Name: Un metodo semplice ed efficiente per testare gli agenti immunomodulatori per la generazione di cellule dendritiche tollerogeniche da monociti CD14+ umani (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-04-11T14:50:00.000+00:00
Duration: 11 min 34 s
Description: Scopri come generare cellule dendritiche tollerogeniche da monociti CD14+ umani per studi di immunologia e trapianto. Questo metodo valida l'induzione di cellule T regolatorie per terapie autoimmuni.

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<ol><li>Banchereau, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunobiology+of+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Immunobiology of dendritic cells.</a> Annu Rev Immunol. 18 (1), 767-811 (2000).</li>
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<li>Moorman, C. D., Sohn, S. J., Phee, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+therapeutics+for+immune+tolerance%3A+Tolerogenic+vaccines+T+cell+therapy%2C+and+IL-2+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Emerging therapeutics for immune tolerance: Tolerogenic vaccines T cell therapy, and IL-2 therapy.</a> Front Immunol. 12, 657768(2021).</li>
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<li>Møller, S. H., Wang, L., Ho, P. -C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabolic+programming+in+dendritic+cells+tailors+immune+responses+and+homeostasis%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Mol+Immunoly%22%5BJournal%5D)">Metabolic programming in dendritic cells tailors immune responses and homeostasis.</a> Cell Mol Immunoly. 19 (3), 370-383 (2022).</li>
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<li>Gammon, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+the+lymph+node+environment+promotes+antigen-specific+efficacy+in+type+1+diabetes+and+islet+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Comm%22%5BJournal%5D)">Engineering the lymph node environment promotes antigen-specific efficacy in type 1 diabetes and islet transplantation.</a> Nat Comm. 14 (1), 681(2023).</li>
<li>Sim, W. J., Malinarich, F., Fairhurst, A. -M., Connolly, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+immature%2C+mature+and+tolerogenic+dendritic+cells+with+differing+metabolic+phenotypes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Generation of immature, mature and tolerogenic dendritic cells with differing metabolic phenotypes.</a> J Vis Exp. (112), e54128(2016).</li>
<li>Jia, S., Kim, J., Esser-Kahn, A. P., Deak, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-throughput+screening+identification+of+novel+immunomodulatory+combinations+for+the+generation+of+tolerogenic+dendritic+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Med%22%5BJournal%5D)">High-throughput screening identification of novel immunomodulatory combinations for the generation of tolerogenic dendritic cells.</a> Front Med. 10, 1298424(2024).</li>
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<li>Nakayama, M., Michels, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Determining+antigen+specificity+of+human+islet+infiltrating+T+cells+in+type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Determining antigen specificity of human islet infiltrating T cells in type 1 diabetes.</a> Front Immunol. 10, 365(2019).</li>
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<li>Taner, T., Hackstein, H., Wang, Z., Morelli, A. E., Thomson, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapamycin-treated%2C+alloantigen-pulsed+host+dendritic+cells+induce+Ag-specific+T+cell+regulation+and+prolong+graft+survival%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Transpl%22%5BJournal%5D)">Rapamycin-treated, alloantigen-pulsed host dendritic cells induce Ag-specific T cell regulation and prolong graft survival.</a> Am J Transpl. 5 (2), 228-236 (2005).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,1-10 &micro; L Punte per pipette filtrate</td><td>VWR</td><td>76322-158</td><td>Colture cellulari generali</td></tr><tr><td>Provetta da centrifuga da 1,5 mL</td><td>VWR</td><td>77508-358</td><td>Colture cellulari generali</td></tr><tr><td>10 mL Pipette sierologiche</td><td>VWR</td><td>414004-267</td><td>Colture cellulari generali</td></tr><tr><td>100-1000 &; L Punte per pipette filtrate</td><td>VWR</td><td>76322-164</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>Tubo conico da 15 mL</td><td>VWR</td><td>77508-212</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>20-200 &; Punte di pipetta filtrate a L</td><td>VWR</td><td>76322-160</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>2-Mercaptoetanolo</td><td>MP Biomedical</td><td>194834</td><td>Coltura cellulare T</td></tr><tr><td>Tubo conico da 50 mL</td><td>VWR</td><td>21008-736</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>Piatto 60 x 15 mm, Nunclon Delta</td><td>Thermo Fischer</td><td>150326</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>Piastra inferiore conica (V) a 96 pozzetti, superficie non trattata</td><td>Thermo Fischer</td><td>277143</td> Piastra a <td></td></tr><tr><td>fondo piatto a 96 pozzetti</td> per colture cellulari generali <td>Thermo Fischer</td><td>161093</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>APC/Cyanine7 Anticorpo CD272 (BTLA)</td><td>Biolegend</td><td>344518</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>Sintonizza NxT (laser rosso/blu, 7 canali)</td><td>Termo Fischer</td><td>A24863</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>BSA</td><td>Thermo Fischer</td><td>15260-037</td><td>Cellula generale </td></tr><tr><td>Coltura CD14 anticorpo monoclonale (61D3), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-0149-42</td><td>citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD1c anticorpo monoclonale (L161), PE-cianine7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0015-42</td><td>citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD209 (DC-SIGN) anticorpo