Name: ショウジョウバエのニューロン樹状分枝複雑さの定量解析 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-01-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: 学ぶショウジョウバエのニューロン樹状分枝複雑さの定量解析手法。SOX5遺伝子操作による樹状突起形態変化を評価し、神経変性疾患のメカニズム解明に貢献する神経発生研究の枠組みを提供します。

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我々 はイメージングの技術援助のためウィリアム A. Eimer を感謝したいです。この作品は 【 R.E.T] を治療アルツハイマー病の資金によって支えられた、国立衛生研究所の 【 R01AG014713 ・ R.E.T; に R01MH60009R03AR063271、アダムローリーに R15EB019704] 国立科学財団 [アダムローリーに NSF1455613]。

1. 実験準備
<ol><li>次の試薬の準備: ダルベッコ リン酸緩衝生理食塩水 (PBS);トリトン X-100;0.2 %pbst (PBS + 0.2% トリトン X-100);32% パラホルムアルデヒド (PFA) 4% 使用前に希釈シリコーンのエラストマー ベースと硬化剤;antifade マウント媒体 (例えば、延長金);指の爪のポーランド語。</li>
	<li>次の機器を準備: 解剖顕微鏡 2 シャープな鉗子と顕微解剖、解剖皿、顕微鏡のスライドや coverslips、共焦点顕微鏡を作るためのシャーレ用ピン数顕微解剖用ハサミと、フィジー ImageJ ソフトウェアがインストールされたコンピューター。</li>
</ol>2. 幼虫コレクション
<ol><li>それぞれ W1118野生型ハエや ppk GAL4、UAS GFP と UA Sox102F RNAi ハエを仲間します。文化は、25 ° C で標準状態で飛ぶ</li>
	<li>5 〜 6 日 UA Sox102F RNAi の 3 齢幼虫を収集/ppk GAL4 や UAS GFP、UAS GFP ppk GAL4/+ 解離ピンセットで慎重にコントロール。</li>
</ol>3. 幼虫の郭清
注: このセクションのすべての手順は、顕微解剖顕微鏡の下で運営されています。倍率は調査官次第です。最適な視力表示を調整しようとします。4 〜 6 倍の倍率をお勧めします。
<ol><li>基本シリコーン ・ エラストマー製解剖皿と組織培養シャーレに幼虫を配置します。</li>
	<li>背側、上向きにできるように幼虫口フックをピン留めし、幼虫の尾をピンします。オープン アップ マーカーである正中線を公開するためにできるだけ途中で背側を配置します。</li>
	<li>本体の水分を維持するために幼虫に 200 μ L の PBS を追加します。</li>
	<li>吻側に尾側から 2 つの気管の背側正中線に沿ってはさみでカットをします。幼虫の体の 4 つのコーナーのそれぞれで小さい切り傷を作る。</li>
	<li>体が平らので体の 4 つのコーナーのそれぞれにピンを配置します。</li>
	<li>4% で幼虫の体壁を修正する PFA 室温で 25 分。</li>
	<li>Pbst; 5 分繰り返し 2 回以上洗ってください。</li>
	<li>組織からピンを削除します。組織を転送 antifade 実装中、スライド ガラスの上にカバーし、カバー スリップをマウントします。1 時間乾燥空気し、指の爪のポーランド語でエッジをシールします。</li>
</ol>4. 画像の処理
注: 画像は倒立共焦点顕微鏡システムを使用して撮影されました。ユーザーは、(推奨) 20 × 対物を使用してサンプルを写真することができます。
<ol><li>Z シリーズ画像をキャプチャします。共焦点顕微鏡のソフトウェアで「Z シリーズをキャプチャ」ダイアログ ボックスを開きます。Z シリーズのイメージをキャプチャする範囲を決定します。<ol>
<li>「上と下」ボタンををクリックしてします。上部と下部位置し、入力する値を決定する「下:"と"トップ:"ボックス。0.5 μ m として「Z シリーズを取り込み」ダイアログ ボックスの「ステップ」を設定します。Z シリーズ画像を取得する「今すぐ実行」ボタンをクリックしてします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>*.Tiff または *.nd2 ファイルとしてイメージを保存します。</li>
