Name: 生後心筋細胞における細胞周期変化の可視化と核の決意 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: 学ぶ 生後心筋細胞の細胞周期変化と核の決定法。トランスジェニックマウスを用いて蛍光顕微鏡で高解像度に可視化し、心筋細胞が分裂するか倍性変化するかを区別します。心臓再生研究に有用です。

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技術支援について、S. Grünberg氏(ドイツ、ボン)とP. Freitag氏(ドイツ、ボン)に感謝します。

<ol><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li>
<li>Raulf, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+systems+for+unequivocal+identification+of+cardiac+myocyte+nuclei+and+analysis+of+cardiomyocyte+cell+cycle+status%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res.Cardiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic systems for unequivocal identification of cardiac myocyte nuclei and analysis of cardiomyocyte cell cycle status.</a> Basic Res.Cardiol. 110 (3), 33(2015).</li>
<li>Field, C. M., Alberts, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin%2C+a+contractile+ring+protein+that+cycles+from+the+nucleus+to+the+cell+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J.Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Anillin, a contractile ring protein that cycles from the nucleus to the cell cortex.</a> J.Cell Biol. 131 (1), 165-178 (1995).</li>
<li>Hesse, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+visualization+of+cell+division+using+high-resolution+imaging+of+M-phase+of+the+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Commun%22%5BJournal%5D)">Direct visualization of cell division using high-resolution imaging of M-phase of the cell cycle.</a> Nat.Commun. 3, 1076(2012).</li>
<li>Eulalio, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+screening+identifies+miRNAs+inducing+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional screening identifies miRNAs inducing cardiac regeneration.</a> Nature. 492 (7429), 376-381 (2012).</li>
<li>Di, S. V., Giacca, M., Capogrossi, M. C., Crescenzi, M., Martelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knockdown+of+cyclin-dependent+kinase+inhibitors+induces+cardiomyocyte+re-entry+in+the+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22J.Biol.Chem%22%5BJournal%5D)">Knockdown of cyclin-dependent kinase inhibitors induces cardiomyocyte re-entry in the cell cycle.</a> J.Biol.Chem. 286 (10), 8644-8654 (2011).</li>
<li>Hosoda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonality+of+mouse+and+human+cardiomyogenesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A%22%5BJournal%5D)">Clonality of mouse and human cardiomyogenesis in vivo.</a> Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 106 (40), 17169-17174 (2009).</li>
<li>Soonpaa, M. H., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiomyocyte+DNA+synthesis+in+normal+and+injured+adult+mouse+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Physiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiomyocyte DNA synthesis in normal and injured adult mouse hearts.</a> Am.J.Physiol. 272 (1 Pt 2), H220-H226 (1997).</li>
<li>Ang, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+conventional+approaches+to+identify+myocyte+nuclei+in+histologic+sections+of+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Limitations of conventional approaches to identify myocyte nuclei in histologic sections of the heart.</a> Am.J.Physiol Cell Physiol. 298 (6), C1603-C1609 (2010).</li>
<li>Engel, F. B., Schebesta, M., Keating, M. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16889791">Anillin localization defect in cardiomyocyte binucleation.</a> J Mol Cell Cardiol. 41 (4), 601-612 (2006).</li>
<li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+Cell+Generation+and+Turnover+in+the+Human+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamics of Cell Generation and Turnover in the Human Heart.</a> Cell. 161 (7), 1566-1575 (2015).</li>
</ol>

著者らは、競合する金銭的利益はないと宣言している。

心筋細胞は、細胞周期を再入力し、損傷後や組織の恒常性の間に分割することができるかどうかをめぐる論争があります。心筋細胞の基本的な売上高の値は1％1と80％7の範囲で与えられています。 40％7 - 、心臓病変後、細胞周期活性の誘導および新しい心筋細胞の生成は、0.0083％〜8と25の間の値と、境界域で報告されています。これらの不一致は、部分的に心臓の核を同定するための異なる実験的アプローチ、9組織切片の細胞分裂の間に非常に困難なプロセスによって説明することができます。心筋細胞は、細胞周期の変動を受けやすいように、倍数体および多核細胞をもたらす核内倍加およびacytokinetic有糸分裂、より本格的な細胞分裂を区別するために決定的に重要です。ために細胞分裂の同定は、そのような収縮リングとmidbodiesなどの細胞分裂の特徴を視覚化するだけでなく、二核心筋細胞のパーセンテージを決定する必要があります...

