Name: 木管化カブトムシの付属物の走査型および透過型電子顕微鏡の試料調製方法 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2020-02-03T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 9 s
Description: 学ぶ木管化カブトムシの感覚毛のSEM・TEM試料調製法。Tween-20を添加した固定液で試料変形を防ぎ、蛍光顕微鏡を用いた正確な切片作成により、神経構造の鮮明な観察を可能にする。

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北京農学部、原子力応用研究所(中国農学院)、北京林業大学生物研究センター、山金教授の多大な支援に感謝します。中国科学院動物学研究所の張。この研究は、中国国家主要研究開発プログラム(2017YFD0600103)、中国自然科学財団(グラントNo.31570643、81774015)、中国の公共福祉における森林科学研究(201504304)、内モンゴルによって支援されました。農業大学ハイレベル人材研究立ち上げ計画(203206038)、内モンゴル自治区高等教育研究プロジェクト(NJZZ18047)、内モンゴル自治区臨行「ダブルファーストクラス」建設プロジェクト(170001)

注意: 試薬を使用する前に、材料安全データシートを参照してください。サンプル調製中に使用される化学物質のいくつかは、毒性、突然変異原性、発癌性、および/または再増殖性である。個人用保護具(手袋、ラボコート、フルレングスパンツ、クローズドトゥシューズ)を使用し、サンプルを扱いながらヒュームフードの下で作業します。
1. SEM サンプル調製とイメージング
<ol><li>サンプル固定とクリーニング<ol>
<li>C.カラガナが発生する地域で働き、イソフォロン16のような植物誘引剤で餌を与えたフィールドトラップに大人を引き付ける。成体C.カラガナのきれいな体を0.1モルL-1リン酸緩衝生理食塩水(PBS、pH 7.2)、2.5%(wt/vol)グルタルアルデヒド(無水EMグラード)、0.06%(vol/vol)トゥイーン20に保存する。週末に4°Cでサンプルを固定します。</li>
		<li>保存液から体を取り出し、リン酸バッファーですすいでください。ステレオ顕微鏡を使用して、付属物を取り除き、0.1 molL-1リン酸緩衝生理食塩基(pH 7.2)で超音波洗浄(40 kHz)、Tween 20(PBST)で洗浄します。100sの洗浄後、試料を顕微鏡に移し、清潔かどうかを確認します。通常の状況では、サンプルが観察するのに十分な清潔で損傷していないことを確認するために、400年代に清掃してください。</li>
	</ol>
</li>
	<li>脱水、取り付け、乾燥のサンプル<ol>
<li>50%、60%、70%、80%、85%、90%、100%、および100%(全vol/vol)エタノールで20分連続処理を使用してサンプルを脱水する。ステレオ顕微鏡では、カーボン両面粘着テープを使用して、3つの観察面(後側腹側および側面)をスタブに別々に固定します。すべての表示面は、汚れのない清潔な状態に保たれなければならないことに注意してください。48時間シリカゲル乾燥剤を含むシャーレにサンプルステージを置きます。</li>
	</ol>
</li>
	<li>スパッタコートとサンプル挿入<ol>
<li>日立工機(E-1010)イオンスパッタリング装置を使用し、MAIN VALVEをOPEN位置に回転させ、試料室カバーを外し、試料をチャンバーに入れます。電源スイッチをオンにし、READYライトが点灯しました。スパッタリング時間を45秒、コーティングの厚さを70.875 Åに設定します。機械式ポンプ真空ダイヤルインデックスが7を下回ったら、放電を押して白金の噴霧を開始します。実験の最後に、電源をオフにし、チャンバーからサンプルを取り出します。スプレーフィルムの厚さ: d = KIVt ("d"は、"Å"の単位でのフィルムの厚さです。K"は、スパッタ金属とガスに依存して一定である。たとえば、空気の K は 0.07 です。「I」はプラズマ流の単位mAです。「V」は「KV」の単位で印加される電圧です。"t" は秒単位の時間です。</li>
		<li>サンプルを含むスタブを SEM のステージに挿入します。SEMソフトウェアを開き、20kVから始まる、目的の動作電圧を選択します。</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. TEM サンプル調製とイメージング
<ol><li>手順 1.1.1 および 1.1.2 のようにサンプルを取得して修正します。</li>
