Name: Trypsinizing e Trapianto cellule di mammifero (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-06-12T13:28:00.000+00:00
Duration: 5 min 59 s
Description: Impara le tecniche di tripsinizzazione e trapianto per mantenere cellule di mammifero aderenti e in sospensione. Questo metodo visivo mostra come preservare la vitalità cellulare durante il passaggio.

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Il protocollo testo completo di questo approccio sperimentale è disponibile in <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">protocolli di corrente in Biologia Cellulare</a> .

Gli autori non hanno nulla da dichiarare.

trypsinizing e trapianto cellule di mammifero

Trypsinizing and Subculturing Mammalian Cells

Mentre le cellule raggiungano la confluenza, devono essere subcoltura o diversi passaggi. Il mancato sottocultura risultati confluenti cellule indice mitotico ridotto e, infine, nella morte cellulare. Il primo passo nella subcoltura è quello di staccare le cellule dalla superficie del recipiente di coltura primaria tripsinizzazione o mezzi meccanici. La sospensione cellulare risultante viene poi suddiviso, o reseeded, nelle culture fresca. Culture secondarie vengono controllati per la crescita e alimentato periodicamente e possono essere successivamente reinoculate per produrre culture terziario. Il tempo tra passaging delle cellule varia a seconda della linea cellulare e dipende dal tasso di crescita.

Mentre le cellule raggiungano la confluenza, devono essere subcoltura o diversi passaggi. Questo video dimostra una procedura per subcoltura sia aderente e cellule in sospensione.

Trypsinizing e Trapianto cellule di mammifero

Quando le cellule raggiungono la confluenza, devono essere subcoltivate o passaggiate. La mancata subcoltivazione di cellule confluenti comporta una riduzione dell'indice mitotico e, infine, in...

La tecnologia della coltura tessutale ha trovato ampie applicazioni nel campo della biologia cellulare. Tuttavia, le cellule in coltura richiedono una manutenzione regolare per rimanere sane. Quando le cellule raggiungono la confluenza, devono essere sottocoltivate o passaggiate.Il mancato rispetto di questa procedura provoca una riduzione della crescita e, in ultima analisi, la morte cellulare. In questo video, mostriamo come mantenere colture cellulari sia per linee cellulari aderenti che in sospensione. Ciao, sono Ricky, del laboratorio del Dottor LAN presso il Molecular Pathology Laboratories Network nell'East Tennessee.Oggi voglio mostrarvi due tecniche per il confezionamento di cellule in sospensione e di cellule aderenti. Per il passaggio di una piastra di cellule, dovremo partire da una coltura primaria cresciuta fino a confluenza in una piastra di Petri da 60 millimetri o in un fiasco per colture cellulari da 25 centimetri quadrati contenente cinque millilitri di mezzo di coltura cellulare.Iniziamo rimuovendo tutto il mezzo dalla coltura primaria mediante pipetta sterile. Successivamente laviamo il monostrato di cellule aderenti una o due volte con un piccolo volume di HBS

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Il micro-dissezionato tecnica espianti è un metodo robusto e affidabile per isolare proliferativa delle cellule del muscolo scheletrico da giovani, adulte o embrionali muscoli come fonte di cellule staminali del muscolo scheletrico. Unicamente, queste cellule sono state derivate clonazione per la produzione di muscolo scheletrico linee di cellule staminali utilizzate per trapianto in vivo.

Adulte e embrionali muscolo scheletrico Microexplant Cultura e isolamento di cellule staminali del muscolo scheletrico

In questo rapporto, si dimostra un sistema per isolare la cultura e le cellule del donatore dalla ghiandola mammaria del mouse, e ortotopicamente trapianto di queste cellule in topi riceventi per analizzare stromali: interazioni epiteliali durante lo sviluppo del tumore mammario.

