解剖やイトヨ鰓スケルトンのフラットマウント

この手順の全体的な目標は、トゲウオの分岐スケルトンを解剖してフラットマウントすることです。この方法は、発生、遺伝学、進化の分野における重要な質問に答えるのに役立ちます。動物が新しい環境にどのように適応するか、そして成長中に成体の形態の多様性がどのように生じるかなど。

この手法の主な利点は、分枝骨格を解剖してフラットマウントすることにより、ホールマウントでは研究できないさまざまな栄養特性を視覚化できることです。準備として、3つの脊椎のトゲウオの関連する頭の骨格形態を確認します。魚を解剖する準備をした後、鋭い番号の5の鉗子を目の側面に45度の角度で挿入して、目を覆っている膜に穴を開けることから始めます。

次に、ヨーグルトの容器の蓋のように目の膜をはがします。次に、目の後ろに開いた鉗子を挿入し、視神経をつかんで目を取り出します。目に穴を開けないように注意してください、そうしないとメラニンが漏れます。

反対側の目でこのプロセスを繰り返します。次に、小さなハサミの刃をオペクルフラップの後側の下に置き、オペクルの背側、眼窩に向かって軟組織を切り抜きます。次に、眼窩の背側にある前頭骨を切断します。

次に、眼窩の中心付近で、正中線傍蝶形骨を切断します。反対側でオペルカットを繰り返します。次のステップでは、骨盤の棘をハンドルとして使用できます。

それらは、体から直接そっと引っ張ることによって折り畳まれます。次に、鉗子を手術片の下に挿入し、顔をゆっくりと体から剥がします。その過程でまだ付着している軟部組織を切り取ります。

鰓掻き器の周りに注意し、邪魔しないように注意してください。顔の骨格を取り除くときに、パーコールと一緒に最初の角鰓骨を誤ってつかむのは簡単です。あなたがそれを前に剥がすときに彼らのパーコルの下を見て、あなたが余分なものを握っていないことを確認してください。

次に、鉗子を使用して、正中線基底骨の両側から角膜を剥がし、前頭蓋顔面骨格を剥がして除去します。反対側で繰り返します。前頭蓋顔面骨格には、顎全体、舌骨骨格全体、背側および内軟骨要素、および頭蓋骨の前部が含まれます。

次に、腸管のすぐ下に閉じた鉗子を挿入し、前方にドラッグします。その過程で、分枝骨格に付着している残りの筋肉と靭帯をからかい離します。次に、閉じた鉗子の先端を使用して、背側分枝骨格を腹側脳ケースに付着している筋肉をこすり落とします。

後方から前方の動きでこすります。トゲウオの反対側で筋肉の除去プロセスを繰り返します。次に、腸管の基部をつかみ、前方に引っ張ることにより、分枝骨格を切除します。

第5角鰓枝の後方に垂直なカットを使用して腸管を分離します。よくある間違いは、腸管を前方につかみすぎて、腹側前頭管がかなり遅れてしまうことです。胸腔の後部の奥深くをつかむようにしておけば、余分な腸管は後でいつでも取り除くことができます。

分枝骨格の背側にある脳ケースから残っている骨片を取り除いた後。はさみを枝のバスケットに挿入し、背側の歯のプレートの両側のセットの間に背側を切り込みます。背側の歯板に損傷を与えないように、このカットを中央に保ちます。

次に、分枝骨格の後端にあるゴム状の腸内腔に2つの浅い横方向の切り込みを入れます。腸管の反端に。分岐スケルトンを開くのを支援します。

次に、スケルトンを50%グリセロール、ゼロポイント25%水酸化カリウムを充填したマイクロセントリフュージチューブに移し、穏やかにクリアリングします。または、それ以上の清澄化が不要な場合は、純粋なグリセロールに移します。再染色が必要な場合は、テキストプロトコルに詳細が記載されています。

マウントの準備をするには、溶液を純粋なグリセロールに変更し、チューブを少なくとも5分間振とうします。次に、分枝スケルトンを取り外し、背側を上にして22 x 60ミリメートルのガラスカバースリップの底近くに置きます。次に、数滴のグリセロールをスケルトンに移します。

次に、モデリング粘土の小さなボールを2つ広げ、カバースリップの両端に1つを再生し、スペーサーとして機能します。次に、前枝骨格を平らにするのに十分な圧力で、2番目のカバースリップを準備の上にゆるく置きます。次に、背側歯板を含む左背側フラップをはがし、カバースリップの間にフラップをスライドさせます。

次に、右背側フラップでも同じことを行います。そして、ブランチスケルトン全体をカバースリップの端から押し離します。手順を完了するには、トップカバースリップを軽く押して粘土球を平らにします。

彼らが枝のスケルトンを平らにマウントするのに十分なだけ。しかし、それが潰れるほどではありません。プロセス中にレーカーの列が隠れている場合は、カバースリップの間に鉗子をスライドさせ、角鰓枝または製剤全体の向きを変えます。

純粋なグリセロールに平らにマウントすると、調製物は少なくとも10年間室温で平らに保存できます。このプロトコルは、解剖され、平らに取り付けられた分枝骨格をもたらします。さまざまな重要な栄養形質を同期化できる場所。

背側から見ると、すべての列の鰓掻き器、すべての咽頭歯板、およびほぼすべての分枝骨を簡単に視覚化し、同期化できます。アリザリンレッドSは、ローダミンまたは同様のレッドフィルターにも蛍光を当てるため、他のマーカーとの二重標識や視覚化のための代替方法が可能になります。この画像では、ギルレーカーはカラットでマークされています。

歯には矢印のじり、骨にはアスタリスクが付いています。一度習得すれば、解剖は数分で完了し、数百匹の動物に対して比較的迅速に行うことができます。また、トゲウオの分枝骨格解剖を実証しましたが、この手順がさまざまな魚種のガイドとして使用できることを願っています。

分枝の骨格を解剖することで、マウント全体では見えないさまざまな重要な栄養特性をすばやく簡単に視覚化できます。頭蓋顔面骨格の発達と進化をよりよく理解することができます。