	<li>クリーニング、二次固定、脱水<ol>
<li>保存液から成人C.カラガナを取り除きます。形素顕微鏡を使用して、付属物を取り出し、PBSTで3時間洗浄し、PBS中の1%(wt/vol)の四酸化オスメウムで25°Cで1hで後定着させます。50%、60%、70%、80%、85%、90%、100%、100%(全vol/vol)エタノールを室温で20分連続処理して脱水した。</li>
	</ol>
</li>
	<li>樹脂埋め込みと重合<ol>
<li>平らな埋め込み型の樹脂にサンプルを埋め込む。試料はプレートの底部にあり、凹溝の縁にできるだけ近くに置いた。ラベルをブランクに入れ、サンプルを含むプレートを60°Cで72時間インキュベートし、インキュベーターからカプセルを取り出し、樹脂が重合していることを確認します。</li>
	</ol>
</li>
	<li>サンプルの断面と染色<ol>
<li>サンプルが固まったことを確認したら、各樹脂ブロックを蛍光顕微鏡の下に置き、青色光の下で撮影します。顕微鏡の蛍光光源を上から照射するように移動します。樹脂ブロックのセンシラを明確に観察できるようにします。センサをターゲットとする距離を撮影し、測定します(図1)。</li>
		<li>PalpsのSEM画像(図2A)を参照し、カミソリの刃で樹脂ブロックを大まかに切り、標的受容体を閉じます(図2B)。</li>
		<li>次に、青色光蛍光顕微鏡を用いて、大まかに切られた樹脂ブロックを撮影し、上から光源を調整して、センサが明確に観察されるようにする。青い光によって励起された緑色の光が、良好な観測を生み出した。イメージングの際、蛍光顕微鏡ステージに対する目的マイクロメータ(DIV 0.01mm)を加え、次いでImageJソフトウェア(米国国立衛生研究所)で目標の距離を測定した(図2C)。イメージルーラーはアドビフォトショップCS5(アドビシステムズ社、サンノゼ、カリフォルニア州、米国)によって作られました。次いで、超ミクロトームスライスのために、切断距離を設定し、50〜60nmのスライス厚みを用いて、目標位置に達するまで。蛍光顕微鏡法を使用して、標的受容体を特定します。</li>
		<li>Formvarコーティングされた100メッシュの銅グリッドにセクションを取り付け、酢酸ウラニルとクエン酸鉛で二重染色します。<ol>
<li>まず、50%メタノールの50mLに3.75gの酢酸ウラニルを加える。室温で酢酸ウラニルの飽和溶液の濾過(0.45 μm)シリンジを10分間染色する際の染色時の染色部で、0.45 μmのシリンジを濾過したスタイングリッドが、光の析出を遮断します。50%メタノールで2倍をリンス;2xろ過した脱気水。</li>
			<li>第二に、遠心管内の脱気蒸留水の10 mLに0.02 gの鉛クエン酸を加える。10Nの水酸化ナトリウムの0.1mLを加え、シールして振って溶解させます。使用前に8分間のクエン酸鉛の溶液を使用してグリッドを染色します。炭酸鉛沈殿の形成を防ぐために、二酸化炭素フリー環境で染色を行う必要があります。プラスチック製のシャーレ皿の正方形に汚れの滴を置きます。脱ガス濾過水および乾燥17でリンス。80 kVで動作するTEMを介してそれらを観察してください。</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59251/59251fig1a.jpg"> 図1:蛍光顕微鏡は、クロロフォラスカラガナの付属部を囲む樹脂ブロックを撮影した。(A) アンテナ樹脂ブロック;(B) 卵子の端部に樹脂ブロックを付けたもの。矢印は樹脂ブロックの縁を示した。点線の円は、ターゲットセンシラを示します。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59251/59251fig1alarge.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59251/59251fig2.jpg"> 図2:精密な感覚的位置法の手順。(A)葉ロフォラスカラガナの上顎手のひらの第4サブセグメントは、点線円がSEMによって標的としたセンシラを示した(B)蛍光顕微鏡で見たC.カラガナの上顎手パルプの4番目のサブセグメント。白矢印は樹脂ブロックの大まかに切り取られた縁を示し、点線の円は正確な位置を示した。(C) 樹脂ブロックの縁から上顎のパルプターゲット位置までの目印の距離(このサンプルでは28 μm)。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59251/59251fig2alarge.jpg" target="_blank">この図の大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。</a>

