宿主蚊由来スポロゾイトを用いた実験的脳マラリアのマウスモデル作製

マラリアの原因となる寄生虫であるベルゲイ原虫 に感染したメスの蚊の唾液腺が入ったチューブから始めます。

腺を機械的に破壊し、寄生虫の感染型であるスポロゾイトを培地に放出します。

腺画分と破片をペレット化します。スポロゾイト含有上清を回収し、拘束マウスの尾静脈に注入します。

注入されたスポロゾイトは血流を通って肝臓に到達し、そこで肝細胞に感染して増殖し、寄生虫の侵襲型であるメロゾイトを形成します。

時間が経つにつれて、肝細胞はメロゾイトを血流に放出し、赤血球(赤血球)に侵入します。

赤血球内部では、メロゾイトは無性複製し、成熟した形に発達し、赤血球の表面に寄生虫由来の抗原を発現します。

これらの抗原は、脳血管内の内皮受容体を含む内皮受容体に結合し、感染した赤血球と非感染の赤血球の隔離につながります。

この異常な赤血球の蓄積は血液脳関門を破壊し、脳の実質に体液の蓄積を引き起こし、マウスに脳マラリアを発症します。

まず、採血の17〜22日後にケージからメスの蚊を集めます。鉗子を使用して、冷たいRPMI培地を一滴垂らしたスライドガラスの上に3〜4匹の蚊を置きます。次に、スライドを顕微鏡下に置きます。

鉗子で蚊を頭と体の間に慎重に伸ばし、注射器と針を使用して唾液腺を分離します。次に、スライドガラスから唾液腺をガラスピペットで吸い上げて収集し、1.5ミリリットルの遠心分離管に移します。次に、小さなプラスチックの棒を使用して、遠心分離管内の単離された唾液腺を3分間粉砕し、唾液腺組織からスポロゾイトを分離します。

氏4度で1,000倍gで3分間遠心分離し、残りの組織からスポロゾイトを精製します。スポロゾイトを含む上清を新しい遠心分離管にピペットで移し、ノイバウアー血球計算器で精製されたスポロゾイトを数えます。スポロゾイトは典型的な反時計回りの動きを示します。

次に、リン酸緩衝生理食塩水を加えて精製したスポロゾイトの濃度を1ミリリットルあたり10,000に調整します。最後に、C57BL6マウスを拘束装置に入れ、尾を温水に入れて尾静脈をよりよく視覚化します。次に、合計1,000個のスポロゾイト、つまり0.1ミリリットルを尾静脈に注入して感染を開始します。