心筋細胞の核および細胞周期の状態の正確な同定は、心筋の代謝回転および再生の決意するための極めて重要です。これは、細胞周期活性を同定するための、そのようなpHH3、のKi-67、またはチミジン類似体のような核マーカーの使用のために特に当てはまります。哺乳類成体心筋細胞の増殖能が1非常に小さいので、心筋細胞核の増殖マーカーについて陽性の核の偽の身分証明書は、増殖アッセイの結果で決定的な違いを作ることができます。また、心筋細胞は倍数体および多核細胞ではなく、細胞分裂につながるような核内倍加およびacytokinetic有糸分裂などの細胞周期の変化、になりやすいです。この目的のために、一般的な細胞周期マーカーに対する抗体染色の解釈は、全ての場合において決定的ではありません。 ここで、我々は、直forwaのための方法を提示します<html> RDマウス心筋細胞の認識とそれらの核の明確な同定により生後および成体の段階でネイティブ単離された細胞と厚い組織切片でのnuclearity。そのために、MYH6プロモーターの制御下にヒトヒストンH2BおよびmCherryをからなる融合タンパク質（MYH6-H2B-MCH）の心筋細胞特異的発現を有するトランスジェニックマウス系統は、2を使用しました。 、のeGFP-anillin融合タンパク質の発現は、CMVエンハンサー（CAG-EGFP-anillin）を有するユビキタスニワトリアクチンプロモーターの制御下にあるトランスジェニック増殖インジケータマウス株、このマウス系統を交配することが可能細胞周期状態の決意。足場タンパク質のanillinは、具体的には、アクティブセル3細胞周期で発現され、細胞周期の間に、その差動細胞内局在は、M相の高解像度でライブトラッキング細胞周期の進行を可能にEF &quot;&gt; 4になるので、二重トランスジェニックマウスは、増殖性心筋細胞および細胞周期変動を受けるものとを区別するために使用することができる。これは、in vitroでの増殖を誘導する物質のスクリーニングに特に有用であることを証明。

