Cell Membrane Repair Assay Using a Two-photon Laser Microscope

Joshua J. A. Lee; Rika Maruyama; Hidetoshi Sakurai; Toshifumi Yokota

doi:10.3791/56999

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

Cell Membrane Repair Assay Using a Two-photon Laser Microscope

2 光子レーザー顕微鏡を用いた細胞膜修復法

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06:35 min

January 2, 2018

DOI: 10.3791/56999-v

Joshua J. A. Lee¹, Rika Maruyama¹, Hidetoshi Sakurai², Toshifumi Yokota¹

¹Department of Medical Genetics,University of Alberta Faculty of Medicine and Dentistry, ²Center for iPS Cell Research and Application,Kyoto University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

2 光子レーザーを介して細胞膜が負傷した膜を再シール能力評価に広く使われている方法で、複数の細胞のタイプに適用できます。ここでは、体外でライブイメージング dysferlinopathy 2 光子レーザーアブレーション患者細胞の膜を再シールするためのプロトコルについて述べる.

この手順の全体的な目標は、筋ジストロフィー患者細胞の原形質膜修復能を定量化することです。この方法は、特定の突然変異と膜再封鎖動態との関係など、筋ジストロフィーの重要な質問に答えるのに役立ちます。この手法の主な利点は、生細胞における膜再封鎖速度のリアルタイム定量化が可能になることです。

まず、40ミリリットルの増殖培地が入ったT225フラスコで、37°Cの二酸化炭素インキュベーターで線維芽細胞を培養します。培養物が70〜80%のコンフルエントに達したら、洗浄ごとに40ミリリットルのPBSで細胞を2回すすぎ、続いて5ミリリットルの0.05%トリプシンを摂氏37度で5分間追加します。細胞が分離したら、40ミリリットルの新鮮な増殖培地で反応を停止し、100,000細胞/ミリリットルの濃度で2ミリリットルの細胞を35ミリメートルのコラーゲン被覆ガラス底プレートに播種し、摂氏37度と二酸化炭素5%で一晩インキュベーションします。

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