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<li>Zhang, Y. R., Ren, L. L., Zhang, L., Wang, R., Yu, Y., Lu, P. F., Luo, Y. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrastructure+and+distribution+of+sensilla+on+the+maxillary+and+labial+palps+of+Chlorophorus+caragana+%28Coleoptera%3A+Cerambycidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Morphology%22%5BJournal%5D)">Ultrastructure and distribution of sensilla on the maxillary and labial palps of Chlorophorus caragana (Coleoptera: Cerambycidae).</a> Journal of Morphology. 279, 574-588 (2018).</li>
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</ol>

私たちは開示する利益相反はありません。

本稿では、木材用カブトムシの走査および透過電子顕微鏡のサンプル調製スキームを紹介した。代表的な研究対象として虫の付属物を用いて、従来のサンプル調製方法に対していくつかの改良点を実証した。
固体表面から切り離された液体油は、小さな液滴に乳化され、被用物の表面への再沈着を低減するために洗浄媒体中に十分に分散および懸濁することができる。界面活性剤の洗浄性能は、湿潤性、透水性、乳化性、分散性、可溶化11、12、14などの基本的な特性をすべて含む。ゴールデン線虫の電子顕微鏡試料調製物に対する異なる洗剤の効果は、Tween 20が最高の洗浄効果を有し、次いで重炭酸ナトリウム、および蒸留水24を有することを示した。本研究では、Tween 20を使用して液体の表面張力を低下させ、昆虫の体表面、特に...

走査型電子顕微鏡は、多くの形態研究において重要なツールであり、SEMは表面構造1、2を示している。透過型電子顕微鏡法の魅力は、細胞のアーキテクチャや小器官の超構造から、高分子複合体やタンパク質の構造まで、ナノメートルスケールで幅広い生体構造を研究できるということです。TEM は内部構造3、4、5を示しています。
Coleopteraは、約182の家族と350,000種を含む昆虫の最大のグループです。コレオプテランの昆虫、特に木を退屈するカブトムシのほとんどは植物を食べ、その多くは森林や果樹の重要な害虫であり、木に壊滅的な被害を与える6.現在、化学生態学説に基づく害虫の予防・防除集団は、7.1.1の注目を集めている。効率的で低毒性、無公害のフェロモン制御法が有効な方法8となっている。昆虫の形態と超構造を研究することは、昆虫化学生態学研究の重要な部分です。走査電子顕微鏡と透過電子顕微鏡(SEMとTEM)は、それらの形態と内部解剖学を研究するために大きな効果を発揮します。しかし、電子顕微鏡(EM)用の昆虫試料の調製中に、観察部位の客観性および真正性が9に影響を受ける可能性がある。一般に、昆虫のSEM試料調製には、洗浄、組織固定、脱水、メタセシス、乾燥、およびスパッタコーティング10が必要である。木をつなぐカブトムシが生きる複雑な環境のために、体表面はしばしば様々な汚染物質を有し、その付属物はしばしば多くの細長い長いセンシラまたは毛先を有する。特に、一部の木ボラーは、現場で直接収集し、その後、新鮮さを確保するために液体を固定するために入れて、その後、実験室で洗浄実験室で利用できない。サンプルが最初に固定され、次に洗浄された場合、グルタルアルデヒドがサンプルに強く固定するため、明らかに破片を除去することははるかに困難です。トゥイーン20は、水の表面張力を低下させ、洗濯物表面の水の濡れ性を向上させるなど、洗浄工程において重要な役割を果たす界面活性剤11、12、13、14である。本研究では、液体の表面張力を低減する固定液とPBS洗浄液にTween20を添加し、SEMで体表面をクリーナーさせた木張りカブトムシの体表面に汚れが付着するのを防止した。
TEMを使用して、昆虫の異なる器官上のセンシラをスライスして、その中の明確な構造を明らかにし、感覚機能を分析するための基礎を提供することができる。木除けカブトムシのような被検昆虫が大きく、体壁がかなりの程度の硬化を有する場合、固定剤は昆虫体内の臓器組織を十分に飽和させることができない。トゥイーン20は、汚れの分散および懸濁能力を高めることができる。本研究では、Tween 20を固定液に加えて、木張りカブトムシの昆虫体壁への固定液の浸透を促進し、表皮11、12、13の変形および崩壊を回避した。さらに、一般的なスライス技術を使用して、特にいくつかの小さなセンシラ15のために、センシラの異なるタイプを正確に見つけることが困難である。従来のTEMサンプル調製に基づいて、本研究は蛍光顕微鏡とSEMを組み合わせて埋め込みブロック内の昆虫感覚の位置を決定し、スライス精度を向上させた。

