勾配阻害剤プレートを使用した細菌の群れの評価

二重寒天でグラデーションスウォームプレートを取ります。阻害剤を含む最下層を流し込んで、阻害剤の勾配を作成しました。

プレートには等尺性間隔のウェルが含まれており、細菌の群れや集団移動に適切なスペースを提供し、群れの重なりを防ぎます。

ウェルに細菌培養物を接種し、プレートをインキュベートします。

阻害剤濃度が低いと、細菌は鞭毛の動きを調整し、集団移動または群れを開始します。

高濃度の阻害剤では、阻害剤はべん毛関連遺伝子の発現を抑制します。

これにより、鞭毛の動きが制限され、群れの運動性が制限されます。

プレートを白色光の下で一定の間隔で画像化して、群がるパターンを捉えます。

イメージング中は、露光時間を調整して群れの明るさを高めます。

スレッショルド設定を変更して、背景光の干渉を最小限に抑え、コントラストを高めます。

細菌の群れに対する阻害剤濃度の影響のその後の分析のために画像を保存します。

80マイクロリットルの一晩増殖培養物をすべてのウェルに加えます。12時間ごとにスウォームプレートをインキュベーターから1つずつ取り出し、ゲルイメージングシステムに入れます。

ゲルイメージングモードを選択し、スウォームプレートを白色光にさらし、焦点距離を調整してスウォームを鮮明に見ることができます。露光時間を 300 ミリ秒に調整することで、正確な観察のために群れの明るさを高めます。スレッショルドを調整して、背景光からの干渉を最小限に抑えます。

さらに分析するために、画像ファイルを保存します。