Name: Ottimizzazione dellisolamento e della purificazione delle cellule mesangiali glomerulari murine (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-07T14:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 46 s
Description: Impara un protocollo ottimizzato per l'isolamento e la coltura di cellule mesangiali glomerulari murine con digestione a collagenasi. Questo metodo supporta la ricerca sulle malattie renali e lo sviluppo terapeutico.

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<ol><li>Pollak, M. R., Quaggin, S. E., Hoenig, M. P., Dworkin, L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+glomerulus%3A+The+sphere+of+influence%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The glomerulus: The sphere of influence.</a> Clin J Am Soc Nephrol. 9 (8), 1461-1469 (2014).</li>
<li>Mené, P., Simonson, M. S., Dunn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+the+mesangial+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Physiology of the mesangial cell.</a> Physiol Rev. 69 (4), 1347-1424 (1989).</li>
<li>Avraham, S., Korin, B., Chung, J. J., Oxburgh, L., Shaw, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mesangial+cell+-+the+glomerular+stromal+cell%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Nephrol%22%5BJournal%5D)">The mesangial cell - the glomerular stromal cell.</a> Nat Rev Nephrol. 17 (12), 855-864 (2021).</li>
<li>Chadban, S. J., Atkins, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerulonephritis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Glomerulonephritis.</a> Lancet. 365 (9473), 1797-1806 (2005).</li>
<li>Qian, Y., Feldman, E., Pennathur, S., Kretzler, M., Brosius, F. C. 3rd <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+fibrosis+to+sclerosis%3A+Mechanisms+of+glomerulosclerosis+in+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">From fibrosis to sclerosis: Mechanisms of glomerulosclerosis in diabetic nephropathy.</a> Diabetes. 57 (6), 1439-1445 (2008).</li>
<li>Zhu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Iga+Gut+microbiome+regulates+the+production+of+hypoglycosilated+iga1+via+the+tlr4+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Nephrol+Dial+Transplant%22%5BJournal%5D)">Iga Gut microbiome regulates the production of hypoglycosilated iga1 via the tlr4 signaling pathway.</a> Nephrol Dial Transplant. 39 (10), 1624-1641 (2024).</li>
<li>Kong, L. -L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+murine+models+of+diabetic+nephropathy%5BTitle%5D)+AND+%22J+Diabetes+Res%22%5BJournal%5D)">Advances in murine models of diabetic nephropathy.</a> J Diabetes Res. 2013, 797548(2013).</li>
<li>Schiffer, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+smads+and+tgf-beta+signaling+in+glomerular+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Soc+Nephrol%22%5BJournal%5D)">Inhibitory smads and tgf-beta signaling in glomerular cells.</a> J Am Soc Nephrol. 13 (11), 2657-2666 (2002).</li>
<li>Gyarmati, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sparsentan+improves+glomerular+hemodynamics%2C+cell+functions%2C+and+tissue+repair+in+a+mouse+model+of+FSGS%5BTitle%5D)+AND+%22JCI+Insight%22%5BJournal%5D)">Sparsentan improves glomerular hemodynamics, cell functions, and tissue repair in a mouse model of FSGS.</a> JCI Insight. 9 (19), e177775(2024).</li>
<li>Chafin, C. B., Regna, N. L., Hammond, S. E., Reilly, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+urinary+microRNA+alterations+in+NZB%2FW+mice+with+hydroxychloroquine+or+prednisone+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunopharmacol%22%5BJournal%5D)">Cellular and urinary microRNA alterations in NZB/W mice with hydroxychloroquine or prednisone treatment.</a> Int Immunopharmacol. 17 (3), 894-906 (2013).</li>
<li>Lucero, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tnf-%CE%B1+plus+il-1%CE%B2+induces+opposite+regulation+of+cx43+hemichannels+and+gap+junctions+in+mesangial+cells+through+a+rhoa%2Frock-dependent+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Tnf-α plus il-1β induces opposite regulation of cx43 hemichannels and gap junctions in mesangial cells through a rhoa/rock-dependent pathway.</a> Int J Mol Sci. 23 (17), (2022).</li>
<li>Schnaper, H. W., Hayashida, T., Hubchak, S. C., Poncelet, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tgf-beta+signal+transduction+and+mesangial+cell+fibrogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Renal+Physiol%22%5BJournal%5D)">Tgf-beta signal transduction and mesangial cell fibrogenesis.</a> Am J Physiol Renal Physiol. 284 (2), F243-F252 (2003).</li>
<li>Mackay, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial%2C+mesangial%2C+and+endothelial+cell+lines+from+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Kidney+Int%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial, mesangial, and endothelial cell lines from transgenic mice.</a> Kidney Int. 33 (3), 677-684 (1988).</li>
<li>Wilson, H. M., Stewart, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glomerular+epithelial+and+mesangial+cell+culture+and+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Glomerular epithelial and mesangial cell culture and characterization.</a> Methods Mol Med. 107, 269-282 (2005).</li>
<li>Menè, P., Stoppacciaro, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+propagation+of+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Isolation and propagation of glomerular mesangial cells.</a> Methods Mol Biol. 466, 3-17 (2009).</li>
