A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

Regina Salvat; Leonard Moise; Chris Bailey-Kellogg; Karl E. Griswold

doi:10.3791/51308

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Biology

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JoVE Journal Biology

A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

ペプチドエピトープの定量分析のための高スループット、MHC II結合アッセイ

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07:59 min

March 25, 2014

DOI: 10.3791/51308-v

Regina Salvat¹, Leonard Moise², Chris Bailey-Kellogg³, Karl E. Griswold¹

¹Thayer School of Engineering,Dartmouth College, ²Institute for Immunology and Informatics,University of Rhode Island, ³Department of Computer Science,Dartmouth College

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

組換えヒトMHC II分子と生化学的アッセイは、免疫原性エピトープ同定、削除、または設計に迅速かつ定量的な洞察を提供することができます。ここで、384ウェルプレートにスケーリングペプチド-MHC II結合アッセイが記載されている。この費用対効果の高い形式は、タンパク質の脱免疫やワクチンの設計と開発の分野で有用であることを証明する必要があります。

この手順の全体的な目標は、ハイスループットの3 84ウェルプレートアッセイを使用して、短いペプチドとヒトMHC 2つの免疫タンパク質との結合を定量化することです。これは、まず、目的のペプチドとの溶液相競合結合アッセイを行うことによって達成されます。第2ステップでは、平衡化したペプチドMHC 2複合体を、高結合ELIZAプレートに固定化された抗MHC 2抗体で捕捉します。

次に、捕捉された複合体を標識されたストレプトアビジンとインキュベートし、次に結合していないストレプトアビジンを洗い流し、捕獲したアヘンを活性化します。最終的には、時間分解蛍光法を使用して、捕捉されたMHC 2つのコントロールペプチドのレベルを定量化できます。この方法は、標的タンパク質の免疫原性の可能性に関する予備的な洞察を提供することができます。

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