	<li>イメージング後、4 ° C で暗いホルダーにスライドを格納します。</li>
</ol>5. 樹状突起の評価
注: GFP タンパク質だったが、UAS GFP で co 過剰発現、ppk GAL4 飛んで GFP 蛍光分析のための da ニューロン。長さ、分岐、および第 3 齢幼虫の da ニューロンの構造を定量化しました。解析パラメーターには、長さ樹状突起 (μ m)、表面積 (2μ m)、枝、および分岐構造 (%) の合計数が含まれます。図 1は、詳細に解析パラメーターを示します。
<ol><li>
樹状突起の長さ 注: 樹状突起の長さは、トレーサーのプラグインというラベルの付いたすべての樹状突起の合計です。<ol>
<li>セットアップおよびフィジー ImageJ (https://fiji.sc/)20ソフトウェアを実行します。画像のいくつかのチャンネルがある場合、別々 のチャンネルに画像を分割します。 注: このプロトコルのイメージは、GFP の 1 つのチャンネルのみが。</li>
		<li>実行"画像 |スタック |Z プロジェクト"Z 投影; を取得するには新しいウィンドウが表示され、名 ' Z-投影。投影型の「最大強度」をクリックしてしスタート スライスとスライスによっては停止間数を整理する個々 の好みに応じて。"OK"をクリックします。Z 投影画像樹状突起を明確に提示することが表示されます。</li>
		<li>神経突起をトレースします。<ol>
<li>選択して"プラグイン |分割 |単純な神経突起トレーサー"ウィンドウに樹状突起をトレースします。ニューロン相馬を見つけ、樹状突起細胞体とこの樹状突起の先端のもう一つの点からの 1 つのポイントをクリックします。 注: 青い線と 2 つの点は、プログラムが接続されます。</li>
			<li>パスが明らか場合プラグイン ・ ウィンドウで"Y"キーを押しますデンドライトのパスは、可視画像で選択されたパスの端点までトレースされます。同じプラグイン ウィンドウを「完全なパス」をクリックします。セグメントが完了した (図 2)。 注: いくつかの樹状突起は小さなセグメントに分割された経路の出発点から遠くなったセグメントは、トレーサーの完全なパスを提供するために結合されました。</li>
		</ol>
</li>
		<li>パスが完了した後は、枝が、新しいポイントに戻る。新しいパスを作成できるで。「すべてパス」ウィンドウ ボックス (図 3) すべてパス長さ値が表示されます。トレース ファイルを保存し、図 2に示すように、未完成のトレースを続行します。</li>
		<li>クリックすると、樹状突起の長さデータをエクスポート"ファイル |*.Cvs として"ウィンドウでエクスポート 'プラグイン'。次にすべてのパスの長さを合計し、データ分析/表計算ソフトへデータをエクスポートします。(図 3)。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Da ニューロンの表面積
	<ol>
<li>' フィジー ImageJ」ウィンドウでフリーハンド描画ツールを選択します。パスをトレースし、端点を接続します。[分析] メニューを選択"測定 |領域"です。[分析] メニューから「メジャー」をクリックします。選択領域 (図 4) の値を持つ新しいボックスに結果が表示されます。データ分析ソフトウェアにそれをコピーします。</li>
	</ol>
</li>
	<li>
合計の番号の枝と da ニューロンの分岐構造
	<ol>
<li>「分析」を開くことによって枝の総数を計算し、「レンダリング |分析された白骨パス」[プラグイン] ウィンドウ (図 5) をトレースの。 注: アーバの構造は、枝のレベルの合計です。細胞体と樹状突起先端間パスを定義し、1 つのパスはプライマリのアーバーは、ニューロンの細胞体から樹状突起など複数の分岐を含めることができます。セカンダリのアーバーは、第三紀、第四紀となおアーバーでプライマリからの分岐です。樹状突起の分岐の構造は、枝のレベルによって区切られています。たとえば、プライマリの % は、枝分岐の合計数で割った値と数です。</li>
	</ol>
</li>
</ol>