<li>Gilbert, S. F., Migeon, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((D-valine+as+a+selective+agent+for+normal+human+and+rodent+epithelial+cells+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">D-valine as a selective agent for normal human and rodent epithelial cells in culture.</a> Cell. 5 (1), 11-17 (1975).</li>
<li>Kreisberg, J. I., Venkatachalam, M., Troyer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+properties+of+cultured+glomerular+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Contractile properties of cultured glomerular mesangial cells.</a> Am J Physiol. 249 (4 Pt 2), F457-F463 (1985).</li>
<li>Adam, M., Potter, A. S., Potter, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Psychrophilic+proteases+dramatically+reduce+single-cell+rna-seq+artifacts%3A+A+molecular+atlas+of+kidney+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Psychrophilic proteases dramatically reduce single-cell rna-seq artifacts: A molecular atlas of kidney development.</a> Development. 144 (19), 3625-3632 (2017).</li>
<li>Sadovnic, M. J., Brand-Elnaggar, J., Bolton, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+characterization+of+chicken+mesangial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nephron%22%5BJournal%5D)">Isolation and characterization of chicken mesangial cells.</a> Nephron. 58 (1), 75-84 (1991).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 &micro; m Filtro cellulare</td><td>Biosharp</td><td>BS-100-CS</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri da 100 mm</td><td>Sorfa</td><td>230301</td><td></td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga da 15 mL</td><td>Sorfa</td><td>411000</td><td></td></tr><tr><td>Piastra per coltura cellulare con fondo in vetro da 15 mm</td><td>Sorfa</td><td>201200</td><td></td></tr><tr><td>180 kDa Plus Marcatore proteico prestained</td><td>Vazyme</td><td>MP201-01</td><td></td></tr><tr><td>2 mM L-glutammina</td><td>BasalMedia</td><td>S210JV</td><td></td></tr><tr><td>4% Paraformaldeide</td><td>Biosharp</td><td>BL539A</td><td></td></tr><tr><td>40 &micro; m Filtro cellulare</td><td>Biosharp</td><td>BS-40-XBS</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Tubo da centrifuga</td><td>Sorfa</td><td>41000</td><td></td></tr><tr><td>Piastra di Petri da 60 mm</td><td>Sorfa</td><td>230201</td><td></td></tr><tr><td>75% di alcol</td><td>Knowles</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>96 pozzetti Piastre per colture cellulari, trattate</td><td>con TC Servicebio</td><td>CCP-96H</td><td></td></tr><tr><td>Antibiotici (10 &mu; g/mL di ceftriaxone plus 100 &mu; g/mL gentamicina)</td><td>NCM</td><td>C100C5</td><td></td></tr><tr><td>BCA (acido bicinconinnico) Kit per il dosaggio delle proteine</td><td>CWBIO</td><td>CW0014S</td><td></td></tr><tr><td>Cell Count-8</td><td>Microscopio</td> confocale Oriscience <td>CB101</td><td></td></tr><tr><td></td><td>FV-3000</td><td>Olympus</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Earle Soluzione salina bilanciata (1x EBSS)&nbsp;</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp; C0213</td><td></td></tr><tr><td>Siero fetale bovino (FBS)</td><td>Excell</td><td>FSP500</td><td></td></tr><tr><td>Analizzatore cellulare a fluorescenza</td><td>Mira FL&nbsp;</td><td>Countstar</td><td></td></tr><tr><td>Fluoromount media</td><td>Southern Biotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione di insulina, transferrina, selenio 100x (ITS -G)</td><td>Gibco</td><td>41400045</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio a fluorescenza invertita</td> Tampone per lisi <td>Olympus</td><td>IX83</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Adilab</td><td>PP1101</td><td></td></tr><tr><td>Kit di preparazione PAGE in un solo passaggio (10%)</td><td>Oriscience</td><td>PB102</td><td></td></tr><tr><td>Kit di preparazione PAGE in un solo passaggio (7,5%)</td><td>Oriscience</td><td>PB101</td><td></td></tr><tr><td>PE anti-topo CD140b Anticorpo</td><td>Biolegend</td><td>323605</td><td></td></tr><tr><td>soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>Servicebio</td><td>G4202</td><td></td></tr><tr><td>Pestello cellulare in plastica</td><td>Biofil</td><td>&nbsp; CC-4090</td><td></td></tr><tr><td>Inibitore della proteinasi Cocktail</td><td>Roche</td><td>4693159001</td><td></td></tr><tr><td>Membrana PVDF</td><td>Vazyme</td><td>E802-01</td><td></td></tr><tr><td>Insulina umana ricombinante</td><td>Solarbio</td><td>11061-68-0</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium</td><td>Corning</td><td>10-040-CV</td><td></td></tr><tr><td>SDS-PAGE Tampone di caricamento del campione (5x)</td><td>Servicebio</td><td>G2013</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 Medium (D-valina invece di L-valina)</td><td>Procell</td><td>WH3923U222</td><td></td></tr><tr><td>TBS (Tris Buffered Saline)&nbsp;</td><td>Servicebio</td><td>G0001-2L</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Biosharp</td><td>BS084</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina-EDTA (0,25%)</td><td>Gibco</td><td>25200072</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>Biosharp</td><td>BS100</td><td></td></tr><tr><td>Tipo I collagenasi</td><td>Solarbio</td><td>&nbsp; CB140</td><td></td></tr></tbody></table>