monoclonale (eB-h209), PerCP-cianine5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>45-2099-42</td><td>citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD25 anticorpo monoclonale (CD25-4E3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0257-42</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD274 (PD-L1, B7-H1) Anticorpo monoclonale (MIH1), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>12-5983-42</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD4 Anticorpo monoclonale (RPA-T4), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>53-0049-42</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD40 Anticorpo monoclonale (5C3), APC</td><td>Thermo Fischer</td><td>17-0409-42</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD40 Anticorpo monoclonale (5C3), APC-eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>47-0409-42</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD69 Anticorpo monoclonale (FN50), PE</td><td>Thermo Fischer</td><td>MA1-10276</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>CD86 Anticorpo monoclonale (BU63), FITC</td><td>Thermo Fischer</td><td>MHCD8601</td><td>citometria</td></tr><tr><td>a flusso CD8a anticorpo monoclonale (RPA-T8), PE-cianina 7</td><td>Thermo Fischer</td><td>25-0088-42</td><td>Citometria</td></tr> <tr><td>a flussoPiastra a 96 pozzetti a fondo conico (pozzetto a V)</td><td>Thermo Fischer</td><td>2605</td><td></td></tr><tr><td>Fiale criogeniche</td> per citometria a flusso, 2 mL <td>Thermo Fischer</td><td>430488</td><td>T Cell Culture</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxide (DMSO), grado di sequenziamento</td><td>Thermo Fischer</td><td>20688</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14200166</td><td></td></tr><tr><td>Kit</td> <td>di isolamento dei monociti umani EasySepStem Cell Technologies</td><td>19359</td><td>Separazione cellulare</td></tr><tr><td>Kit di isolamento delle cellule T umane EasySep</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>17951</td><td>Separazione cellulare</td></tr><tr><td>EasySep Magnet</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>18000</td><td>Separazione cellulare</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Thermo Fischer</td><td>AIM9260G</td><td>General Cell Culture</td></tr><tr><td>Falcon Provette in polistirene a fondo tondo, 5 mL</td><td>Stem Cell Technologies</td><td>38025</td><td>Separazione cellulare</td></tr><tr><td>Inibitore del legame del recettore Fc Anticorpo policlonale</td><td>Thermo Fischer</td><td>14-9161-73</td><td>Citometria</td></tr><tr><td>a flusso Siero fetale bovino</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670701</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>Colorante di vitalità fissabile eFluor 780</td><td>Thermo Fischer</td><td>65-0865-18</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>Foxp3 / Set di tamponi per colorazione del fattore di trascrizione</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-5523-00</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>FOXP3 Anticorpo monoclonale (PCH101), PE-Ciana5.5</td><td>Thermo Fischer</td><td>35-4776-42</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Thermo Fischer</td><td>14170-112</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>Siero fetale bovino inattivato a caldo</td><td>Thermo Fischer</td><td>A5670801</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr><tr><td>HEPES (1 M)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15630106</td><td>moDC Cell </td></tr><tr><td>Coltura HLA-DR Anticorpo monoclonale (L243), Alexa Fluor 488</td><td>Thermo Fischer</td><td>A51009</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>Attivatore di cellule T umane CD3/CD28/CD2</td><td>StemCell Technologies</td><td>10970</td><td>Coltura di cellule T</td></tr><tr><td>Proteina ricombinante GM-CSF umana</td><td>Thermo Fischer</td><td>300-03</td><td>moDC Coltura cellulare</td></tr><tr><td>Kit ELISA IL-10 umano, Alta sensibilità</td><td>Thermo Fischer</td><td>BMS215-2HS</td><td>ELISA</td></tr><tr><td>IL-4 Umana, Proteina Ricombinante Senza Animali</td><td>Thermo Fischer</td><td>AF-200-04</td><td>moDC Coltura Cellulare</td></tr><tr><td>PBMC Umana (Appena Isolata)</td><td>UPenn HIC</td><td>N/A</td><td>Cellule</td></tr><tr><td>TNF alfa Kit ELISA</td><td>Thermo Fischer</td><td>BMS223-4</td> Microscopio <td>Ottico ELISA</td></tr><tr><td>(DMi1)</td><td>Lucia</td><td>391240</td><td></td></tr><tr><td>Lipopolisaccaride per Colture Cellulari Generali (LPS)</td><td>Invivogen</td><td>tlrl-eblps</td><td>moDC Cell</td></tr> Culture <tr><td>LIVE/DEAD Kit di colorazione per cellule morte nel vicino infrarosso fissabile</td><td>Thermo Fischer</td><td>L34975</td><td>Citometria a flusso</td></tr><tr><td>MEM Soluzione di aminoacidi non essenziali (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>11140050</td><td>T Cell Culture</td></tr><tr><td>Penicillina-Streptomicina (100x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>15140122</td><td>General Cell</td></tr><tr><td>Culture Pipette Controller</td><td>VWR</td><td>77575-370</td><td>Rapamicina per colture cellulari generali</td></tr><tr><td>, 98+%</td><td>Thermo Fischer</td><td>J62473. </td><td>Coltura cellulare MF moDC</td></tr><tr><td>RPMI 1640 con Glutamax</td><td>Thermo Fischer</td><td>61870-036</td> Tecnologie generali per la separazione <td>delle</td></tr><tr><td>cellule staminali</td> per la<td>separazione</td> delle colture cellulari <td>20144</td> Cocktail di <td></td></tr><tr><td>stimolazione delle cellule T per la separazione cellulare (500x)</td><td>Thermo Fischer</td><td>00-4970-93</td><td>Coltura cellulare</td></tr><tr><td>T UltraComp eBead Plus Perle di compensazione</td><td>Thermo Fischer</td><td>01-3333-41</td><td>Flusso </td></tr><tr><td>Set di pipette variabili</td> per citometria <td>Fischer Scientific</td><td>05-403-152</td><td>Coltura cellulare generale</td></tr></tbody></table>

