硫化水素産生細菌の検出のための高感度視覚的方法

硫黄を多く含む化合物を代謝できるさまざまな硫化水素生成細菌の懸濁液を含むプレートから始めます。

硫黄源としてL-システインを含む塩化ビスマス溶液を加え、混合物を短時間インキュベートします。

インキュベーション中、細菌は L-システインを利用して硫化水素を生成し、ビスマスイオンと反応して不溶性の黒色硫化ビスマス沈殿物を形成します。

この反応により、溶液の色が淡黄色から黒色に変化し、硫化水素の生成を示します。

次に、硫化水素標準としてさまざまな濃度の硫化水素ナトリウムを使用してアッセイを実行し、塩化ビスマスを加えます。

これにより、硫化水素レベルを表す明るい黒から濃い黒までの色のグラデーションが生成されます。

この勾配を使用して、細菌サンプル中の硫化水素レベルを視覚的に比較および推定し、硫化水素を生成する細菌を迅速に検出できるようにします。

100マイクロリットルの細菌培養物と100マイクロリットルの新しく調製したビスマス溶液を96ウェルマイクロタイタープレートに混合し、摂氏37度で20分間培養します。細菌株ごとに、3回に分けて分析を行います。

20分後、色の変化を確認します。溶液の色が淡黄色から黒に変わる場合、これは細菌が硫化水素またはH2Sを生成できることを示しています。この測定を3回繰り返します。

硫化ビスマス溶液と混合した異なる濃度の硫化水素ナトリウムを使用して、この方法の感度を決定します。最後に、黒色の硫化ビスマス沈殿物の形成を観察することにより、重硫化物イオンと硫化物イオンの存在を決定します。色の生成なしから最も暗い黒の色の生成までの視覚的なスケールを使用して、ウェルの色をスコアリングします。