Name: HIV - 1コアのin vitroでの脱殻で (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-08T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: 学ぶHIV-1コアのin vitro脱殻法。ウルトラ遠心分離とキネティックアッセイを用いて、ウイルスコアの安定性と脱殻メカニズムを定量的に解析する手法です。

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HIV - 1エイケン実験室での脱殻の研究は、NIHの助成金AI40364、AI50423とAI076121によってサポートされていました。 P24 ELISAで使用される試薬を含む、いくつかの重要な材料は、、NIH AIDSリサーチ＆リファレンスプログラム、エイズの部、NIAID、NIHによって提供されていました。

1。 HIV - 1粒子の製造先に進む前に、許可を得なければならないし、感染性HIVのために承認されたバイオセーフティ施設で働くためにあなたの機関のバイオセーフティのオフィスからのガイドラインに従ってください。あなたは適切なケアと安全注意をバイオセーフティ実験室で作業中に続いていることを確認する必要があります。 HIV - 1粒子の製造は、通常、リン酸カルシウムトランスフェクション法7,8を用いて HIV - 1プロウイルスDNAと293T細胞の一過性トランスフェクションによって実行されます。感染したT細胞の培養によって育成された高力価のウイルスストックにも適しています。 <ol><li> 10％ウシ胎児血清（FBS）および抗生物質を補充を含むダルベッコ改変イーグル培地（DMEM）で培養293T細胞[ペニシリン（100 IU / ml）およびストレプトマイシン（100μg/ mlの）] 37℃、5％CO 2で。 </li><li> 0.25％トリプシン- EDTAとシード2 × 6を使用し、ほぼコンフルエント皿から細胞を剥離</li><li>翌日、細胞単層は、約25％コンフルエントとトランスフェクションのための準備ができているはずです。トランスフェクトされる細胞六皿のために、滅菌水2.7 mlの容積にプロウイルスDNAの120μgを持ち出す。この混合物に2.5 M CaCl 2を 0.3 mlおよび2XBBSの3 mlを追加し、上下に数回ピペッティングして適切に混合する。混合物が10〜20分間室温で放置する。 </li><li>ミックスに優しく渦巻くながら、各皿の中心に得られた混合物を滴下液1mlを追加。 35 ° C、3％CO 2インキュベータセットで一晩の料理を（〜16時間）に置きます。 </li><li>培地を吸引除去し、穏やかに5 mlのPBSを加える。 </li><li> PBSを吸引除去し、新鮮培地5mlを加える。文化37＆でのインキュベーターで細胞度、C、5％追加の24〜48時間のためのCO 2。 </li><li>ウイルス粒子を含む培養上清を収集し、50 mlコニカル遠心チューブに移す。すべての皿から上清を組み合わせて、細胞をペレット化し、破片に5分間1,500 xgで遠心。 0.45μmの孔サイズのシリンジフィルターを用いて上清をフィルターします。注意事項は、生きているウイルスでの作業中にエアロゾルの形成を最小限に抑えるよう注意が必要です。これは、遠心分離のステップの間にO -リングまたはローターバケットカバー付きコニカルチューブの使用が含まれています。これが不可能な場合は、チューブのスクリューキャップをパラフィルムでラップする必要があります。 </li></ol> 2。超遠心分離によるHIV - 1ビリオンの濃度<ol><li> 38.5ミリリットルのポリアロマー遠心管（ベックマンSW32Tiローターまたは同等品用）の培養上清（30 ml）を置きます。穏やかに5 mlのピ​​ペットを用いてPBSで20％のショ糖の5mlのソリューションを持つウイルスを含む上清をアンダーレイ。 </li><li>で3時間遠心4℃32000回転° C（R 最大で175000 × g）でペレットのウイルス粒子へ。 </li><li>チューブの底にペレットを乱さないように注意しながら、吸引して上清を取り除く。 4でチューブと場所に1XSTEバッファー（10mMのトリス- HCl [pH7.4の]、100mMのNaCl、1mMのEDTA）0.5 mlを加え℃で1時間ペレットを緩めます。静かにピペットで吸排出を数回チューブの底からペレットを切断するためにワイドボア1mlのピペットチップを使用する。次に、発泡ように注意しながら、1.5 mlのマイクロ遠心チューブに緩んでペレットを転送する。ウイルスの小さな塊が分散できるように、別の1〜3時間4℃でインキュベートする。この期間中、ステップ3.1で説明したショ糖密度勾配を準備。 </li><li> 4で8000回転（6,000 × g）で上下にそっとピペットウイルス懸濁液を数回し、遠心を·残留凝集塊を除去するために1分間冷却遠心でC。このプロセス中にサンプルの寒さを保つ。 </li></ol> 3。ショ糖勾配コアを分離する遠心分離 HIV - 1のコアは、HIV - 2コア10の精製の ​​ための前述の方法の変更である"スピンスルー"方式9を使用して絶縁されています。 <ol><li> SW32.1Tiローター用14.5ミリリットルのポリアロマーの遠沈管に1XSTEバッファに12ミリリットルリニア30％〜70％ショ糖勾配を準備します。勾配を準備するには、かつての20 mlの勾配を使用して、代わりに近い側の70％ショ糖溶液6ml（近い出口ポートへの）と遠い側の30％ショ糖溶液6mlを。気泡は、2つのチャンバーを接続するチャネルにトラップされていないことを確認してください。底部から下部に85％ショ糖溶液1 mlを含むチューブの上部にグラデーションを送り出す旧オートイルミナフローの勾配を使用してください。ゆっくりと4で勾配を配置° C冷却するまで（2-4時間）。 </li><li>ワイドボア1mlのピペットチップを使用すると、ゆっくりと1％トリトンX - 100を含むSTEの15％ショ糖溶液0.25mlを持つグラデーションをオーバーレイ。 </li>ワイドボア1mlのピペットチップを使用してSTEで7.5％ショ糖溶液0.25mlと静かにオーバーレイ。層を混合しないように注意してください。 <li>ステップ2.4​​から0.5 mlのウイルス懸濁液と優しくオーバーレイ。この手順は下に置かれたショ糖層の勾配と混合であらゆる妨害を避けるために慎重に行う必要があります。 </li><li>一晩4 32000回転（R 最大で187000 × g）で（16〜20時間）で予冷SW32.1Tiのバケットと遠心機でチューブを置きます℃を遠心分離機内の真空が250ミクロンに達するまで、遠心機の一時停止を避けるために、遠心分離を開始しないでください</li><li>オートイルミナフロー勾配分留塔を使用してグラデーションの上から下まで1mlの画分を集める。採取後すぐに氷中にチューブをセット。反転数回でチューブの内容物を混合し、ELISAによって定量化または逆転写酵素活性アッセイのための各フラクション50μlを撤回。 </li></ol> 4。 HIV - 1コアの局在とコアの保管<ol><li>脱外アッセイを行う前に、それは、分数はそのままHIV - 1のコアが含まれているかを判定することが重要です。これは、ステップ3.6からの50μlのアリコートを用いてp24をELISAまたは逆転写酵素活性のアッセイによって決定することができます。 </li><li>コアに関連付けられているCAの回復は、多くの場合、コアの安定性に関連しています。 P24 ELISA 9各画分からサ ​​ンプルを使用してコアに関連付けられたCAを測定します。また、各画分の逆転写酵素活性を測定する。両方の方法を使用してピークは分数10日前後になります。 </li><li>コアを含む画分をプール。コアは0.2〜0.3mlのアリコート、-80℃で液体窒素や店舗で急速冷凍℃にプールされたコアは、すぐにアリコートをアッセイを脱外に使用されるものではない場合この方法で凍結コアは脱外アッセイに適しています。コアに関連したCAの収率は通常、P24あたりミリリットルの1〜2μgのか合計ビリオン関連の約15％です。P24。 </li></ol> 5。 HIV - 1脱殻の速度論的分析<ol><li>脱殻反応ごとに必要なHIV - 1コアの量は、約50 ngのです。 in vitroの脱殻アッセイで実行するには、懸濁液の粘度を減らすために冷たい1XSTE等量のバッファーでのコアのアリコートをpredilute、ピペッティングエラーを最小限に抑える。 </li><li>さらに1.5 mlのマイクロ遠心チューブにBSAの10μg/ mlを含む冷1XSTEバッファー0.15 mlのコアの100μlを希釈する。我々は、チューブの壁に、CAの吸着を最小限に抑えるためにBSA（10μg/ mlの）とSTEバッファーを補足する。チューブを転倒数回で混ぜる。サンプルはボルテックスしないでください。 37水浴中でチューブをインキュベート° Cタイムアウト間隔（15、30、60および120分）。チューブは、さらに温暖化を確実にするためには、少なくとも、最大内部サンプルのレベルに水浴に浸漬する必要があります。 </li><li> - インキュベーションの間、静かに（通常5定期的にチューブの内容物を混ぜるチューブをフリックで10分）。ゼロ分の制御については、冷1XSTEバッファー0.15 mlのコアの100μlを希釈し、実験（120分）の全体の長さのために氷上でインキュベートする。ゼロ分の制御は、基底脱殻の値を与え、異なる時間間隔で37 ° Cでインキュベートしたコアの脱外の増加を決定するために使用されます。 </li><li>潜伏期間の終わりに、10分間氷上でチューブを配置することにより、脱外のプロセスを停止します。 </li><li> 4℃20分間℃、45000回転（R 最大で125000 × gでTLA - 55ローター）でチューブを遠心これは、ペレットはそのままコアとコアの脱外の結果として、リリースされたフリーのCAは、上清に残るでしょう。ローターは、° Cより前のサンプルをロードするために4であらかじめ冷却してください。 </li><li>好ましくは室温で保存したゲルローディングチップを使用して、新しい冷却したマイクロチューブに上清を移す。ペレットは、肉眼では表示されませんがございますので、細心の注意wを取る上清をピペッティングhile。 ELISAのサンプルの希釈液を250μl（PBS中の0.5％トリトンX - 100および5％ドナー子牛血清）でペレットを再懸濁します。ペレット、ELISAの試料希釈液を追加した後の渦の効率的な溶解を確実に。次の節で説明するようにP24 ELISAを用いてペレットと上清のCAコンテンツを定量化する。 </li><li>脱殻の範囲は、上清に存在するCAの割合を計算することによって得られる。 </li></ol> 6。 P24 ELISAによるCAのためのアッセイ<ol><li>多くの市販ELISAキットをご用意していますし、CAを定量化するために使用することができます。あらゆる商用または"社内"ELISAを使用して、アッセイの直線性を決定するためにP24規格が含まれています。試料の希釈は正確性を保証するためにアッセイされるべきである。 </li><li>我々は日常的にCAのアッセイに使用する自家製のELISAを開発した。手順は前回の報告書11から適応され、NIHのAIDから利用可能なキャプチャおよび検出器の抗体を使用して実行されますSの研究およびリファレンス試薬プログラム。 </li></ol> 7。代表的な結果： コアを含む画分を決定するためのELISAの結果の例を図1に示されています。分画（1ミリリットルずつ）収集した後、各フラクションからサンプルの50μlを段階希釈を作るために使用され、ELISA法により分析した。 twelve分数の値を合計したものP24は14.5μgのだ。この図の画分に8から10に含まれるコアを示した。コアを含有する分画のためのP24値は2.17μgのだ。 （14.97パーセント）コアに関連するp24の割合は、合計P24値（14.5μgの）へのコアの分画のためのP24値（2.17μg）の比をとることにより決定した。画分1または2が常にp24の最高額が含まれますが、これはコアに関連付けられていないフリーのCAを表します。これは、後続の各画分とP24の値が徐々に減少、その後急激な増加とp24の最後に急落が続いているの値。勾配のロード中に適切なケアが行われている場合、コアに関連したCAのピークは、フラクション10の周囲に見られる。 HIV - 1コアの脱外の反応速度を測定することにより得られる典型的な結果を図2に示されています。グラフは、野生型HIV - 1コアの脱外で時間依存的な増加を示しています。値を脱外％が上清に存在するCAの割合を計算することによって得られた。練習すれば、このアッセイは、非常に再現性とin vitroでのウイルスのコアの安定性を判別するのに便利です。アッセイの再現性は、手続き時にサンプルの適切な取り扱いに大きく依存することに注意してください。コアは熱に不安定なので、サンプルは℃でアッセイを通して、インキュベーション期間中を除いて4℃で維持されるべきである。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/3384/3384fig1.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図1"> 1平衡密度勾配遠心分離を図HIV - 1のコア。濃縮したウイルス懸濁液を1％トリトン- X - 100を重ねて30から70パーセント直線ショ糖勾配の上に塗布した。 187000 × gで、4で一晩遠心分離に続い° C、1 mlの画分を上から下へ（フラクション1）（フラクション12）から収集されたとp24をELISAによって定量した。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3384/3384fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="図2"> in vitroで HIV - 1脱殻の2時間コースを示します 。精製HIV - 1のコアは、° C指定された時間間隔で希釈し、37℃でインキュベートした。ゼロ分のサンプルは、実験の全体​​の長さを氷上でインキュベートした。インキュベーション後、サンプルは4℃で20分間125000 xgで超遠心した上清とペレットは、P24 ELISAによって分離し、分析した。プロトコルのテキストで説明されているように脱殻の程度を決定した。それぞれの脱外反応は二重に行われた、エラーバーは2つの値の範囲に及ぶ。