<table><tbody><tr><td>10cmシャーレ</td><td>Sarstedt</td><td>821472</td><td></td></tr><tr><td>100 &micro;m セルストレーナー</td><td>Becton Dickinson GmbH/Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>2,3-ブタンジオン一基 (BDM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>G20x1 &frac12; 注射カニューレ、ステリカン</td><td>ブラウン、メルズンゲン 4657519</td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 ゲージ針</td><td>ベクトン ディキンソン GmbH</td><td>301300</td><td></td></tr><tr><td>24 ウェル プレート</td><td>ベクトン ディキンソン GmbH/ファルコン</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>2-メチルブタン</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>3927.1</td><td></td></tr><tr><td>37%ホルムアルデヒド溶液</td><td>AppliChem GmbH&nbsp;</td><td>A0936,1000</td><td></td></tr><tr><td>三方活栓</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>16494C</td><td></td></tr><tr><td>50 mLシリンジ</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>8728810F</td><td></td></tr><tr><td>70% エタノール</td><td>Otto Fischar GmbH</td><td>27669</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-Fluor-conjugated secondary antibody</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-605-205</td><td></td></tr><tr><td>α-Aktinin EA-53, Mouse IgG</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>A7811</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Cell Culture Microplate, 96 Well,Half Area</td><td>Greiner bio-one</td><td>675986</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase B</td><td>Roche</td><td>11088815001</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡 Eclipse Ti-E</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cryostat CM 3050S</td><td>Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td>donkey serum</td><td>Jackson Immuno Research, Suffolk, GB</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4884</td><td></td></tr><tr><td>子牛胎児血清</td><td>PromoCell、ハイデルベルク</td><td></td><td></td></tr><tr><td>ホルムアルデヒド溶液 (4%)</td><td>PanReac AppliChem</td><td>A3697</td><td></td></tr><tr><td>豚皮からのゼラチン、タイプ A</td><td>Sigma-Aldrich、Steinheim</td><td>G2500</td><td></td></tr><tr><td>ガラス カバースリップ</td><td>VWR</td><td>631-0146</td><td></td></tr><tr><td>グルコース</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>ハイデルベルガー延長管</td><td>IMPROMEDIFORM GmbH</td><td>MF 1833</td><td></td></tr><tr><td>Heparin-Natrium</td><td>Ratiopharm</td><td>5394.02.00</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>HistoBond 顕微鏡スライド</td><td>Marienfeld</td><td>0810000</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342 (1&nbsp;mg/mL)</td> <td>Sigma Aldrich, Taufkirchen</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>インスリン注射器</td><td>Becton Dickinson GmbH</td><td>300334</td><td></td></tr><tr><td>Iscove'ModifiedDulbecco's Medium (IMDM)</td><td>Gibco/Life Technologies, Darmstadt</td><td>21980-032</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Corning</td><td>354221</td><td></td></tr><tr><td>Laser Scanning Mikroskop Eclipse Ti</td><td>Nikoninstruments, D&uuml;sseldorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine RNAiMAX</td><td>Invitrogen/Life Technologies, Darmstadt</td><td>13778075</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgG Cy5 (donkey)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-175-151</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>微量遠心チューブ</td><td>Sarstedt</td><td>72690</td><td></td></tr><tr><td>Mini shaker</td><td>VWR</td><td>12620-940</td><td></td></tr><tr><td>mirVana miRNA mimic, has-miR199a-3p</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>4464066</td><td></td></tr><tr><td>Biopsy Mold</td><td>Sakura Finetek/ VWR</td><td>4565</td><td></td></tr><tr><td>M-slide 8-well ibiTreat</td><td>ibidi</td><td>80826</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Merck Millipore</td><td>567530</td><td></td></tr><tr><td>ネガティブcontrol(scrambled RNA)</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>AM4611</td><td></td></tr><tr><td>Neonatal Heart Dissociation Kit</td><td>Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach</td><td>130-098-373</td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements AR 4.12.01-4.30.02-64bit</td><td>Nikoninstruments, D&uuml;sseldorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Non-essential amino acids, NEAA</td><td>Gibco/Life Technologies, Darmstad</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM, Reduced Serum Medium</td><td>Gibco</td><td>51985-026</td><td></td></tr><tr><td>P21-siRNA</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>4390771</td><td></td></tr><tr><td>P27-siRNA</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>4390771</td><td></td></tr><tr><td>ペニシリン/ストレプトマイシン</td><td>Gibco/Life Technologies, Darmstadt</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Phosphate buffered saline (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>ポリビニルアルコール封入剤 DABCO&reg;, antifading</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10981</td><td></td></tr><tr><td>RNase A</td><td>Qiagen</td><td>1007885</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>Invitrogen/Life Technologies, Darmstadt</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>サンプルコンテナ</td><td>Vitlab</td><td>80731</td><td></td></tr><tr><td>セロジカルピペット</td><td>Greiner</td><td>607180</td><td></td></tr><tr><td>ソフトウェア NIS Elements</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>スクロース</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Compound</td><td>Sakura Finetek/ VWR</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>ToPro3 ヨウ化物 (642/661)</td><td>分子プローブ/ThermoFisher Scientific</td><td>T3605</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Triton X</td><td>Fluka</td><td>93418</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fluka</td><td>93418</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1426</td><td></td></tr><tr><td>小麦胚芽凝集素(WGA) フルオレセイン標識</td><td>Vector Laboratories</td><td>VEC-FL-1021-5</td><td></td></tr><tr><td>&α;-アクチニン抗体</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7811</td><td></td></tr><tr><td>&β;-メルカプトエタノール</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>M3148</td><td></td></tr></tbody></table>

生後心筋細胞における細胞周期変化の可視化と核の決意

Visualization of Cell Cycle Variations and Determination of Nucleation in Postnatal Cardiomyocytes

