CA3-CA1シナプス応答のラット海馬スライスへの記録

ラット海馬スライスを電気生理学的セットアップに入れます。

CA3ニューロンから軸索投射を受ける海馬CA1領域の放射層に刺激電極を配置します。

CA1頂端樹状突起の近くに記録電極を配置します。

別の記録電極をピラミダ層層に配置します。

刺激を受けると、CA3軸索突起が脱分極して活動電位を生成し、興奮性神経伝達物質を放出します。

これらの神経伝達物質はシナプス後CA1頂端樹状突起に結合し、興奮性シナプス後電位(EPSP)と呼ばれる正イオン流入と膜脱分極を誘導します。

記録電極測定値は、頂端樹状突起(フィールドEPSPまたはfEPSP)からのEPSPを合計しました。安定したfEPSP信号が得られたら、電極を下げて少し停止します。

刺激強度を適用して fEPSP 勾配との入出力関係を決定し、勾配に基づいて特定の強度を選択して適用します。

2番目の記録電極は、CA1ニューロン細胞体からの結合活動電位を測定し、集団スパイクを生成します。

シナプスのタグ付けおよびキャプチャ実験では、顕微鏡下で、2つの刺激電極をCA1領域の放射層に配置してシェッファー側副線維を刺激し、1つの記録電極をCA1の頂端樹状突起領域の刺激電極の中間に配置して、fEPSP応答を記録します。

個体群の急増を記録するために、ピラミダール層に別の記録電極を配置します。すべての電極がスライスに接触したら、テスト刺激を送り、両方の入力で適切なフィールドEPSP信号が得られることを確認します。

適切なfEPSP信号が得られたら、マニピュレーターの微動ノブを使用して電極をさらに約200ミクロン下げ、スライスが回復するまで20分間待ちます。その後、20マイクロアンペアから100マイクロアンペアまでの電流強度の範囲でフィールドEPSPの傾きを測定することにより、入出力関係を決定します。

次に、入力ごとに、最大フィールドEPSP勾配の40%を誘発する刺激強度を、実験全体を通して一定の刺激として設定します。15〜20分後、ベースラインの記録を開始します。

LTP/LTD 導入の少なくとも 30 分から 60 分前に安定したベースラインを記録します。