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ハイスループットシーケンシングを利用し全体プロテイン飽和突然変異誘発ライブラリの機能評価のためのプロトコル
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11:36 分
2016年7月3日
我々は、ハイスループットシーケンシングを利用したタンパク質の包括的な単一部位飽和突然変異誘発ライブラリの機能評価のためのプロトコルを提示します。重要なことに、このアプローチは、ライブラリー構築および配列決定を多重化するために直交するプライマー対を使用しています。アンピシリンの臨床的に関連する用量で選択されたTEM-1βラクタマーゼを使用して、代表的な結果を提供しています。
Chapters in this video
0:05
タイトル
0:43
2段階PCR部位特異的変異導入法による各アミノ酸部位のNNSサブライブラリーの合成
1:53
セレクションベクターへのNNSサブライブラリーのクローニング
3:47
抗生物質耐性に対するTEM-1全タンパク質飽和変異導入ライブラリーのセレクション
5:51
変異の適応度への影響を決定するためのハイスループットシーケンシング
8:44
結果:全タンパク質飽和変異導入によるハイスループットシーケンシング
10:16
結論
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