パラレル・セグメントフローカラムをチューニングし、多重化された検出のイネーブル化

この HPLC 手順の全体的な目標は、並列セグメント化されたフローカラムを調整してマルチプレックス検出を可能にすることです。この方法は、健康とウェルビーイング、環境科学、法医学、およびバイオディスカバリーなどの複雑なサンプルの分析を必要とするあらゆる分野の重要な質問に答えます。この技術により、包括的なサンプル分析が可能になると同時に、複雑な混合物中の物質の化学的および生物活性的性質に関する情報も得られます。

また、マルチ検出プロトコルにより、迅速な分析も可能です。この方法により、コーヒーやワインなどの複雑な混合物の化学的フィンガープリントを定義するための戦略を開発でき、メーカーは自社製品と安価な偽造品種との違いを見分けることができます。最初は、正確な分析のためにサンプル全体を1つの検出器だけに送らないのは異例に感じるかもしれません。

ただし、各フローストリーム内の分析種濃度は、従来のカラムの総フローストリームよりも高くなります。まず、移動相AとBにそれぞれ100%UE水と純粋なメタノールを使用してHPLC装置をセットアップします。MS 検出器を使用する場合は、両方の移動相に 0.1% ギ酸を添加し、製造元の指示に従って HPLC ポンプをパージします。

MS UV VS.そしてDPPH検出器。製造元の指示に従ってください。検出器ラインのデッドボリュームが最小になるように、コンポーネントが適切に配置されていることを確認してください。

次に、UV VISTA 検出器の波長を、ここでサンプルに固有の波長に設定します (MS 検出器の場合は 280 ナノメートル)。トータルイオンカウントまたはフルスキャン検出法によるTIC分析には、ポジティブモードを使用します。

MS検出器の温度とガス流量を次の値に平衡化します。気化器温度500°C、キャピラリー温度350°C、補助ガス流量40台、掃引ガス流量5台、シースガス量60台、噴霧電圧3.5キロボルト。DPPHラジカル試薬を調製するには、まず25ミリグラムのDPPHラジカルを250ミリリットルのメタノールに溶解し、メスフラスコに入れます。

溶液に250マイクロリットルのギ酸を加え、溶液を10分間超音波処理します。次に、フラスコとホイルを覆って光の露出を防ぎます。次に、DPPHラジカルシステムをセットアップするようにメーカーからアドバイスされているように、DPPHラジカル溶液でポンプをパージします。

ポンプラインがTピースの入口に固定されていることを確認してから、100マイクロリットルのリアクションコイルをTピースの出口に接続します。リアクションコイルENCケースのもう一方の端、リアクションコイル、カラムヒーターに検出器を取り付けます。最後に、DPPHラジカルUVV検出器を520ナノメートルに設定します。

平行セグメントフローカラムまたは PSF カラムを構築するには、まずカラムインレットを HPLC 装置に接続します。次に、チューブを使用して中央のポートをMS検出器に接続します。同じ寸法のチューブを使用して、1つの周辺カラムポートをUV VS検出器に接続し、もう1つをDPPHラジカル検出システムのTピースに接続します。

未使用の周辺機器ポートはコラムストッパーでブロックします。HPLCの流量を、4.6mm、内径、長さ250mmのカラムに対して、100%移動相Bの1分あたり1mmLに調整します。20分間平衡化します。

PSFシステムのチューニングを開始するには、まず空の収集容器を引き裂きます。これらのバイアルを使用して、UV VSから移動相を別々に収集します。そしてDPPHラジカルポート。収集期間をメモし、各容器に少なくとも500ミリグラムの溶媒を収集します。

次に、収集容器の重量を量って移動相の質量を決定し、その質量をメタノールの密度で割って、各ポートから収集した移動相の体積を計算します。最後に、MS検出器への流量を決定し、テキストプロトコールで規定されている総流量のパーセンテージとして、すべての検出器の流量比率を計算します。流量比が理想値から大幅に逸脱している場合は、必要に応じてチューブを追加して背圧を調整し、収集と計算のプロセスを繰り返します。

最後に、DPPHラジカル試薬ポンプの流量を、検出器に接続された出口ポートの流量と一致するように設定します。マルチプレックス HPLC 分析をコーヒーサンプルで行いました。DPPHラジカルUV VS.また、Ms.Chromatogramsは、DPPHラジカルに陽性反応を示したサンプル中の化合物を、

MSS TIC検出器から陽性反応が認められた保持時間アライメントに基づいて、UV反応とMS反応に容易に一致させることができ、ピークの分子量を記録しました。異なる検出プロセス間でピークをマッチングさせることが容易なため、コーヒーのような複雑なサンプルのスクリーニングと特性評価を迅速かつ効率的に行うことができます 一度習得すれば、この手法は約1時間でセットアップでき、この手順に従ってサンプル分析の準備が整います。屈折率蛍光などの他の検出器や、化学発光などの化学ベースの検出を使用して、追加のサンプル情報を取得できます。

このビデオを見た後、複雑なサンプルをより深く理解するために、多重化検出プロセスの重要性を認識する必要があります。さらに、並列セグメント化されたフローカラムを使用したマルチプレックス検出は、バイオ探索を行うための非常に効率的な方法です。