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DOI: 10.3791/63130-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for the stepwise reconstitution of synthetic antigen-presenting cells using Bead-Supported Lipid Bilayers (BSLBs). These BSLBs are utilized to investigate the synaptic output from activated T cells, expanding the tools available for immunological research.
Qui presentiamo il protocollo per la ricostituzione graduale di cellule sintetiche che presentano antigene utilizzando Bead-Supported Lipid Bilayers e il loro uso per interrogare l'output sinaptico dalle cellule T attivate.
Lo studio della produzione della sinapsi immunitaria è stato limitato principalmente a metodi microscopici. I BSLB hanno ampliato il nostro repertorio di strumenti che possono essere utilizzati per studiare l'output delle sinapsi immunitarie delle cellule T, tra cui citometria a flusso, microscopia, proteomica e tecnologie di sequenziamento dell'RNA. Come tale, i BSLB possono essere utilizzati in un'ampia varietà di domande di immunologia e nell'identificazione della composizione e della regolazione biochimica dell'output delle cellule T.
Ciò include, ad esempio, lo studio dei recettori dell'antigene chimerico, i farmaci che inibiscono specifiche vie di segnalazione o l'ablazione genetica dei geni di interesse. Uno degli aspetti più critici di questo protocollo è l'ottimizzazione delle calibrazioni proteiche e del pannello di citometria a flusso multicolore necessario per tracciare la particella trans-sinaptica di interesse. Ciò richiede l'iterazione sistematica delle concentrazioni proteiche, delle concentrazioni di anticorpi e delle impostazioni dello strumento.
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