In Vitro血液脳関門モデルによるFITCおよびFITC-フェリチンの浸透の研究

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vitro血液脳関門またはBBBモデルを含むマルチウェルプレートから始めます。

このモデルは、マトリックスでコーティングされたメンブレンインサートの上側または血液側に付着した内皮細胞と、下側または脳側に付着した星状細胞で構成されています。

フルオレセインイソチオシアネートまたは蛍光色素であるFITCをコントロールウェルの上部チャンバーに添加します。

逆に、FITC負荷フェリチン、またはFITCフェリチンをサンプルウェルの上部チャンバーに追加してからインキュベートします。

制御井戸では、遊離FITCは上部チャンバーに限定されたままで、BBBを通過する交差は最小限に抑えられます。

一方、サンプルウェルでは、FITC-フェリチン複合体が内皮細胞上の受容体に結合します。

これにより、受容体を介した内在化と下部チャンバーへの輸送が可能になります。

次に、両方のウェルの下部チャンバーから定期的に培地を収集し、蛍光強度を測定します。

対照は蛍光が低く、サンプルは蛍光が高く、FITCとFITCフェリチンのBBB透過性が異なることが確認されています。

血液脳関門システムを通るFITCフェリチンフラックスを測定するには、各製剤の少なくとも3つの血液脳バリアシステムの上部にFITC負荷フェリチンまたは遊離FITCを追加します。

インキュベーターで7時間後、3つのサンプルおよびコントロールインサートの下部チャンバーから2ミリリットルの培地を取り出します。収集したサンプルの 500 マイクロリットルの蛍光強度を蛍光分光計で測定し、プロトコルの書面部分の指示に従って透過 FITC または FITC-フェリチンの濃度を決定します。