0 閲覧数 • 3:27 分 • October 30th, 2025
まず、カーボンフリーバッファーに蛍光タグを付けた細菌培養物を添加します。
遠心分離して細菌をペレット化し、上清を廃棄します。
中性洗剤を含む新鮮なカーボンフリーバッファーにペレットを再懸濁します。
炭素源がないと成長が止まりますが、洗剤は凝集を防ぎ、細胞を浮遊状態に保ちます。
細菌懸濁液を注射器に投入し、ポンプに接続します。
床に埋め込まれたトラップを備えたチャネルを含むマイクロ流体チップの入口に懸濁液を注入します。
チャネル出口から液体をゆっくりと引き出します。
液体が後退すると、毛細管現象の力が細菌を出口に導きます。
このプロセスでは、単一の細菌細胞がトラップに定着し、細菌のパターン化が生じます。
予熱した栄養豊富なブロスで水路を継続的に洗い流します。
細菌は増殖を再開し、トラップ内にマイクロコロニーを形成します。
蛍光顕微鏡を使用してタイムラプス画像をキャプチャし、制御された環境で細菌の増殖を分析します。
1ミリリットルのMOPS培地を遠心分離バイアルにピペットで入れ、10マイクロリットルの0.132モルリン酸カリウムを加えます。
100マイクロリットルの一晩培養物を遠心分離バイアルに分注し、培養物を2,300倍gで2分間遠心分離します。上清をそっと捨てて、0.015%のトゥイーン20と0.01%のリン酸カリウムを含む1ミリリットルの新鮮なMOPS培地にペレットを再懸濁し、細菌懸濁液を1ミリリットルのシリンジにロードします。シリンジとチューブ接続を固定するには、チューブに針を直接挿入します。
次に、シリンジをシリンジポンプに取り付け、懸濁液がテンプレート領域をトラップで覆うまで、チャネルの上流部分にある入口からマイクロ流体チップに懸濁液を注入します。シリンジポンプを毎分0.07〜0.2マイクロリットルの流量に設定して、細菌懸濁液を回収し、顕微鏡ソフトウェアを介してパターニングプロセスを監視します。テンプレートを細胞でパターン化したら、引き抜き流量を上げてマイクロ流体チャネルをすばやく空にし、事前に少なくとも30分間脱気し、摂氏30度に予熱した新しいLBで洗い流します。
次に、シリンジポンプを毎分2マイクロリットルの流量に設定して、チャネルを穏やかに洗い流します。チャネルがいっぱいになったら、再び流量を上げます。増殖中の細菌を希望の倍率と時間間隔で画像を取得します。
本記事では、マイクロ流体チップを用いて細菌細胞をパターニングする方法について解説します。このプロセスでは、細菌懸濁液をチャネルに注入し、毛細管力によって単一細胞をトラップに誘導することで、その増殖を観察します。
マイクロフルイディクスによるパターニングと、蛍光ベースの単一細菌細胞増殖トラッキングは、厳密に制御された条件下で微生物の挙動を調査するための高解像度プラットフォームを提供します。このアプローチにより個々の細胞の精密な単離が可能となり、抗感染症薬の研究開発における初期発見およびターゲット検証に不可欠な、堅牢な仮説検証と定量分析をサポートします。本手法の再現性とスケーラビリティにより、ポートフォリオ全体のスクリーニングやメカニズム解明によるリスク低減に活用できる再利用可能なアセットとなります。
このマイクロ流体および蛍光ベースのワークフローは、初期探索、アッセイ開発、および前臨床モデルの最適化のインターフェースに統合されています。
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最終更新:22 8月 2026