Valutazione dell'attività di riparazione della rottura del doppio filamento del DNA utilizzando saggi reporter ad alto rendimento e quantitativi basati sulla luminescenza
Assessment of DNA Double Strand Break Repair Activity Using High-throughput and Quantitative Luminescence-Based Reporter Assays
Valutazione dell'attività di riparazione della rottura del doppio filamento del DNA utilizzando saggi reporter ad alto rendimento e quantitativi basati sulla luminescenza
Artios sta sviluppando nuovi farmaci antitumorali mirati alla risposta al danno del DNA. A tal fine, abbiamo sviluppato una serie di nuovi saggi per misurare l’attività di riparazione del DNA cellulare. Questi test hanno avuto un impatto importante sui nostri programmi, portando a testare le risorse in fase clinica in pazienti con elevate esigenze mediche insoddisfatte.
Misurare con precisione l’attività cellulare sul bersaglio è essenziale per far progredire nuove terapie mirate. La generazione di saggi per i fattori di riparazione del DNA con le proprietà necessarie per alimentare un’efficiente campagna di scoperta di farmaci è stata una sfida, sia che si tratti di un elevato rendimento, di un robusto rapporto segnale-rumore, di una rapida inversione di tendenza e, idealmente, di una portabilità in diversi sistemi biologici. Abbiamo sviluppato una serie di saggi reporter robusti, quantitativi e titolabili basati sulla luminescenza per misurare la competenza di quattro principali percorsi di riparazione a rottura a doppio filamento, ricombinazione omologa, giunzione di estremità non omologa, giunzione di estremità mediata da microomologia e ricottura a singolo filamento.
Questi saggi reporter sono convalidati come lettura della riparazione dipendente dal percorso, sono sensibili alla modulazione farmacologica e hanno un tempo di risposta rapido. I substrati di riparazione che abbiamo sviluppato sono extracromosomici, quindi possono essere trasfettati transitoriamente in modelli di interesse e facilmente scalati in un formato ad alto rendimento. Riteniamo che i nostri sistemi di analisi abbiano un ruolo importante nel consentire la scoperta di farmaci DDR, ma anche nel migliorare la nostra comprensione della biologia DDR in modo più ampio.
A questo proposito, speriamo che i metodi contribuiscano ad accelerare l’identificazione e la prosecuzione di nuovi bersagli farmacologici, portando a farmaci per malattie come il cancro dove c’è un elevato bisogno medico insoddisfatto.
Grande, D., Rajendra, E., Mason, B., Galbiati, A., Boulton, S. J., Smith, G. C. M., Robinson, H. M. R. Assessment of DNA Double Strand Break Repair Activity Using High-throughput and Quantitative Luminescence-Based Reporter Assays. J. Vis. Exp. (208), e66969, doi:10.3791/66969 (2024).