Name: マイクロ流体デバイスを用いた細胞のキャプチャ (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T15:28:15.000+00:00
Duration: 29 min 2 s
Description: 学ぶマイクロ流体デバイスを用いた細胞キャプチャと免疫蛍光染色法。全血からCD4陽性リンパ球を分離し、抗体染色とDAPI核染色で細胞を可視化する技術を解説します。

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マイクロ流体デバイスを用いた細胞のキャプチャ

Cell Capture Using a Microfluidic Device

私たちが準備したデバイスは10個または20個入りのキットとしてパッケージ化されており、配送時は保冷ボックスで輸送されます。キットには、実験の実行に必要なすべてのコンポーネントが含まれています。キット内の構成品として、室温で保存可能なすべてのシリンジと緩衝液が入ったパックが含まれています。また、本実験で従うプロトコルのコピーも同梱されています。また、実際のデバイスと、冷蔵保存が必要なすべてのランニングバッファーが入った冷蔵ボックスもあります。通常、キットは10個または20個のグループで梱包されています。使用しないときは、キットを冷蔵保存してください。各シリンジおよび各キット構成品には注意深くラベルが貼られており、これらのラベルは手順書に従うテーブルの内容と対応しています。そのため、個々のステップでどのシリンジまたはキット構成品を使用すべきかについて、曖昧さはなくなります。デバイスを梱包から取り出し、生物安全キャビネット内に配置した後、好中球を分離し、後続のゲノム解析への応用のために溶解させる操作を行います。得られた細胞溶解液を用いて分離を行うか、または細胞溶解液からRNAを抽出するためです。そのため、単に無菌状態であるだけでなく、環境中に通常存在するあらゆるRNAが除去され、作業エリアが清潔な状態であることを確認する必要があります。したがって、RNAを分解する溶液を用いて、作業エリア全体とデバイスを拭き上げることが非常に重要です。通常、RNA SAPやRNAway（複数のメーカーから購入可能です）を使用して、すべての器具と作業面を拭き上げます。本デバイスはヒートシールポーチに梱包されています。各デバイスは密封されており、バーコードが付与されています。臨床検体を使用して作業を行う場合は、このバーコードを記録しておいてください。デバイスの封印を解き、カバーを取り外して、ポンプ保持マニホールド装置に設置します。使用する血液試料は全血試料です。これを標準的な1 mLのBDシリンジで流します。このシリンジには「シリンジ1」とラベルを貼ります。通常は、パッケージからシリンジを取り出し、血液チューブのキャップを慎重に外します。そして、700 µL（0.7 mL）の血液を採取し、その半分である350 µLを1.5 mLチューブに注入します。これにより、血液をさらなる処理に回すことができます。血液サンプルを採取したチューブを次へ回しても、デバイスの故障に備えて十分な血液が残っている状態になります。それでは、血液が入ったシリンジを、このデバイスに接続されたチューブ付きの針に取り付けます。マイクロ流体分離デバイスの取り扱いには十分注意してください。デバイス内に気泡が混入すると、デバイスが正常に機能しなくなるため、十分に注意する必要があります。そのため、通常はシリンジを使用してプラン

Research

JoVE Journal

Biology

生物学

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細胞の急速な機械的な変形は高分子およびナノ物質の細胞内送達のための有望な、ベクトルフリー法として浮上している。このプロトコルは、幅広いアプリケーションのためのシステムを使用する方法の詳細な手順を提供しています。...

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ここでは、高効率のシングルセルの単離と長期のクローン培養を可能にする新しいマイクロウェル設計コンセプトを利用したマイクロ流体プラットフォームを使用して、単一細胞を分離および培養するためのプロトコルを紹介します。...

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マイクロ流体チップを使用した決定論的方法で単一細胞ベースの共培養を確立する

画期的な曲線(BTCs)は、多孔質媒体における細菌の輸送を研究するための効率的なツールです。ここでは、マイクロコピーとフローサイトメトリックカウントと組み合わせて流体デバイスに基づくツールを紹介し、BTCsを取得します。...

流体デバイスと顕微鏡とフローサイトメトリーを組み合わせて、空間スケールを越えた多孔質培地における微生物輸送を研究

臨床用マイクロ流体チップは、臨床患者の血液サンプルの前処理を簡素化し、チップ上でその 場...

汎用性の高い循環腫瘍細胞を単離するための臨床用マイクロ流体チッププラットフォーム

このプロトコルは、個々のヒト末梢血単核細胞のサイトカイン分泌動態を定量的に測定するための高度なマイクロ流体プラットフォームを説明しています。このプラットフォームは、例としてリポ多糖で刺激された個々の細胞ごとに最大3つのサイトカイン(IL-6、TNFα、およびIL-1β)を並行して測定します。...

個々の多機能細胞の同時および逐次サイトカイン分泌を解明するためのマイクロ流体アプローチ 

学ぶマイクロ流体デバイスを用いた細胞キャプチャと免疫蛍光染色法。全血からCD4陽性リンパ球を分離し、抗体染色とDAPI核染色で細胞を可視化する技術を解説します。

マイクロ流体デバイスを用いた細胞のキャプチャ

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