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<li>MacNeil, M. A., Masland, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extreme+diversity+among+amacrine+cells%3A+implications+for+function%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Extreme diversity among amacrine cells: implications for function.</a> Neuron. 20 (5), 971-982 (1998).</li>
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<li>Crozatier, M., Vincent, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Control+of+multidendritic+neuron+differentiation+in+Drosophila%3A+the+role+of+Collier%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Control of multidendritic neuron differentiation in Drosophila: the role of Collier.</a> Dev Biol. 315 (1), 232-242 (2008).</li>
<li>Copf, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Importance+of+gene+dosage+in+controlling+dendritic+arbor+formation+during+development%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Importance of gene dosage in controlling dendritic arbor formation during development.</a> Eur J Neurosci. 42 (6), 2234-2249 (2015).</li>
<li>Rosso, S. B., Inestrosa, N. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((WNT+signaling+in+neuronal+maturation+and+synaptogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">WNT signaling in neuronal maturation and synaptogenesis.</a> Front Cell Neurosci. 7, 103(2013).</li>
<li>Engel, T., Hernandez, F., Avila, J., Lucas, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Full+reversal+of+Alzheimer%27s+disease-like+phenotype+in+a+mouse+model+with+conditional+overexpression+of+glycogen+synthase+kinase-3%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Full reversal of Alzheimer's disease-like phenotype in a mouse model with conditional overexpression of glycogen synthase kinase-3.</a> J Neurosci. 26 (19), 5083-5090 (2006).</li>
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</ol>

著者が明らかに何もありません。

表皮を刺激する樹状突起、ニューロンの入力領域とどのように情報の受信を検出し、個々 のニューロンによって処理の形態を決定します。開発デンドライト形態は、デンドライト組織の遺伝子の調節を反映しています。末梢神経系のショウジョウバエ幼虫の da ニューロンは樹状突起の形成のための研究のための重要なモデル: 1) 哺乳類11,12; と機能の類似性2) 4 階級差別に基づいて樹状構造11,12;・ 3) の形態形成を調節する遺伝的要因。このプロトコルでは幼虫の準備からショウジョウバエda 細胞の画像解析までのワークフローを提案します。メソッドでは、分岐の構造、分岐数の合計表面積樹状突起の長さは、詳しくは、da ニューロンの樹状突起を分析するための 4 つの重要なパラメーターについて説明します。重要なステップは、幼虫の体壁から投射そして分析のための da ニューロンを完全に公開す...

樹状突起、ニューロンの分岐予測であるは、他のニューロン1,2からニューロンの感覚およびシナプス入力を含むフィールドをカバーします。樹枝状結晶はシナプスの形成の重要なコンポーネントおよびニューロンに電気刺激の伝播し同様、シナプスの入力の統合において重要な役割を果たします。樹状分枝 (da) は、新しいシナプスを作成する新しい樹状分枝ニューロンを形成するプロセスです。Da 支店密度などグループ化パターンの形態と開発多段階の生物学的プロセスの結果、神経機能に相関の高い。このプロトコルの目的はの神経 dendritric 楔形の複雑さの定量分析のためのメソッドを提供するショウジョウバエ。
樹状突起の複雑さは、シナプスの種類、接続、およびパートナーのニューロンからの入力を決定します。分岐パターンおよび樹枝状結晶の密度は樹状フィールド3,4上に収束する信号処理に関与しています。樹状突起は、開発調整の柔軟性を持っています。例えば、シナプス合図では、体性感覚ニューロン発達段階と成熟した神経系5のデンドライト組織に影響を及ぼす。神経接続の確立は、形態形成と樹状突起の成熟に依存します。樹状突起の奇形は神経機能障害に関連付けられます。研究は、da ニューロンの形態形成の異常がアルツハイマー病 (AD)、パーキンソン病 (PD)、ハンチントン病 (HD) を含む複数の神経変性疾患、ルー ・ ゲーリック病の病因に貢献することを示されている/筋萎縮性側索硬化症 (ALS)6,7,8。シナプス変化は衰退とニューロン機能7,8の減損とのコンサートで、広告の初期の段階で表示されます。ただし、デンドライト病理学がこれらの神経変性疾患の病因に貢献する方法の具体的な内容は、とらえどころのないままです。
規制当局、タンパク質9,10、転写因子、細胞表面の受容器11,12 配位子の Wnt ファミリーなどの複雑なネットワークをエンコードする遺伝子によって樹状突起の発達の制御します。.ショウジョウバエda ニューロンから成る 4 つのクラス (クラス I、II III、IV)、クラス IV の da ニューロンは最も複雑な分岐パターンを持っているし、より良い理解形態13、強力な実験的システムとして採用されています。 14。初期形態形成における過剰発現や RNAi はクラス IV の da ニューロンの遺伝子のサイレンシングは分岐パターンとデンドライト剪定13の変化の結果します。神経細胞の樹状突起パターン形成の定量分析のための実用的な方法を開発することが重要です。
我々 は以前にSOX5のショウジョウバエ相同を黙らせる、 Sox102F、導いた短い樹状突起の da ニューロンとクラス IV da ニューロン15の複雑さを軽減します。ショウジョウバエにおける神経樹状パターン形成の複雑さ (NDAC) の定量分析の手順を紹介します。このプロトコルは、以前説明した方法論からの適応は、da ニューロンの開発を試金する簡潔な方法を提供します。ロバストな画像のラベル付け、3 齢幼虫の体壁16,17,18,19の da ニューロンを示しています。NDAC と体内の発達の違いを調査したい人のための貴重なプロトコルです。