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<li>Li, S., Hill, C. P., Sundquist, W. I., Finch, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Image+reconstructions+of+helical+assemblies+of+the+HIV-1+CA+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Image reconstructions of helical assemblies of the HIV-1 CA protein.</a> Nature. 407, 409-413 (2000).</li>
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<li>Accola, M. A., Ohagen, A., Göttlinger, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+human+immunodeficiency+virus+type+1+cores%3A+retention+of+Vpr+in+the+absence+of+p6%28gag%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Isolation of human immunodeficiency virus type 1 cores: retention of Vpr in the absence of p6(gag.</a> J. Virol. 74, 6198-6202 (2000).</li>
</ol>

利害の衝突は宣言されません。

方法は、標的細胞にHIV - 1脱殻を分析するために、検証方法の無効性が、特にためにHIV - 1のライフサイクルのこの段階を、研究するための有用なin vitroで脱外勉強するHIV - 1のコアを浄化するためにここで説明する。このメソッドはコアを浄化するために平衡超遠心分離を使用していますが、その他は1％トリトン- X - 100 12、13または0.1％のTriton - X - 100 14、15に重ねショ糖クッションを介してペレットと簡単な溶解後に直接ペレットを使用している。 この方法で得られたコアの回復は、実験的な変動の対象となります。このプロトコルの成功の変数は、トランスフェクション効率です。一般的に我々は、勾配上でp24の少なくとも7μgのと同等のウイルス量を読み込みます。当研究室では、ウイルス産生のためのリン酸カルシウムトランスフェクション法を使用しています。他のトランスフェクションの方法も適切かもしれないが、我々は、コアの分離のためにそれらを評価していない。他の重要なVARコアの歩留まりに影響を与えるiablesはグラ...

<table border="1"><tbody><tr><td width="190"> 試薬の名前 </td><td width="197"> 会社 </td><td width="114"> カタログ番号 </td><td width="161"> コメント（省略可能） </td></tr><tr><td> DMEM </td><td> Cellgro </td><td> 10から013 - CV </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> Cellgro </td><td> 21から031 - CV </td><td></td></tr><tr><td>トリトンX - 100 </td><td> Mallinckrodtベイカー株式会社</td><td> 9002-93-1 </td><td></td></tr><tr><td>ツイーン20 </td><td>アクロス</td><td> 9005-64-5 </td><td></td></tr><tr><td> 0.25％トリプシン- EDTA </td><td> Cellgro </td><td> 25から053 - CI </td><td></td></tr><tr><td> 2XBBS </td><td></td><td></td><td>構成：50mmのBES [P H 6.95]、280 mM NaClおよび1.5mMののNa 2 HPO 4。 6.95にpHを調整する室温で。滅菌＆-20℃でアリコートで保存をフィルタリング</td></tr><tr><td>コー​​ティングの抗体：P24に対するモノクローナル抗体（183 - H12 - 5C） </td><td> NIH AIDSリサーチ＆リファレンス試薬プログラム</td><td> 3537 </td><td></td></tr><tr><td>一次抗体：HIV - Igは（高度免疫ヒト患者の血清） </td><td> NIHのエイズ研究とリファレンス試薬プログラム</td><td> 3957 </td><td></td></tr><tr><td>二次抗体： ヤギ抗ヒトIgG、共役ペルオキシダーゼ</td><td>ピアース</td><td> 31130 </td><td></td></tr><tr><td> HRP基質</td><td> KPL社</td><td> 50-76-11 </td><td></td></tr><tr><td> Immulon 2HB 96ウェルプレート</td><td>サーモサイエンティフィック</td><td> 3455 </td><td></td></tr><tr><td> SW32TiとSW32.1のTiローターと互換性のある超遠心機</td> &lt;TD&gt;ベックマンコールター</td><td></td><td></td></tr><tr><td> TLA - 55ローターと卓上超遠心機</td><td>ベックマンコールター</td><td></td><td></td></tr><tr><td>高速マイクロチューブ</td><td>ベックマンコールター</td><td> 326823、358123、357448 </td><td></td></tr><tr><td>オートイルミナフロー密度勾配フラク</td><td> Labconco株式会社</td><td> 4517000 </td><td></td></tr><tr><td>勾配元</td><td> CBSサイエンティフィック（株）（株） </td><td> GM - 20 </td><td></td></tr></tbody></table>