Trapianto mammaria di cellule stromali e cellule di carcinoma in topi C57BL/6J

Il video mostra un test per valutare l'attività di sequestro autofagico di massa nelle cellule di mammifero. Utilizza l'elettroporazione per rilasciare proteine citosoliche, tra cui la lattato deidrogenasi (LDH). Le frazioni di LDH sequestrate e LDH cellulari totali sono determinate per valutare il sequestro di LDH, fornendo informazioni sull'attività complessiva di sequestro di massa.

Quantificazione dell'attività di sequestro autofagico di massa nelle cellule di mammifero

Questo video dimostra un protocollo per isolare e coltivare cellule primarie della corteccia cerebrale dal telencefalo dorsolaterale di embrioni di topo.

Isolamento e coltura di cellule da telencefali dorsolaterali embrionali di topo

Questa tecnica fornisce un metodo per raccogliere, normalizzare e quantificare la crescita intracellulare di batteri patogeni che sono pre-coltivate in cellule naturali ospiti protozoi prima di infezioni di cellule di mammifero. Questo metodo può essere modificato per accogliere una grande varietà di cellule ospiti per la fase di adescamento e tipi di cellule bersaglio.

Trattabili infezioni cellula di mammifero con protozoo-innescate batteri

Descriviamo le procedure per l'etichettatura e la genotipizzazione topi appena nati e di generare colture neuronali primarie da loro. La genotipizzazione è rapido, efficiente ed affidabile, e consente l'estrazione automatica acidonucleico. Ciò è particolarmente utile per i mouse neonatale letali e le loro culture, che richiedono la preventiva realizzazione di genotipizzazione.

Rapida genotipizzazione degli animali Seguito da Stabilire colture primarie di neuroni del cervello

Descriviamo un metodo per l'etichettatura stabile di xenotrapianti derivati da pazienti (PDX) con particelle lentivirali che esprimono proteina fluorescente verde e reporter di luciferasi. Questo metodo consente di monitorare la crescita dei PDX nel sito primario, nonché di rilevare metastasi spontanee e sperimentali utilizzando sistemi di imaging in vivo.

Etichettatura di cancro al seno xenotrapianti derivati ​​da pazienti con tracciabili Reporter per crescita tumorale e metastasi Studi

L'obiettivo di questo protocollo è quello di isolare i cheratinociti epidermici dalla pelle dorsale dei topi adulti per una varietà di applicazioni a valle come la biologia molecolare, la biochimica, lo smistamento delle cellule attivate a fluorescenza e gli usi primari in vitro (ad esempio, clonogenici cheratinociti).

Isolamento dei Keratinociti Epidermimi del topo e della loro cultura clonogenica in vitro

Presentiamo una tecnica per stabilizzare rapidamente complessi traslazionali (biosintesi proteica) con reticolazione di formaldeide in cellule di lievito vivo e di mammifero. L'approccio consente di sezionare intermedi transitori e interazioni dinamiche RNA:proteina. I complessi reticolati possono essere utilizzati in molteplici applicazioni a valle come nei metodi di profilazione basati sul sequenziamento profondo, nella microscopia e nella spettrometria di massa.

Rapida fissazione in vivo e isolamento dei complessi traslazionali dalle cellule eucariotiche

La Biotinilazione potenziata per illuminazione limitata a posizione specifica AviTag (ALIBi) è un nuovo metodo optogeneticamente attivato sviluppato per il marcatore e la purificazione di affinità delle popolazioni subcellulari di ribosomi per sequenziamento a valle e analisi proteomiche.

Isolamento delle sottopopolazioni subcellulari di ribosomi basato su biotinilazione potenziata da illuminazione limitata da tag peptidico ricombinante specifico per peptidi

Impara le tecniche di tripsinizzazione e trapianto per mantenere cellule di mammifero aderenti e in sospensione. Questo metodo visivo mostra come preservare la vitalità cellulare durante il passaggio.

Trypsinizing e Trapianto cellule di mammifero

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