un metodo semplice ed efficiente per testare gli agenti immunomodulatori per la generazione di cellule dendritiche tollerogeniche da monociti cd14+ umani

A Simple and Efficient Method for Testing Immunomodulatory Agents for Generation of Tolerogenic Dendritic Cells from Human CD14+ Monocytes

Abbiamo descritto un protocollo per le PBMC umane, isolando sia le cellule T CD3+ che i monociti CD14+ utilizzando kit di separazione magnetica disponibili in commercio, differenziando i monociti in moDC CD14-, HLA-DR+, CD141+, CD1c+ utilizzando GM-CSF e IL-4, trattandoli per 24 ore e co-coltura con cellule T autologhe con stimolazione anti-CD3/CD28 per 72 ore. Uno schema sperimentale è mostrato nella Figura 1.
<p class="j...

Un metodo semplice ed efficiente per testare gli agenti immunomodulatori per la generazione di cellule dendritiche tollerogeniche da monociti CD14+ umani

Tolerogenic dendritic cells (tolDCs) are a subset of dendritic cells (DCs) that are known to influence na&#239;ve T cells toward a regulatory T cell ...

a-simple-efficient-method-for-testing-immunomodulatory-agents-for

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Presentazione dell'antigene in organi linfatici secondari da parte delle cellule dendritiche è cruciale per l'avvio della cellula T mediata risposta immunitaria adattativa. Qui mostriamo la cultura del midollo osseo derivate le cellule dendritiche murine, di attivazione e di etichettatura per 2-fotoni imaging.

Generazione di cellule derivate dal midollo osseo dendritiche murini per l&#39;uso in 2-fotone Imaging

Questo video dimostra la generazione di cellule dendritiche immature, mature e tollerogeniche, o DC, da monociti umani. L'incubazione di monociti con fattori di crescita e citochine porta alla produzione di DC immature. In risposta alle molecole regolatorie immunitarie, le DC immature si differenziano in DC tollerogeniche e mature.