hiv - 1コアのin vitroでの脱殻で

In vitro Uncoating of HIV-1 Cores

レトロウイルスのゲノムは、脂質エンベロープに囲まれたカプシドに包まれています。このようなHIV - 1のようなレンチウイルス、の場合は、円錐形のカプシドの殻は、六角形の格子として配置されたCAのタンパク質で構成されています。カプシドはコーン1、2の狭い方の端で7広い端の五量体と5でクローズされます。このカプシドの殻で覆われて、ウイルスリボ核タンパク質複合体である、と一緒に彼らは、コアを備える。 標的細胞膜とウイルス膜の融合に続いて、HIV - 1は細胞質に放出される。カプシドは、脱殻と呼ばれるプロセスで可溶性の形態3にフリーCAを解放逆アセンブルします。 HIV - 1脱殻の細胞内の場所とタイミングはよくわかっていない。キャプシドの安定性を変更するカリフォルニア州の単一アミノ酸置換はまた、細胞4を感染させるHIV - 1の能力を損なう。これは、カプシドの安定性は、HIV - 1感染に重要であることを示しています。 </p&gt; HIV - 1脱殻は、このプロセスのための高感度かつ信頼性の高いアッセイの可用性の不足のために勉強することは困難であった。ここでは、感染性HIV - 1粒子から分離されたコアを用いてインビトロで脱殻を研究するための定量的な方法を説明します。アプローチは、寒さで、洗剤の層を通って直線スクロース勾配に集中ビリオンの沈降によってコアの分離を行います。脱殻を定量するために、分離されたコアは37℃でインキュベートする·さまざまな時間間隔および超遠心分離によって、その後ペレット化のためのC。脱殻の範囲は、上清に、CAの割合を定量することによって分析されます。このアプローチは、HIV - 1キャプシドの安定性4、5、6のウイルス変異の影響を分析するために採用されています。また、HIV - 1の脱殻の細胞因子の役割を研究するために有用でなければなりません。

脱殻は、HIV - 1のライフサイクルの初期段階に必須の工程であるとカプシド殻の分解とウイルスリボ核タンパク質複合体（vRNP）のリリースとして定義されています。ここで、我々はHIV - 1ビリオンから無傷のコアを分離するためと、その脱殻を定量化するための手法を示します<em&gt; in vitroで</em&gt;。

HIV - 1コアのin vitroでの脱殻で

レトロウイルスのゲノムは、脂質エンベロープに囲まれたカプシドに封入されています。HIV-1などのレンチウイルスの場合、円錐形をしたカプシド殻は...

