Name: Imaging ad alto plex con microscopia confocale spettrale per ridurre al minimo la fluorescenza tissutale non specifica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-28T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 28 s
Description: Scopri come ottimizzare il flusso di lavoro IBEX con blocco all'eparina e rilevazione spettrale per sopprimere l'autofluorescenza nei tessuti umani ricchi di eosinofili. Questo metodo migliora l'imaging ad alto plex.

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<table><tbody><tr><td>Soluzione di acido solforico 2N (H2SO4)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Becher da 500 mL</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Piastra a 6 pozzi</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>BCL-6 - Alexa Fluor 647</td><td>BD in Biologia</td><td>561525</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>BD Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Kit</td><td>BD in Biologia</td><td>554722</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio da banco per dissezione</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Albumina Sirica Bovina (BSA)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>A4503</td><td></td></tr><tr><td>CD11c - Alexa Fluor 700</td><td>BD in Biologia</td><td>561352</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD138/Syndecan-1 - PE</td><td>BioLegend</td><td>356503</td><td>Fattore di diluizione 1:200</td></tr><tr><td>CD20 - Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>53020282</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD21 - Alexa Fluor 532</td><td>NovusBio</td><td>NBP2-60733AF532</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD23 - PE</td><td>BioLegend</td><td>338507</td><td>Fattore di diluizione 1:200</td></tr><tr><td>CD3 - iFluor 594</td><td>AAT Bioquest</td><td>100320C0</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD31 - Alexa Fluor 700</td><td>BioLegend</td><td>303134</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD34 - iFluor 594</td><td>AAT Bioquest</td><td>103400C0</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD38 - Alexa Fluor 700</td><td>BioLegend</td><td>303523</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD4 - Alexa Fluor 647</td><td>BioLegend</td><td>300520</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD45 - Alexa Fluor 532</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>58045942</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>CD54/ICAM-1 - Alexa Fluor 647</td><td>BioLegend</td><td>353113</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Adesivo cromo allume-gelatina</td><td>Offerta di nuovi arrivati</td><td>1033A</td><td></td></tr><tr><td>Cryomold</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>NC9511236</td><td>Inoltre, il Catalogo No.50-465-347 per campioni più grandi</td></tr><tr><td>Slide di calibrazione DAPI</td><td>Agar Scientific</td><td>AG2273</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione DAPI, 1 mg/mL</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>62248</td><td>Fattore di diluizione 1:3000</td></tr><tr><td>E-cadherin/CD324 - Alexa Fluor 647</td><td>BioLegend</td><td>147307</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>EpCAM/CD326 - Alexa Fluor 594</td><td>BioLegend</td><td>324228</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Tubi Eppendorf/Falcon</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Fluoromount-G</td><td>SouthernBiotech</td><td>0100-01</td><td></td></tr><tr><td>Pinza</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>FoxP3 - eFluor 660</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>50577382</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Lamelli di microscopio sminacciato</td><td>Scienza Chimica</td><td>GEW45-2575-W</td><td></td></tr><tr><td>GL7 - Alexa Fluor 488</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>53590282</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Sale sodio eparinico</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>H3393</td><td>10KU</td></tr><tr><td>HLA-DR - PE</td><td>NovusBio</td><td>NB100-77855PE</td><td>Fattore di diluizione 1:200</td></tr><tr><td>Human TruStain FcX (Soluzione bloccante dei recettori Fc)</td><td>BioLegend</td><td>422302</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Camera di umidità</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Secchio di ghiaccio con coperchio</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>IgD - Alexa Fluor 488</td><td>BioLegend</td><td>348215</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>IL4Ra/CD124 - PE</td><td>BioLegend</td><td>144803</td><td>Fattore di diluizione 1:200</td></tr><tr><td>Convertitore di file Imaris</td><td>Strumenti OXFORD</td><td>N/A</td><td>Copertura di qualsiasi formato di file immagine in formato .ims (https://imaris.oxinst.com/microscopy-imaging-software-free-trial#file-converter)</td></tr><tr><td>Isopentano (2-metilbutano)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Ki-67 - Alexa Fluor 488</td><td>BD in Biologia</td><td>558616</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Kimberly-Clark Kimberly-Clark Kimtech Science Professional Kimwipes Delicati Tergicristalli per Compiti, 1-Strata</td><td>Scienza Kimtech</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>Pinze grandi (cioè lunghe 25 cm)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Azoto liquido</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Boroidriduro di litio (LiBH4)</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>222356</td><td></td></tr><tr><td>MECA-79 - Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen</td><td>53603680</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Copertura vetrata per microscopio Vetro n.1 22x50 mm</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>12-542A</td><td></td></tr><tr><td>Acqua Milli-Q</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>MUC2 - Alexa Fluor 488</td><td>NovusBio</td><td>NB120-11197AF488</td><td>Fattore di diluizione 1:100</td></tr><tr><td>Vetro di copertura a camera Nunc Lab-Tek</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>155380</td><td></td></tr><tr><td>PAP penna</td><td>abcam</td><td>AB2601</td><td></td></tr><tr><td>Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS)</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Bisturi</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Qualsiasi cosa sia disponibile/usata in laboratorio</td></tr><tr><td>Estensioni SimpleITK Imaris</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>Software utilizzato per allineare immagini di diversi giri (https://github.com/niaid/imaris_extensions)</td></tr><tr><td>Sucrosio</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Composto Tissue-Tek O.C.T.</td><td>Sakura Finetek USA</td><td>4583</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>SIGMA-ALDRICH</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Zeiss LSM 980</td><td>Microscopia ZEISS</td><td>N/A</td><td>Il sistema di imaging utilizzato in questo studio</td></tr><tr><td>Zen Blue</td><td>Microscopia ZEISS</td><td>N/A</td><td>Il software utilizzato per l'elaborazione delle immagini post-acquisizione</td></tr></tbody></table>

imaging ad alto plex con microscopia confocale spettrale per ridurre al minimo la fluorescenza tissutale non specifica

High-plex Imaging using Spectral Confocal Microscopy to Minimize Non-specific Tissue Fluorescence

Imaging ad alto plex con microscopia confocale spettrale per ridurre al minimo la fluorescenza tissutale non specifica

Highly multiplexed imaging enables the study of functionally diverse cells and their niches within their native tissue environments. Iterative Bleaching ...

