Componenti essenziali di Borreliella (Borrelia) burgdorferi Saggi di trascrizione in vitro

Il sistema di saggio di trascrizione in vitro per Borreliella burgdorferi fornisce uno strumento biochimico per i ricercatori per studiare i meccanismi di regolazione genica e i fattori che governano l'attività enzimatica della RNA polimerasi. Il sistema ci consente di testare come i fattori di trascrizione, i cofattori, le concentrazioni di sale e il pH influiscono sulla funzione della Borreliella burgdorferi RNA polimerasi, che contribuisce alla nostra comprensione complessiva dei meccanismi di regolazione genica. Questa potente tecnica può anche permetterci di selezionare farmaci che inibiscono selettivamente la RNA polimerasi, aprendo la porta allo sviluppo di nuovi farmaci per il trattamento della borreliosi di Lyme.

Per iniziare, raccogliere il pellet cellulare da due a quattro litri di Borreliella burgdorferi RpoC-His10X coltivato in mezzo BSKII in un ambiente microaerofilo ad una densità da due a quattro volte 10 costante per millilitri. Pellet le celle a 10.000 volte G per 30 minuti a quattro gradi Celsius in bottiglie centrifughe da 500 millilitri e scartare il surnatante. Quindi, risospendere le cellule in 30 millilitri di tampone HN ghiacciato, ripetere la fase di centrifugazione e decantare il surnatante.