<table><tbody><tr><td>リン酸緩衝生理食塩水(PBS)</td><td>Gibco Life Sciences</td><td>10010-023</td><td></td></tr><tr><td>TritonX-100</td><td>Fisher Scientific</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>パラホルムアルデヒド(PFA)</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>15714-S</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 シリコーンエラストマーベースおよび硬化剤</td><td>Dow Corning Corportation</td><td>3097366-0516;3097358-1004</td><td></td></tr><tr><td>ProLong Gold 退色防止マウンタント</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>P36931</td><td></td></tr><tr><td>フィンガー ネイル ポリッシュ&nbsp;</td><td>CVS</td><td>72180</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>ニコン</td><td>SMZ800</td><td></td></tr><tr><td>共焦点顕微鏡</td><td>ニコン</td><td>エクリプス Ti-E</td><td></td></tr><tr><td>シャー</td>レ <td>ファルコン</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>鉗子</td><td>デュモン</td><td>11255-20</td><td></td></tr><tr><td>はさみ&nbsp;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co</td><td>RS-5611</td><td></td></tr>昆虫<tr><td>ピン&nbsp;</td><td>Roboz Surgical Instrument Co</td><td>RS-6082-25</td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡スライドとカバースリップフィ</td><td>ッシャーサイエンティフィ</td>ック<td>15-188-52</td><td></td></tr></tbody></table>

ショウジョウバエのニューロン樹状分枝複雑さの定量解析

Quantitative Analysis of Neuronal Dendritic Arborization Complexity in Drosophila

樹状突起、ニューロンは、分岐予測、樹状突起の形態が神経系の開発の間にシナプス組織を反映しています。ショウジョウバエ幼虫の神経樹状パターン形成 (da) は、神経樹状突起、神経系の発達における遺伝子の機能の形態を研究するための理想的なモデルです。Da 細胞の 4 つのクラスがあります。クラス IV は larval ボディ壁のほぼ全領域をカバーする分岐パターンと最も複雑です。クラス IV の神経樹状パターン形成の複雑さ (NDAC) 4 つのパラメーターを使用してSOX5のショウジョウバエ相同をサイレンシングの効果を特徴付けた以前: 樹状突起の長さ、デンドライト カバレッジの表面積、分岐、および分岐構造の合計数。このプロトコルは NDAC 定量分析、幼生解離、共焦点顕微鏡と ImageJ ソフトウェアを使用して画像解析手順で構成されるワークフローを示します。Da ニューロンの開発とその基になる機構にさらなる洞察力、神経機能の理解を改善し、神経の根本的な原因についての手がかりを提供して神経発達障害。

Da ニューロンの樹状突起は、da 神経相馬と GFP 蛍光分析の樹状のアーバー (UA GFP; ppk GAL4) co 過剰発現の GFP でラベル付けされました。Da ニューロンの樹状突起の形態は、倒立共焦点顕微鏡 (図 2) でイメージしました。
Da ニューロンの樹状突起は、フィジー ImageJ ソフトウェアを使用して追跡しました。ファイルは、樹状突起長 (図 3) を推定する使用されました。Da ニューロン (N = 21) (UA-Sox102F-RNAi/ppk-GAL4; Sox102FのサイレンシングUAS-GFP) コントロールと比較してシンプルな構造をもつ樹枝状結晶および短い枝の長さの数の大幅な削減につながった (N = 20) (UA GFP; ppk GAL4/+) 3 齢幼虫 (<s...

このプロトコルは当てて神経細胞樹状パターン形成の複雑さ (NDAC) の定量分析、ショウジョウバエ、樹状突起の形態形成の研究に使用することができます。

Dendrites are the branched projections of a neuron, and dendritic morphology reflects synaptic organization during the development of the nervous system. ...