ottimizzazione dell'isolamento e della purificazione delle cellule mesangiali glomerulari murine

Optimizing Isolation and Purification of Murine Glomerular Mesangial Cells

Questo studio ha sviluppato un protocollo ottimizzato per l'isolamento di MC murini e la coltura cellulare ex vivo. Per quanto ne sappiamo, non esiste un metodo standard per la convalida dei MC primari ex vivo. Secondo precedenti pubblicazioni, le MC sono caratterizzate dall'espressione di αSMA, Vimentina e Fibronectina 3,14,15. L'analisi Western blot è stata utilizzata per rilevare i livelli di espressione del...

Ottimizzazione dell'isolamento e della purificazione delle cellule mesangiali glomerulari murine

Mesangial cells (MCs) are stromal cells located in the middle space of the glomerulus, with pivotal functions in glomerular homeostasis. Methods for ...

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Biologia

In questo rapporto si descrive un metodo per l'isolamento e la coltura della nicchia delle cellule progenitrici dal rene embrionali di topo che può essere utilizzato per studiare vie di segnalazione che regolano staminali / progenitrici delle cellule del rene di sviluppo. Queste cellule in coltura sono altamente accessibile a piccole molecole e proteine ​​ricombinanti trattamento, e, cosa importante anche per trasduzione virale, che consente la manipolazione efficiente di percorsi candidato.