この手順の全体的な目的は、HIV-1のin vitro ENCコーティングを行うことです。これはまず、HIV-1粒子を作製することで達成されます。次に、バリアントを超遠心分離によって濃縮します。その後のステップでは、ショ糖密度勾配超遠心分離によって原因物質を単離します。最後に、HIV-1の脱殻（uncoating）に関するキネティックアッセイを行います。最終的に、プレートおよび上清中のp24含量をELISAで定量することにより、HIV-1の脱殻が時間依存的に起こることが結果として示されます。本手法は、脱殻における細胞因子の役割や、脱殻前のウイルスキャプシドの安定性に及ぼす変異の影響など、HIV-1分野における重要な疑問への回答に寄与します。感染性HIV-1を用いたバイオセーフティ施設での作業を行うには、所属機関のバイオセーフティ管理責任者から許可を得て、ガイドラインに従わなければなりません。バイオセーフティラボでの作業中は、適切な取り扱いと注意を払う必要があります。本デモンストレーションでは、293T細胞にHIV-1プロウイルスDNAを一過性導入し、HIV-1粒子を産生させます。リン酸カルシウム法を用いたトランスフェクションの前日に、あらかじめ培養した2 9 3 T細胞を用意し、0.5% trips in EDTAを用いてプレートから剥離させる。バリアント作製のため、100 millimeter培養皿6枚に播種する。翌日、細胞単層が約25%confluentになり、トランスフェクションに適した状態であることを確認する。6枚の皿にトランスフェクションさせるため、120 microgramsのプロウイルスDNAを使用し、記述されたプロトコルに従って塩化カルシウムとbest buffered salineを含む混合液を調製する。得られた混合液1 milliliterを、各皿の中央に、緩やかに回転させて混ぜながら滴下する。その後、皿を35 degrees Celsius、3%carbon dioxideに設定したインキュベーターに入れ、一晩静置する。一晩インキュベートした後、培地を吸引除去し、5 mLのPBSを静かに加えます。次にPBSを吸引除去し、5 mLの新鮮な培地と交換します。この状態で、細胞を37 °C、5%二酸化炭素のインキュベーター内でさらに24〜48時間培養します。続いて、ウイルス粒子を含む培養上清を回収し、50 mLのコニカルチューブに移します。すべてのディッシュからS上清を回収して合わせた後、サンプルを遠心分離して細胞およびデブリをペレット化し、次いで0.45 micronの孔径を持つシリンジフィルターを用いて上清をろ過します。培養上清を38.5 milliliterのポリアラミン遠心チューブに入れ、HIV-1 furionの濃縮を開始します。ウイ

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

この資料では、全内部反射蛍光（全反射）顕微鏡による平面脂質二重層をサポートしてガラス基板上にHIV-1エンベロープによって誘導されるウイルス学的シナプスの形成を可視化する方法について説明します。方法はまた、HIV-1エンベロープ誘発性ウイルス学的シナプス形成時に発生するシグナル伝達分子の活性化および再配布を検出する免疫​​蛍光染色と組み合わせることができます。...

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蛍光によるウイルスRNAの検出<em&gt;その場で</em&gt;ハイブリダイゼーション（FISH）

不定冠詞<em&gt;のin vitro</em研究する&gt;共同感染モデル<em&gt;熱帯熱マラリア原虫（Plasmodium falciparum）</emヒトの第一次単球由来の免疫細胞に&gt;-HIV-1の相互作用

抗体の中和を評価し、効果的なワクチン免疫原の設計を導くためには、ウイルス表面抗原のコンフォメーションを理解する必要があります。ここでは、トランスフェクションされた細胞の表面に発現する三量体HIV-1...

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の測定インビトロ HIV-1プレインテグレーション複合体の統合活動

HIV 1 融合を介して流れ cytometry または蛍光顕微鏡による検出可能な緑の蛍光蛋白質の表現を報告する細胞に基づく試金を記述します。無料のセル、セルを感染システムでウイルスのエントリ (特にの融合手順)...

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HIV の効率的な再活性化の機能評価および潜在的な proviruses のクリアランスのための高いスループット プロトコル説明および HIV 転写の介入の影響をテストおよび選択的スプライシングによって適用しました。LTR...

In Vitro 逆に HIV 転写、スプライシングのエージェントの待機時間の高スループット

哺乳類細胞の in situ クライオトモグラフィーのためのサンプル調製

ここでは、特にHIV-1感染に重点を置いて、小胞体(ER)ストレスとアンフォールデッドタンパク質応答(UPR)の活性化を決定するためのいくつかの確立された方法について説明します。この記事では、ER ストレス/UPR が HIV-1...

HIV-1感染T細胞における小胞体ストレスとアンフォールドタンパク質応答の測定とHIV-1複製におけるその役割の解析

学ぶHIV-1コアのin vitro脱殻法。ウルトラ遠心分離とキネティックアッセイを用いて、ウイルスコアの安定性と脱殻メカニズムを定量的に解析する手法です。

HIV - 1コアのin vitroでの脱殻で

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