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Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Abbiamo sviluppato una nuova tecnica di quantificazione dei recettori nicotinici dell'acetilcolina cambiamenti all'interno delle regioni subcellulari di sottotipi specifici di neuroni del sistema nervoso centrale per comprendere meglio i meccanismi della dipendenza da nicotina utilizzando una combinazione di approcci tra tagging proteina fluorescente del recettore con il knock-in approccio e spettrale confocale.

Spectral Imaging di fluorescenza confocale tag recettori nicotinici a Knock-in topi con la somministrazione cronica alla nicotina

Dimostriamo l'uso della microscopia di localizzazione per fotoattivazione a fluorescenza (FPALM) per visualizzare simultaneamente più tipi di molecole marcate in fluorescenza all'interno delle cellule. Le tecniche descritte producono la localizzazione di migliaia o centinaia di migliaia di singole proteine marcate con fluorescenza, con una precisione di decine di nanometri all'interno di singole cellule.

Imaging multicolore simultaneo di strutture biologiche con microscopia di localizzazione con fotoattivazione a fluorescenza

L'imaging del comportamento dinamico degli organelli e di altre strutture subcellulari in vivo può far luce sulla loro funzione in condizioni fisiologiche e patologiche. Qui, presentiamo metodi per marcare geneticamente due organelli, centrosomi e mitocondri, e per l'imaging delle loro dinamiche in embrioni di zebrafish viventi utilizzando la microscopia a campo largo e confocale.

Imaging strutture subcellulari nell&#39;embrione Living Zebrafish

Deposito dell'amiloide è un segno distintivo di diverse malattie e affligge molti organi diversi. Questo articolo descrive l'applicazione della fluorescenza luminescenti oligotiofenici coniugati macchiatura in combinazione con tecniche di microscopia di fluorescenza. Questo metodo di colorazione rappresenta un potente strumento per il rilevamento e l'esplorazione di aggregati proteici nelle configurazioni sia clinici che scientifici.

Imaging dell'amiloide tessuti macchiati con luminescenti oligotiofeni coniugati di Hyperspectral confocale microscopia e fluorescenza Lifetime Imaging

Gli anticorpi che si legano ai recettori bersaglio sulla superficie delle cellule possono conferire conformazione e alterazioni clustering. Questi cambiamenti dinamici hanno implicazioni per caratterizzare lo sviluppo di farmaci nelle cellule bersaglio. Questo protocollo utilizza la microscopia confocale e spettroscopia di correlazione di immagine attraverso ImageJ/FIJI per quantificare l'entità del recettore sulla superficie cellulare di clustering.

Microscopia confocale rivela l'aggregazione di recettore di superficie delle cellule tramite spettroscopia di correlazione di immagine

L'imaging spettrale è diventata una soluzione affidabile per l'identificazione e la separazione di più segnali di fluorescenza in un singolo campione e può facilmente distinguere i segnali di interesse dallo sfondo o dall'autofluorescenza. L'imaging iperspettrale a scansione dell'eccitazione migliora questa tecnica diminuendo il tempo necessario di acquisizione dell'immagine aumentando contemporaneamente il rapporto segnale-rumore.

Microscopia di imaging iperspettrale di eccitazione-scanning per discriminare in modo efficiente i segnali di fluorescenza

Descriviamo un metodo di colorazione rapida per eseguire l'imaging multispettrale sui tessuti congelati.

Un metodo rapido per l'imaging della fluorescenza multispettrale delle sezioni dei tessuti congelati

Qui descritto è un metodo che può essere utilizzato per visualizzare cinque o più parametri fluorescenti mediante microscopia immunofluorescente. Viene delineata una pipeline di analisi per estrarre singole cellule da queste immagini e condurre analisi di singole cellule attraverso strategie di gating simili alla citometria a flusso, in grado di identificare sottogruppi di cellule in sezioni di tessuto.

Generazione e analisi di immagini istologiche ad alto parametro con la citometria a flusso istodinamico

Questo protocollo dettaglia le applicazioni avanzate di imaging e la gestione delle risorse condivise di un sistema di microscopio confocale a scansione laser integrato con un rivelatore a matrice multiplexata per imaging cellulare e subcellulare ad alta risoluzione. Il flusso di lavoro consente imaging multimodale da confocale a super-risoluzione (~120 nm) all'interno di un'unica piattaforma, rendendo la visualizzazione su scala nanometrica più accessibile.

Imaging a superrisoluzione e gestione condivisa: un protocollo per la microscopia confocale con rilevamento multiplex

Questo esperimento viene visualizzata una guida per l'utilizzo fluorescente un clone molecolare di HIV per vivere esperimenti di imaging confocale.

Visualizzazione Cell-per-cell trasferimento del virus HIV usando cloni fluorescenti di HIV e Live Microscopia confocale

Scopri come ottimizzare il flusso di lavoro IBEX con blocco all'eparina e rilevazione spettrale per sopprimere l'autofluorescenza nei tessuti umani ricchi di eosinofili. Questo metodo migliora l'imaging ad alto plex.

Imaging ad alto plex con microscopia confocale spettrale per ridurre al minimo la fluorescenza tissutale non specifica

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