<table><tbody><tr><td>解剖学的レンズ</td><td>Chongqing Auto Optical 有限責任会社</td><td>1425277</td><td></td></tr><tr><td>Carbon adhesive tape</td><td>SPI Supplies, Division of Structure Probes, Inc.</td><td>7311</td><td></td></tr><tr><td>四塩化炭素</td><td>Σ</td><td>56-23-5</td><td></td></tr><tr><td>銅格子</td><td>GilderGrids</td><td>G300</td><td></td></tr><tr><td>リン酸水素二ナトリウム</td><td>Sinopharm group chemical reagent co., Ltd.</td><td>10039-32-4</td><td></td></tr><tr><td>エタノール</td><td>J.T. Baker</td><td>64-17-5</td><td></td></tr><tr><td>平埋め込み型</td><td>Hyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.</td><td>70900</td><td></td></tr><tr><td>蛍光顕微鏡</td><td>LEICA</td><td>DM2500</td><td></td></tr><tr><td>グルタルアルデヒド</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>111-30-8</td><td>無水 EM グレード</td></tr><tr><td>イソホロン</td><td>Σ</td><td>78-59-1</td><td></td></tr><tr><td>クエン酸鉛</td><td>Σ</td><td>512-26-5</td><td></td></tr><tr><td>メタノール</td><td>Σ</td><td>67-56-1</td><td></td></tr><tr><td>一塩基性リン酸ナトリウム</td><td>group chemical reagent co., Ltd.</td><td>7558-80-7</td><td></td></tr><tr><td>対物マイクロメータ</td><td>Olympus</td><td>0-001-034</td><td></td></tr><tr><td>四酸化オスミウム</td><td>Sigma</td><td>541-09-3</td><td></td></tr><tr><td>ペトリ皿</td><td>Aldrich</td><td>1998</td><td></td></tr><tr><td>カミソリ刃</td><td>ジレット</td><td></td><td></td></tr><tr><td>レジン</td><td>スパー</td><td>ERL4221</td><td></td></tr><tr><td>メス</td><td>Lianhui</td><td>GB/T19001-2008</td><td></td></tr><tr><td>SEM</td><td>日立</td><td>S-3400</td><td></td></tr><tr><td>シリカゲル乾燥剤蘇</td><td>州Longhui乾燥剤Co.、株式会社</td><td>112926-00-8</td><td></td></tr><tr><td>小型ブラシ</td><td>Martol</td><td>G1220</td><td></td></tr><tr><td>水酸化ナトリウム</td><td>Sigma</td><td>1310-73-2</td><td></td></tr><tr><td>スパッタイオン装置</td><td>株式会社日立工機、東京、日本</td><td>E-1010</td><td></td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>EZ4 HD</td><td></td></tr><tr><td>TEM</td><td>日立</td><td>H-7500</td><td></td></tr><tr><td>Tween 20</td><td>天津 ダマオ化学試薬</td><td>9005-64-5</td><td></td></tr><tr><td>ウルトラミクロトーム</td><td>ライカ</td><td>UC6</td><td></td></tr><tr><td>超音波洗浄機</td><td>GTソニック</td><td>GT-X1</td><td></td></tr>酢<tr><td>酸ウラニル</td><td>シグマ</td><td>6159-44-0</td><td></td></tr></tbody></table>

