancro-associata.

Modellazione Colite-Associated Cancro con azoxymethane (OMA) e sodio solfato destrano (DSS)

La terapia fotodinamica (PDT) è un metodo non invasivo e non chirurgico per il trattamento del cancro del polmone. I fotosensibilizzatori si accumulano selettivamente nel tessuto tumorale e portano alla morte delle cellule tumorali in presenza di ossigeno e della corretta lunghezza d'onda della luce. In questo video protocollo, viene utilizzato un metodo basato sulla PDT per valutare il potenziale fototossico di un potenziale fotosensibilizzatore nelle cellule di cancro del polmone.

Saggio di fototossicità in vitro: un metodo basato sulla PDT per valutare il potenziale fototossico di un fotosensibilizzatore nelle cellule di cancro del polmone

Questo video descrive la procedura per indurre la carcinogenesi cutanea in due fasi per studiare l'inizio del tumore mediante l'applicazione topica di sostanze chimiche. Nella prima fase, un mutageno, DMBA, viene applicato sulla pelle di un modello murino che avvia la formazione del tumore causando mutazioni nelle cellule staminali, seguito dall'applicazione di uno stimolatore della crescita, TPA, che accelera la formazione del papilloma cutaneo.

Modello di cancerogenesi cutanea in due stadi indotta da sostanze chimiche: un modello murino sperimentale in vivo di cancro della pelle

Questo video descrive un metodo per misurare la sensibilità ai raggi UV in un modello murino umanizzato, un modello murino che imita la pelle umana. Determiniamo la dose eritematosa minima (MED) di radiazioni UV che possono causare eritema o edema sulla pelle. Il metodo può aiutare a scoprire l'efficacia dei farmaci utilizzati per ridurre la sensibilità ai raggi UV.

Saggio della dose eritematosa minima: un metodo per misurare la sensibilità ai raggi UV nei modelli murini

Carcinogenesi è un processo che coinvolge le interazioni tra cellule tumorali e il microambiente cancro. Per sezionare gli eventi molecolari, si ha la necessità di isolare diverse popolazioni di cellule in diverse fasi durante lo sviluppo del cancro. Utilizzando un modello murino di carcinoma a cellule basali, si descrive un protocollo per l'analisi di cellule durante la carcinogenesi.

Analisi popolazione cellulare Durante carcinogenesi della pelle

Melanina epidermica è indotta mediante applicazione topica di forskolina in un modello murino di umano UV-sensitive pelle chiara. Manipolazione farmacologica dei livelli di cAMP nella pelle e dell'epidermide oscuramento fortemente a proteggere contro l'infiammazione UV-mediata (scottature), come misurato dalla dose minima eritematosa (MED) dosaggio.

Induzione farmacologica di melanina epidermica e di protezione contro le scottature in un modello di topo umanizzato

Questo protocollo descrive una tecnica di trasferimento di carico bisturi-colorante fluorescente che misura la comunicazione intercellulare attraverso i canali gap junction. Gap giunzionale comunicazione intercellulare è un importante processo cellulare attraverso il quale l'omeostasi tissutale è mantenuto e la rottura di questa segnalazione cellulare ha effetti negativi sulla salute.

Spazi di giunzione intercellulare di comunicazione: un biomarker funzionale per valutare gli effetti avversi dei tossici e tossine, e benefici per la salute di prodotti naturali

Qui presentiamo un protocollo per isolare le cellule delle isole pancreatiche del mouse per lo screening di induzioni ROS dai xenobiotici al fine di identificare i potenziali prodotti chimici xenobiotici diabetogeni.

Uno Screening basati su cellule dell'isolotto pancreatico murino per prodotti chimici ambientali diabetogeni

La seguente procedura descrive un metodo per il controllo spaziale e temporale dell'iniziazione tumorale melanocitica nella pelle dorsali murina, utilizzando un modello di topo geneticamente modificato. Questo protocollo descrive l'iniziazione macroscopica e microscopica del melanoma cutaneo.

Controllo spaziale e temporale dell'iniziazione del melanoma murino dalle cellule staminali di melanociti mutanti

Lo scopo di questo protocollo è quello di indurre la produzione transitoria in vivo di livelli non letali di specie reattive dell'ossigeno (ROS) nella pelle del topo, promuovendo ulteriormente le risposte fisiologiche nel tessuto.

Stimolazione di nicchie di cellule staminali e rigenerazione tissutale nella pelle di topo mediante fotogenerazione commutabile protoporfirina IX-dipendente di specie reattive dell'ossigeno in situ

Un protocollo standardizzato per indurre la senescenza prematura negli HNM utilizzando tBHP, protocolli standardizzati per l'analisi dei principali marcatori di senescenza, inclusi arresto della crescita, attività SA-β-galactosidasi e fattori SASP.

Un protocollo standardizzato per l'indotta della senescenza prematura indotta dallo stress nei melanociti umani primari utilizzando idroperossido di tert-butil

Scopri il modello di carcinogenesi cutanea a due stadi con DMBA e TPA per studiare l'inflamazione e la progressione tumorale. Questo metodo permette di analizzare l'angiogenesi e il sistema immunitario nel cancro della pelle.

Modello di carcinogenesi cutanea indotta dalla sostanza chimica utilizzando Dimethylbenz a Anthracene e 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA) (Video) | JoVE Journal

Modello di carcinogenesi cutanea indotta dalla sostanza chimica utilizzando Dimethylbenz[a]Anthracene e 12-O-Tetradecanoyl Phorbol-13-Acetate (DMBA-TPA)

Esplora altri video