心筋細胞は、エンドリデューション(核分裂や細胞質分裂を伴わないDNA合成の継続)や無細胞動態性有糸分裂(核分裂はあるが細胞質分裂はしない)など、細胞周期の変動を起こしやすいです。このような非定型的な細胞周期の変動は、細胞分裂ではなく、倍数体細胞や多核細胞をもたらします。したがって、心臓の代謝回転と再生を決定するためには、心筋細胞の核、細胞あたりの核の数、およびそれらの細胞周期の状態を正しく特定することが非常に重要です。これは、チミジン類似体Ki-67、PCNA、pHH3などの細胞周期活性を同定するための核マーカーの使用に特に当てはまります。ここでは、心筋細胞とその核性を認識し、その細胞周期活性を決定する方法を紹介します。私たちは、心筋細胞の核を明確に同定するためのMyh6-H2B-mChトランスジェニックマウス系統と、細胞分裂と細胞周期の変動を区別するためのCAG-eGFP-アニリンマウス系統の2つの公開トランスジェニックシステムを使用しています。これら2つのシステムを組み合わせることで、心臓の再生と可塑性の研究が容易になります。

in vitroでの出生後の心筋細胞の細胞周期活性に対するsiRNAを/ miRNAの効果を分析するために、二重トランスジェニックMYH6-H2B-MCH / CAG-EGFP-anillinマウスの心筋細胞は、生後3日目（P3）で単離し、でトランスフェクトしました細胞周期活性誘導miR199 5は、siRNA P27、およびsiRNA Fzr1。陰性対照（ 図1A）と比較して、miR199-（ 図1B）およびsiRNA p27-（ 図1C）の写真は、心筋細胞が細胞周期活性の誘導を示すトランスフェクトしました。 Fzr1の阻害がトランスフェクトされた細胞の核内でのeGFP-anillin融合タンパク質の蓄積をもたらし、Fzr1の損失がAPCの阻害をもたらすようにeGFP-anillinマウスモデルにおいて、Fzr1に対するsiRNAは、トランスフェクションコントロールとして使用することができます...

心筋細胞の細胞分裂と細胞周期の変動を区別するために、私たちは2つのトランスジェニックマウス系統を使用したプロトコルを提示します:Myh6-H2B-mChトランスジェニックマウスは、心筋細胞の核を明確に識別し、CAG-eGFP-アニリンマウスは細胞分裂と細胞周期の変動を区別するためのものです。

Cardiomyocytes are prone to variations of the cell cycle, such as endoreduplication (continuing rounds of DNA synthesis without karyokinesis and ...

本手順の全体的な目的は、出生後の心筋細胞における細胞周期活性を可視化し、その核数（nuclearity）を判定することです。この手法は、心筋細胞が実際に分裂しているのか、あるいは単に倍数性を増加させて多核化しているだけなのかという、心臓再生分野における重要な疑問への回答に役立ちます。本技術の主な利点は、細胞周期のM期を高時空間分解能で可視化できること、および心筋細胞の核を蛍光によって識別できることです。手順のデモンストレーションは、当研究室の技術者であるPatricia Freitagが行います。非ホモ接合の交配ペアを使用する場合は、まず蛍光顕微鏡を用いて形質転換心臓を特定し、EGFP analinおよびH2B-mCherryの発現を確認してください。EGFP analyinの核シグナルは、組織層にピントを合わせて心房の縁を確認することで、最も容易に検出できます。心筋細胞を単離するために、新生児心臓解離キットの酵素ミックス1 mLを含む1.5 mL反応チューブに、適宜数の心臓を入れ、ハサミで心臓を細かく切断します。その後、溶液を15 mL反応チューブに移します。チューブをほぼ水平な状態で37 °Cで15分間静置し、インキュベーションの最後に5 mLピペットで組織を5〜10回的に混合します。3回目の消化の終了後、7.5 millilitersのmedium twoを加えて反応を停止させ、細胞懸濁液を70 micronのセルストレーナーでろ過します。セルストレーナーを3 millilitersのmedium twoで洗浄し、洗浄液を回収した細胞と合わせて、遠心分離により細胞を回収します。得られたペレットを500 microlitersのmedium oneに再懸濁し、細胞数を計測します。次に、96ウェル平底プレートの各ウェルに、120 µLのmedium oneを用いて1×10⁴個の細胞を播種し、細胞培養インキュベーターで一晩培養する前に遠心分離します。翌日には、ほとんどの心筋細胞が拍動しているはずです。トランスフェクションを開始する前に、RNaseを除去するため、ベンチおよびすべてのトランスフェクション器具をRNase除染溶液で拭き取ります。すべての準備が整ったら、調製したばかりのsiRNAミックスを各ウェルに20 microlitersずつ加え、細胞をインキュベーターに戻して48時間培養します。2日後、各ウェルの上清を120 microlitersのmedium oneに交換し、細胞をインキュベーターに戻してさらに少なくとも24時間培養します。インキュベーション終了後、細胞をPBSで1回洗浄し、続いて4%formaldehyde溶液で20分間固定します。共焦点ビデオ顕微鏡を用いて細胞を解析するには、プレートを共焦点顕微鏡のステージに移し、イメージングソフトウ