木管化カブトムシの付属物の走査型および透過型電子顕微鏡の試料調製方法

Sample Preparation Method of Scanning and Transmission Electron Microscope for the Appendages of Woodboring Beetle

このレポートでは、両方のタイプの電子顕微鏡に対して、木管粉カブトムシ、クロロフォラス・カラガナ・シー&ワン(2012)の付属物を調製して実証したサンプル調製法および透過型電子顕微鏡観察方法について説明した。走査型電子顕微鏡(SEM)サンプル調製プロトコルは、一連のエタノール浴におけるサンプル化学固定、脱水、乾燥、スパッタコーティングに基づいていました。Tween20(ポリオキシエチレンソルビタンラウレート)を固定液と洗浄液に添加することにより、木除けカブトムシの昆虫体表面をよりきれいに洗浄した。本研究では、透過電子顕微鏡(TEM)の試料調製には、固定、エタノール脱水、樹脂への埋め込み、蛍光顕微鏡を用いた位置決め、切除、染色を含む一連のステップが含まれる。Tween 20を用いた固定剤は、木田の虫体壁をTween 20なしでより簡単に貫通し、その後体内の組織や臓器をより良く固定し、昆虫感覚超構造の透明な透過電子顕微鏡観察を生み出した。この調製の次のステップは、蛍光顕微鏡法を用いて標的感覚位置の精度を高めることによって、樹脂ブロックに埋め込まれた試料中の昆虫感覚の位置を決定することでした。これにより、スライス精度が向上しました。

Tween 20での洗浄および固定液を用いて、Tween 20を使用しないものよりもクリーンなSEM画像が観察された(図3)。Tween 20固定液は、グルタルアルデヒド固定溶液を組織に浸透させた。微小管構造がはっきりと見られた。サンプルの内部構造のTEM画像は、Tween 20なしでぼやけました(図4)。
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59251/59251fig3a.jpg"> 図3: SEM下の葉ロフォラス・カラガナのアンテナ上に位置するセンシラ。SEM画像とTween 20(A)、Tween 20(B)を使用しないSEM画像の比較は、画像Aが一般的に画像Bよりもきれいであることを示し...

昆虫センシラの超構造を観察するために、走査電子顕微鏡と透過電子顕微鏡(それぞれSEMおよびTEM)のサンプル調製プロトコルを研究で提示した。TEMでサンプル変形を避けるためにTween 20を固定に添加した。蛍光顕微鏡法はTEMにおけるスライス精度を向上させるのに役立った。

This report described sample preparation methods that scanning and transmission electron microscope observations, demonstrated by preparing appendages of ...