Generazione di cellule dendritiche immature, mature e tollerogeniche da monociti

Questo video mostra un metodo per convertire le cellule dendritiche (DC) in DC tollerogeniche (TolDCs) utilizzando un agente farmacologico immunomodulatore. Questa conversione è confermata dalla valutazione della funzione di TolDC attraverso il loro effetto immunosoppressivo sulle cellule T CD4+.

Effetto di un agente farmacologico immunomodulatore sull'interazione tra cellule dendritiche e cellule T CD4+

Le cellule dendritiche immature possono essere differenziate selettivamente in cellule dendritiche tolleranti o mature per regolare l'equilibrio tra immunità e tolleranza. Questo lavoro presenta un mezzo per generare da cellule dendritiche immature derivate da monociti (moDC), moDC in vitro tollerogeniche e mature che differiscono nei fenotipi metabolici.

Generazione di Immaturo, matura e tollerogenico dendritiche cellule con differenti fenotipi metabolica

Questo studio confronta due diversi metodi di isolamento dei monociti umani per ottenere cellule dendritiche (DC) in vitro. I monociti vengono selezionati per adesione o arricchiti negativamente per separazione magnetica. La resa e la vitalità dei monociti, insieme alla vitalità dell'MDDC, alla proliferazione e all'espressione del marcatore di superficie CD11c/CD14 saranno confrontate tra i due metodi.

Caratterizzazione delle derivate da monociti cellule dendritiche umane di Citometria a Flusso Imaging: un confronto tra due protocolli di isolamento dei monociti

Qui, dimostriamo come i monociti vengono isolati mediante separazione di biglie magnetiche dalle cellule mononucleate del sangue periferico dopo la centrifugazione in gradiente di densità del sangue umano anticoagulato. Dopo un'incubazione di 5 giorni, i monociti umani vengono differenziati in cellule dendritiche immature e sono pronti per le procedure sperimentali in un contesto non clinico.

Generazione di derivate da monociti cellule dendritiche umane da sangue intero

Qui, presentiamo un protocollo per sviluppare e caratterizzare le cellule dendritiche tollerogeniche (TolDCs) e valutare la loro utilità di immunoterapia.

Sviluppo e caratterizzazione funzionale delle cellule dendritiche tollerogeniche murino

Il dispositivo di transimmunizzazione (TI) o la piastra e i relativi protocolli sono stati sviluppati per replicare le caratteristiche chiave della fotochemioterapia extracorporea (ECP), in un ambiente sperimentale, permettendo la produzione di fisiologicamente attivato, Tunable dendritico cellule (DCs) per l'immunoterapia oncologica.

Nuovo protocollo per la generazione di cellule dendritiche fisiologiche immunogene

Qui presentiamo un protocollo per l'aumento in vivo dell'induzione delle cellule T regolatorie gut-homing. In questo protocollo, le cellule dendritiche sono progettate per produrre localmente alte concentrazioni della vitamina D attiva (1,25-dihydroxyvitamin D o 1,25[OH]2D) e la vitamina attiva A (acido retinoico o RA) de novo.

In Vivo Augmentazione dell'induzione delle cellule T regolatorie Gut-Homing

La metodologia descrive la generazione di cellule dendritiche derivate da monociti bovini (MoDC) e la loro applicazione per la valutazione in vitro di candidati antigenici durante lo sviluppo di potenziali vaccini veterinari nei bovini.

Determinazione dell'immunogenicità del vaccino utilizzando cellule dendritiche derivate da monociti bovini

Viene presentato un protocollo unico e completo per generare cellule dendritiche (mo-DC) derivate da monociti umani desialilati da cellule mononucleate isolate del sangue periferico (PBMC) utilizzando un trattamento con sialidasi. Inoltre, vengono descritti metodi per valutare la caratterizzazione fenotipica e funzionale delle mo-DC e valutare come il trattamento con sialidasi migliora il livello di maturazione delle mo-DC.

Generazione di cellule dendritiche derivate da monociti con diversi fenotipi sialilati

Scopri come generare cellule dendritiche tollerogeniche da monociti CD14+ umani per studi di immunologia e trapianto. Questo metodo valida l'induzione di cellule T regolatorie per terapie autoimmuni.

Un metodo semplice ed efficiente per testare gli agenti immunomodulatori per la generazione di cellule dendritiche tollerogeniche da monociti CD14+ umani (Video) | JoVE Journal

Un metodo semplice ed efficiente per testare gli agenti immunomodulatori per la generazione di cellule dendritiche tollerogeniche da monociti CD14⁺ umani

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