Isolamento e coltura di cellule dalla Zona nefrogenica del Rene embrionali di topo

Questo video descrive il metodo per isolare i glomeruli intatti dai reni di topo. I glomeruli incapsulati e decapsulati così ottenuti possono essere ulteriormente utilizzati per la coltura di escrescenze di cellule epiteliali parietali dal rene murino.

Isolamento dei glomeruli: una tecnica per ottenere glomeruli intatti dal rene murino

In questo video, dimostriamo i passaggi per isolare e purificare le cellule epiteliali tubulari renali per un'ampia gamma di studi di biologia molecolare e colture cellulari.

Isolamento di cellule renali mure: una tecnica per isolare e generare colture primarie di cellule epiteliali tubulari renali

Per le applicazioni a valle sono necessarie tecniche affidabili ed efficienti per l'isolamento delle cellule immunitarie renali. Ciò richiede la marcatura degli anticorpi di superficie di un piccolo numero di cellule immunitarie renali. Qui, descriviamo un metodo conciso per l'isolamento delle cellule immunitarie renali che sembra raggiungere questo obiettivo.

Affidabile e di alta efficienza di estrazione del rene cellule immunitarie

Un protocollo per l'isolamento di microglia primaria dal cervello murino è presentato. Questa tecnica aiuta a promuovere la comprensione corrente di condizioni neurologiche. Centrifugazione in gradiente di densità e separazione magnetica sono combinati per produrre sufficiente resa di un campione altamente puro. Inoltre, abbiamo delineare i passaggi per la caratterizzazione di microglia.

Caratterizzazione e isolamento di Mouse Microglia primaria di centrifugazione in gradiente di densità

L'obiettivo principale di questo protocollo è quello di isolare in modo efficiente culture vitale primaria glomeruli con contaminanti minimale per l'uso in una varietà di applicazioni a valle. Glomeruli isolati mantengono relazioni strutturali tra tipi di componenti delle cellule e possono essere coltivate ex vivo per un breve periodo.

Un metodo efficiente di setacciatura per isolare i Glomeruli intatti dal rene di ratto adulto.

Qui presentiamo un protocollo per l'etichettatura dei Murina in vivo delle proteine di superficie delle cellule glomerulari con biotina. Questo protocollo contiene informazioni su come irrorare i reni del mouse, isolare i glomeruli ed eseguire immunoprecipitazione endogena della proteina di interesse.

Isolamento dei Glomeruli e In Vivo di etichettatura delle proteine di superficie delle cellule glomerulari

Abbiamo ottimizzato un protocollo per isolare e purificare i periciti cardiaci murini per la ricerca di base e lo studio del loro potenziale di biologia e terapia.

Isolamento e purificazione dei Periciti Cardiaci Murine

Questo articolo descrive un metodo per coltivare e analizzare le escrescenze glomeriane delle cellule epiteliali glomeriali di glomeruli incapsulati isolati dal rene del topo. Questo metodo può essere utilizzato per studiare i percorsi coinvolti nella proliferazione e migrazione delle cellule epiteliali parietali.

Escrescenza glomerare come un'analisi di Ex Vivo per analizzare i percorsi coinvolti nell'attivazione delle cellule epiteliali Parietali

L'articolo descrive il metodo per isolare cellule endoteliali glomerulari condizionatamente immortalizzate dai reni di topi transgenici che esprimono il virus termolabile delle scimmie 40 e mitocondri fotoattivabili, PhAMasportato. Descriviamo la procedura per l'isolamento dei glomeruli da reni interi usando perline, fasi di digestione, semina e coltura di GEC-CD31 positivi.

Isolamento di cellule endoteliali glomerulari di topo condizionatamente immortalizzate con mitocondri fluorescenti

Impara un protocollo ottimizzato per l'isolamento e la coltura di cellule mesangiali glomerulari murine con digestione a collagenasi. Questo metodo supporta la ricerca sulle malattie renali e lo sviluppo terapeutico.

Ottimizzazione dell'isolamento e della purificazione delle cellule mesangiali glomerulari murine

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