マウス脳ウェッジスライスにおける聴神経根刺激とシナプス後電流記録

酸素化されたaCSFを灌流した記録チャンバーにトランスジェニックマウスの脳ウェッジスライスを確保します。

厚

いくさび側には、T星状細胞と球状ふさふさした細胞を含む聴覚神経根と蝸牛核が含まれています。

薄い側には、蛍光内側オリボ蝸牛ニューロンを持つ台形体の内側および腹側の核が含まれています。

聴覚神経根を顕微鏡で特定し、その上に刺激電極を配置します。

蛍光内側オリボ蝸牛ニューロンを特定し、記録ピペットをそれに向かって前進させます。

ニューロンにパッチを当てて細胞全体の構成を実現し、その電気的活動を記録します。

聴覚神経根に電気パルスを印加し、蝸牛核細胞を活性化します。

活性化されたT星細胞は、興奮性神経伝達物質を内側オリボ蝸牛ニューロンに放出します。

しかし、球状のふさふさした細胞は抑制経路を活性化し、抑制性神経伝達物質を内側オリボ蝸牛ニューロンに放出します。

興奮性シグナルと抑制性シグナルの統合により、シナプス後電流が発生し、スライス内のニューロンの活動が確認されます。

電気生理学分析用のウェッジスライスをセットアップするには、摂氏35度のaCSFで連続的に灌流されている記録チャンバーにサンプルを入れ、スライスを安定させます。DIC光学系を使用して、スライスの厚い側の聴覚神経根に焦点を合わせ、マイクロマニピュレーターを使用してバイポーラタングステン刺激電極を聴覚神経根に移動し、組織の表面にそっと移動させます。

視野

を薄い側の台形体の腹側核に移動し、561ナノメートルの発光フィルターを使用して、落射蛍光下でのパッチクランプ電気生理学のターゲットとして内側オリボ蝸牛ニューロンを選択します。記録ピペットに提案された実験に適した内部溶液を充填し、DIC光学系の下でパッチし、内側オリボ蝸牛ニューロンから全細胞構成で記録します。

聴覚神経根の電気刺激振幅を調整して、内側オリボ蝸牛ニューロンで一貫したシナプス後イベントを取得します。次に、適切な刺激プロトコルを実行して、内側オリボ蝸牛ニューロンの誘発シナプス電流を観察します。