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JoVE Journal

Developmental Biology

発生生物学

私たちは、人間の心臓前駆細胞の大量供給と心血管修復のための機能的な心筋細胞の導出を可能にする低分子化合物、と定義された条件の下で維持さ多能性ヒト胚性幹細胞から直接cardioblastsの誘導のためのプロトコルを確立している。...

小分子の誘導と多能性ヒト胚性幹細胞からヒト心筋前駆体と心筋細胞の効率的な導出

心臓核密度沈降を介して分離し、フローサイトメトリーにより心筋細胞核を識別し、ソートするための中心体周辺物質1（PCM-1）に対する抗体で免疫標識されています。...

事後組織から心筋細胞核の分離

物品を効率よく選択的に集団の均質性および同一性を評価するための基準マーカーのフローサイトメトリー分析を行っWnt経路を変調することにより、心筋細胞へのヒト多能性幹細胞を分化するための詳細な方法論を記載している。...

フローサイトメトリーによる高効率心筋細胞へのヒト多能性幹細胞の分化と特性

&gt;jove_content&lt;先天性心疾患を引き起こす突然変異は、発生中の心臓構造のin...

胚性マウスの心臓に免疫蛍光を用いて、心筋細胞の開発の分析

心筋細胞の代謝回転の定量化は困難です。ここで説明するプロトコルは、新心筋細胞の核生成と核倍数性の正確で高感度な定量を可能にすることにより、この課題に重要な貢献をします。...

心筋細胞のDNA合成と倍数性の同時評価：心筋細胞再生の定量化を支援する方法および売上高

私たちは、無傷の胚および出生後の心臓の奥深くにある蛍光タンパク質標識細胞を体積的に画像化するプロトコルを記述します。組織透明化法とホールマウント染色を併用することで、胚性または出生後の心臓内の単一蛍光タンパク質標識細胞を鮮明かつ正確にイメージングすることができます。...

イメージングは​​、単一細胞の解像度で胚および出生後の心をクリア

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ヒト多能性幹細胞の懸濁液ベースの心臓分化のためのマイクロウェル中の凝集体サイズの最適化

この原稿は、レトロウイルスが媒介するGata4、Hand2、Mef2c、およびTbx5の送達を使用して、多様な再プログラムされた心臓サブタイプの生成と定量化のための段階的なプロトコルを説明しています。...

マウス胚線維芽細胞の転写因子媒介リプログラミングに続いて心筋細胞のサブタイプを評価します

ここでは、堅牢なヒト人工多能性幹細胞由来心筋細胞を一貫して生成し、その機能を特徴付ける方法を記述し、検証する。これらの技術は、シグナル伝達経路に対する機械的洞察を開発するのに役立ち、大規模な薬物スクリーニングのためのプラットフォームを提供し、心臓疾患を確実にモデル化する。...

カルシウム処理特性評価のための心室様HiPSC由来心筋細胞と高品質細胞製剤の生成

本研究の目的は、心筋細胞を成体から再現的に単離し、DNAの含有量と核形成を測定する方法を開発することです。...

免疫細胞化学とプロイド分析のための固定心からの心筋細胞の分離

ヒト人工多能性幹細胞由来心筋細胞(hiPSC-CM)は、前臨床心毒性スクリーニングに動物を使用する代替手段を提供します。前臨床毒性スクリーニングにおけるhiPSC-CMの広範な採用に対する制限は、細胞の未熟な胎児様表現型です。ここでは、hiPSC-CMを堅牢かつ迅速に成熟させるためのプロトコルを紹介します。...

成熟ヒト人工多能性幹細胞由来心筋細胞単分子膜を用いたハイスループット心毒性スクリーニング

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生後心筋細胞における細胞周期変化の可視化と核の決意

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