この手順の全体的な目標は、ショウジョウバエのニューロンの発達中に樹状樹状の樹状樹状ニューロンの複雑さに対するSOX5遺伝子の影響を観察することです。この方法は、神経変性疾患遺伝子をよりよく理解するために、神経デンドライトの形態形成、および神経系の発達における遺伝子機能を研究するのに役立ちます。最終的にこの技術は、多くの異なるタイプの神経デンドライトで使用することができるデンドライトの複雑さの定量分析を提供する。この技術の意味は、突然変異が遺伝子機能を理解する鍵を握るため、神経変性疾患の遺伝的メカニズムにまで及ぶ。UAS-Sox102F-RNAi株ハエまたはW118コントロールを備えたUAS-GFP;ppk-GAL4のセットアップクロス。25°Cの標準的な条件でハエを培養します。約5〜6日で、鉗子を使用して3番目のインスター幼虫を慎重に採取して解剖を行います。シリコンエラストマーベースで作られた解剖皿に幼虫を入れ、組織培養ペトリ皿。その後、解剖顕微鏡の下に皿を置きます。次に、幼虫の尾をピン留めして、正中線を露出します。その後、幼虫の口のフックをピン留めして、幼虫の後側が上がるようにします。今すぐ溶液に幼虫を浸すために皿にPBSの200マイクロリットルを追加します。次に幼虫の尻尾と口を小さな切開で切ります。その後、幼虫を後頭線に沿って開き、2つの気管の間に切り取り、尾道から鼻孔に向かいます。その後、体が平らに横たわっているように、体の4つのコーナーのそれぞれにピンを置きます。今度は幼虫の体壁を室温で25分間PFAの4%に固定します。その後、PBSで幼虫を1回5分間3回洗います。この後、ピンを取り外し、ガラススライドに組織を移します。次に、アンチフェード実装媒体に組織を浸し、カバースリップで装着します。取り付けられたティッシュが指の爪の磨きでカバースリップに密封する前に1時間空気乾燥することを許す。これらのスライドは、摂氏4度の暗闇の中に保管してください。20Xの目的を使用して、共焦点顕微鏡でZシリーズ画像をキャプチャします。まず、幼虫の体壁に全てのDAニューロンを含むようにzステップの範囲を設定し、ステップサイズを半マイクロメートルに設定します。次に、イメージを TIF または ND2 ファイルとして保存して処理します。次に、DAニューロン上の樹状突起の数と形態を評価する。まず、長さを評価します。まず、フィジーImageJでは、必要に応じて画像を別々のチャンネルに分割します。評価が必要なのは GFP チャネルのみです。次に、Z 投影を作成します。新しいウィンドウで、投影タイプの最大強度を選択し、開始スライスと終了スライスを選択します。次に[OK]をクリックして、透明な樹状突起を持つ Z 投影イメージを作成します。プラグインツールを使用して、Neurite をトレースします。まず、興味のあるニューロンの相馬に行き、細胞体から1つの樹状突起が出てくる場所をクリックします。次に、このデンドライトの先端をクリックします。2 つの点を結ぶ青い線が、ニューライトの長さを実行している場合は、Y を押して yes を押します。次に、この線がニューライトの完全パスに適合する場合は、[完全パス]をクリックします。線がパスに適合しない場合は、このニューライトに沿ってさらにポイントをクリックして、パスを複数の線分セグメントに曲げ、ニューライトの長さに合わせます。次に、[完全なパス] をクリックし、次のニューライトのパスをマークします。すべてのトレース パスを完了したら、[解析]、[パスの計測] オプションを選択して、パスを CSV ファイルにエクスポートします。このデータを使用して、解析用のパス長の値を計算し、平均します。次に、ニューロンの表面積を計算します。まず、フィジーの ImageJ ウィンドウからフリーハンド描画ツールを選択します。次に、対象となるニューロンの終点を接続します。次に、[分析] ウィンドウから [測定] オプションを選択します。結果が、選択した領域の値を持つ新しいボックスに表示されます。この値をデータ分析ソフトウェアにコピーします。最後に、スケルトン化されたパスの分析プラグインを使用して、ブランチの合計数を計算します。DAニューロンの樹状突起は、GFP蛍光イメージング分析のために、その相腫と樹状突起アーバーのGFPを過剰発現させることによって標識された。デンドライトの形態を反転共焦点顕微鏡を用いて画像化した。DAニューロンの樹状突起は、記載されているように追跡された。このファイルは、デンドライトの長さを推定するために使用されました。第3インスター幼虫のDAニューロンにおけるSox102Fのサイレンシングは、枝の長さの約半分とより単純な構造で樹状突起の総数を大幅に減少させ、枝の数の半分しか示していない。論理的には、これはアーバー表面積の減少につながった。このプロトコルは、DA感覚ニューロンの発達を評価するための迅速な方法を提供する。この手順を試みている間、良好なカバレッジを得るためにDAニューロンの各グループの画像の十分な数を取るようにしてください。この手順に従って、デンドライトの開発に関する追加の質問に答えるために、樹状突起分析のような他の方法を実行することができます。開発以来、この技術は、神経科学の分野の研究者がモデルシステムを使用してアルツハイマー病などの神経変性疾患に推論するのを助けました。

