蛍光偽神経伝達物質を用いた神経伝達の可視化

ドーパミン作動性ニューロンが豊富な脳スライスから始めます。

蛍光偽神経伝達物質またはFFNを含むaCSFでスライスをインキュベートします。

FFNは、ドーパミンを模倣し、酸性環境よりも中性環境でより強く蛍光を発するpH感受性マーカーです。

これらのFFNは選択的にドーパミン作動性ニューロンに入り込み、酸性シナプス小胞に負荷がかかり、pHの変化によりFFNの蛍光が減少します。

このスライスをイメージングチャンバーに移し、固定し、aCSFで連続的に灌流して、未結合のFFNを除去します。

スライスを画像化して、FFNの蓄積を蛍光点として確認します。

次に、電気刺激を与えるために刺激電極を配置します。

電気パルスによりカルシウムがニューロンに入り込み、シナプス小胞がニューロン膜と融合し、FFNが細胞外シナプス間隙に放出されます。

シナプス間隙の中性pH環境では、FFN蛍光が強まります。

スライスを再度画像化して、細胞外空間のびまん性蛍光を観察し、シナプス小胞からのFFN放出を確認します。