調製とキャラクタリゼーション個々のとマルチ薬ロード物理的に捕捉さ高分子ミセル

次の実験の全体的な目標は、関心のある疾患状態で評価する前に、薬物をロードした細胞を調製し、特性評価する段階的なプロセスを概説することです。これは、研究用の再現性のあるMy細胞を生成するために、溶媒鋳造法によってMy細胞を調製することによって達成されます。第2のステップとして、細胞のローディングの安定性とサイズが評価され、これにより、私の細胞が臨床的に関連性のある濃度をロードして保持する能力が決定されます。

次に、in vivo の安定性を評価する前に、My 細胞が適切な in vitro 放出特性を持つことを確認するために、My 細胞からの薬物放出速度を決定します。この結果は、再現性のある安定したmy細胞が、ここで紹介した評価技術に基づいて、さまざまな疾患状態で薬物送達を追求するためのプラットフォームを提供できることを示しています。この技術や平衡ローディング法や透析法などの既存の方法の主な利点は、再現性のある薬物ローディングとサイズでミオシンをはるかに迅速に調製できることです。

この技術の意味は、ナノスケールの医薬品が従来の形態を超えた機会を提供するため、さまざまな病状の治療や診断にまで及びます、一般的に始めたばかりの個人は、これらの技術に苦労する可能性がありますが、それらは単純ですが、それでもリリース研究を行うことができるため、実際にはバースト効果を評価することはできません。これらの手順を実証するのは、シャーマンデューク、私の大学院生、およびディーパ私の共同研究者であり、まず、DTXの1ミリグラム、EVRの1ミリグラムとペグ4、000ブロックPLA 2200の15ミリグラムの重量を量る私の細胞またはDDMの二重薬のための。秤量した後、薬剤とポリマーを0.5ミリリットルのアセトニトリルに溶解し、次いで溶液を5ミリリットルの丸底フラスコに移し、ロータリーエバポレータを使用して減圧下で薬物ポリマーアセト溶液を蒸発させることにより、薄い薬物分布ポリマーフィルムを形成する。

これに続いて、50°Cに予熱した0.5ミリリットルの脱イオン水で薬物ポリマーフィルムを再水和し、50°Cの水浴中でフラスコを静かに振とうしてマウス細胞を形成します。溶液を遠心分離管に加え、Gの7,200倍で3分間回転させます。針で溶液を汲み上げ、得られたミセラ溶液を0.2ミクロンのナイロンフィルターを使用して新しい1.5ミリリットルの遠心分離管にろ過し、未解決の薬物や汚染物質を除去しますこの時点で、アセチルI試験の移動相と水で新たに調製したマイセルを水で希釈し、アセチルI試験の移動相で摂氏40度で平衡化したC 8カラムで逆相HPLC分析を行います。逆相HPLCで分析する前に、1対100の比率で、初期薬物負荷を決定します。

希釈していない細胞を室温で48時間保存した後、新鮮な希釈サンプルを調製して逆相HPLCで再評価し、48時間にわたる細胞の薬物安定性を決定します。227ナノメートルと279ナノメートルのDTXとDVRのピークを、それぞれ1.7分と5.7分の保持時間で監視します。データを、薬物負荷の平均プラスまたはマイナス標準偏差として表示します。

次に、新たに調製した細胞と脱イオン水を1〜20の比率で希釈し、最終ポリマー濃度を1ミリグラム/ミリリットルにします。溶液を獣医に移し、動的光散乱測定を行います。ヘリウムネオンレーザーの強度を173度で測定して、散乱を決定します。

データを平均 Z サイズ、標準偏差、プラスまたはマイナス標準偏差、および分布の多分散指数または PDI として表示します。前述のようにDDMを調製した後、2.5ミリリットルのmy細胞を分子量カットオフが7, 000グラム/モルの3ミリリットルの透析カセットにロードします。次の間隔で、カセットを2.5リットルの10ミリモルpH7.4リン酸緩衝液に入れます。

150マイクロリットルの溶液を引き出し、150マイクロリットルの新鮮なバッファーと交換します。バッファを 3 時間ごとに交換して、同期条件を確保します。逆相HPLCを使用してサンプルを分析し、薬物濃度曲線を決定します。

統計ソフトウェアD-T-X-E-V-Rを使用して、1つの位相指数関連を持つ単純な拡散モデルに基づいて薬物放出データを適合させると、DDMはPEG 2000ブロックPLA 1800またはPEG 2000ブロックPLA 2200で48時間にわたって同様の安定性を示しました。私の細胞は、室温で48時間で初期負荷の97%以上を保持していました。動的光散乱の結果に基づくと、すべての細胞はPDI値が0.2未満の単峰性分布を示しました。

データに基づくと、個々のマイセルとDDMからのDTX放出は、48時間で約60%でした。個々のmy細胞からのEVR放出とDDMは、それぞれ60%と50%でした。ここでは、個々の細胞とDDMからの50%の薬物放出に必要な時間と、適合データの良さを示します。

EVRの個々の、私の細胞を除くすべての私の細胞のための曲線フィッティングの良さは、私の細胞は0.950以上であり、これは一次放出の仮定が個々の私の細胞とDDMからの薬物放出を説明するための良い近似であることを意味します一度習得すると、これらの技術は、数時間から数週間で私の細胞として薬物やポリマーのライブラリで日常的に行うことができます。この手順に参加する際には、これらの手順に従って細胞培養または動物モデルにアクセスする前に、my細胞を完全に特性評価することを覚えておくことが重要です。リポソーム送達システムのような他の送達システムも、治療の有効性における薬物送達システムの役割についての質問に答えるために評価または特徴付けることができます。

このビデオを見た後、疾患で細胞を評価する前に、薬物ローディングの調製方法と特性評価の方法を十分に理解しているはずです。関心のある状態。