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JoVE Journal

Neuroscience

神経科学

数々の最近の研究では、脳の病理学に関連したシナプス蛋白の変異を同定した。初代培養皮質ニューロンは樹状突起スパイン形態と運動性にこれらの疾患関連タンパク質の影響を調べることで最大限の柔軟性を提供します。...

培養中枢神経系ニューロンの樹状突起スパイン形態の解析

の形態素解析ショウジョウバエ</em遺伝モザイクを使用>幼虫末梢感覚ニューロンの樹状突起と軸索

出典:Ting, C., et al., Analyzing Dendritic morphology in Columns and Layers.J. Vis.

ショウジョウバエの髄質層と柱にまたがる樹状突起形態の解析

私たちは、マウスモデルの海馬における樹状突起形成の可視化と定量化のための2つの方法、すなわちリアルタイムイメージングと拡張被写界深度イメージングについて説明します。前者の手法では、高度な地形トレースや分岐範囲の定量化が可能になるのに対し、後者では樹状突起樹のスピーディーな可視化が可能です。...

マウスの海馬領域の歯状回における樹状樹枝状分岐の評価

ショウジョウバエの幼虫の樹状樹枝状（DA）ニューロンを用いて、神経細胞の形態形成の研究は、免疫蛍光によって、神経や表皮タンパク質のその場可視化で恩恵を受ける。私たちは、幼虫の体壁から筋肉組織を除去することにより、ダニューロンと周囲の表皮細胞の免疫蛍光分析を向上させる手順を説明します。...

の除去<em&gt;ショウジョウバエ</em感覚ニューロンおよび表皮細胞の免疫蛍光分析のための幼虫の切り身から&gt;筋肉組織

ここでは、光への長期曝露後に遺伝的にコードされた分子マーカー、およびそれらの調節で強調、数およびキイロショウジョウバエ の光受容体におけるシナプスアクティブゾーンの空間分布を定量化する方法を示しています。...

のシナプス変調を分析<em&gt;キイロショウジョウバエ</em&gt;長時間の光照射後の感光体

二つの画像解析アルゴリズム、「 ショウジョウバエ NMJ形態計測」および「 ショウジョウバエ NMJブートン形態計測を」自動的ショウジョウバエ神経筋接合部（NMJ）の9つの形態学的特徴を定量化するために、 作成されました 。...

高スループットとのマルチパラメトリック定量化のための2個のアルゴリズム<em&gt;ショウジョウバエ</em&gt;神経筋接合部形態

ここでは、列およびレイヤーにショウジョウバエ延髄ニューロンの樹状突起のルーティングを分析する方法を示しています。ワークフローは、トレース基準列配列の樹状アーバーを登録すると、3次元空間内の樹枝状構造を分析するための画像品質と計算ツールを改善するためのデュアルビューイメージング技術を含みます。...

列およびレイヤーで樹状形態を分析します

ここでは、Golgi-Coxプロトコルを詳細に紹介します。この信頼性の高い組織染色法は、最小のトラブルシューティングで、海馬の脳構造の全面的な評価を可能にします。...

Golgi-Cox法を用いた老齢マウスにおける海馬の樹状突起の複雑さの評価

ここでは、ショウジョウバエ幼虫脳の生体調における高刺激性樹状フィロポディアの画像化に用いた方法と、デンドライトの定量的評価のためのタイムラプス3Dイメージングデータセットを定量化するために開発したプロトコルについて説明します。ニューロンの発達におけるダイナミクス。...

ショウジョウバエニューロンの開発における高速樹状分岐ダイナミクスのタイムラプスライブイメージングと定量化

学ぶショウジョウバエのニューロン樹状分枝複雑さの定量解析手法。SOX5遺伝子操作による樹状突起形態変化を評価し、神経変性疾患のメカニズム解明に貢献する神経発生研究の枠組みを提供します。

ショウジョウバエのニューロン樹状分枝複雑さの定量解析

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