ウッドボーリングカブトムシ彼らの体面はSEMでは常に難しいです。Tween-20は固定および洗浄の解決に加えられる。木のつまらないカブトムシの体面 TEMでは、Tween-20 は体壁への固定性の浸透を高め、体内の組織や臓器をより良く固定することができます。蛍光顕微鏡は、スライス精度を向上させるのに役立ちます。この技術は、体表面を洗浄し、木のつまらないカブトムシの体壁に浸透するのに役立ちます。したがって、SEMとTEMのビジョンをクリアします。蛍光顕微鏡はTEMのスライスの正確さを改善するために役立つ。この手順のデモンストレーションは、当研究室の大学院生である張上ruです。クロロホルス・カラガナが住んでいる地域では、漏斗トラップにイソフォロンなどの植物誘引物質を餌にしたフィールドトラップを配置します。トラップに木のつまらないカブトムシの大人を引き付けます。pH 7.2で1リットル当たり0.1モルの成人クロロフォラスカラガナのきれいな体を保存し、体積グルタルアルデヒドで2.5%重量、および体積Tween-20で0.06%体積。3日間摂氏4度でサンプルを固定します。保存液から体を取り出し、PBSですすいでください。ステレオ顕微鏡の下で、付属物を取り除き、PBSTで40キロヘルツで超音波洗浄するために鉗子を使用してください。100秒間洗浄した後、サンプルを顕微鏡に移して、清潔かどうかを確認します。損傷を避けるために400秒以上清掃しないでください。次いで、サンプルをエタノールに20分間濃度で浸し、脱水を行います。脱水後、ステレオ顕微鏡下で、カーボン両面粘着テープを使用して、3つの観察面、側側、腹側、および側面をスタブに別々に固定します。すべての表示面が清潔で汚染がないことを確認します。シリカゲル乾燥剤を含むペトリ皿にサンプルステージを48時間置きます。次に、イオンスパッタリング装置で、メインバルブを開いた位置まで回転させ、サンプルチャンバーカバーを取り外し、サンプルをチャンバーに入れます。電源スイッチをオンにして、準備ができたライトが点灯していることを確認します。スパッタリング時間を45秒、コーティング厚さを70.875オングストロームに設定します。機械ポンプの真空ダイヤルインデックスが7を下回ったら、放電を押して白金の散布を開始します。手順の最後に、電源をオフにして、サンプルをチャンバーから取り出します。V回T.K倍のK倍に等しいオングストロームでスプレーフィルム厚Dを算出し、スパッタリングされた金属とガスによって決定される定数である。私はミリアンペアのプラズマ流れであり、Vはキロボルトで印加される電圧であり、Tは秒単位の時間です。サンプルを含むスタブを SEM のステージに挿入します。SEMソフトウェアを開き、20キロボルトから希望の動作電圧を選択します。成体のクロロフォラスカラガナから付属物を得た後、PBSTのサンプルを超音波浴で3時間洗浄し、PBSで1%重量の体積オスミウム四酸化された25°Cで1時間後固定します。室温での体積エタノールで50%60%70%80%85%90%95%100%および100%体積で20分連続処理を使用してサンプルを脱水します。鉗子で、平らな埋め込み型の熱い樹脂を適用し、樹脂にサンプルを埋め込む。サンプルがプレートの底部にあり、埋め込まれた溝の端にできるだけ近づけるようにしてください。ラベルを付け、サンプルを含むプレートを摂氏60度で72時間インキュベートします。インキュベーション後、プレートをインキュベーターから取り出し、樹脂が重合していることを確認します。サンプルが固まったら、各樹脂ブロックを蛍光顕微鏡の下に置き、顕微鏡の蛍光光源を動かして、上から青色光で試料を照射し、それらを撮影します。樹脂ブロック内の感性線がはっきりと見えるようにしてください。樹脂ブロックの端とターゲットセンサとの距離を測定し、センサをターゲットにします。パルプのSEM画像を参照し、ターゲットレセプターに近いカミソリの刃で樹脂ブロックを大まかに切断します。次に、青色光蛍光顕微鏡下で、上記の光源を調整して、感音がはっきりと観察されるようにする。目的マイクロメータを蛍光顕微鏡ステージに追加します。大まかにカットした樹脂ブロックを撮影し、ImageJを使用してターゲットと樹脂のエッジの距離を測定します。樹脂サンプルを超ミクロトーム上に置き、ターゲット位置に達するまで50〜60ナノメートルの厚さのセクションを切断します。ペトリ皿の中で、フォームバーコーティングされた100メッシュの銅グリッドにセクションを取り付けます。室温でウラニル酢酸の飽和濾過溶液でグリッドを染色します。染色時にセクションを覆い、光誘発性沈殿物を遮断します。10分間汚れます。ヒュームフードでは、50%メタノールで2回リンスし、次いで濾過された脱気水で2回リンスする。プラスチックペトリ皿の正方形に準備された鉛クエン酸塩の汚れの滴を置き、8分間座らせます。脱気濾過水ですすいで乾燥します。TEM マシン内のサンプル・ステージにグリッドを取り付けます。電圧を80キロボルトに設定し、セクションを調べます。このプロトコルでは、Tween-20で洗浄および固定溶液を用いて、Tween-20を使用しないよりも明確なSEM画像が観察された。Tween-20固定溶液により、グルタルアルデヒド固定溶液が組織に浸透することを可能にし、Tween-20なしで調製されたサンプルの内部構造がぼやけている間、微小管構造がTEM画像ではっきりと見られた。上顎の触知体上のタイプ1センシラ小枝塩基化のペグの連続的な断面図は、樹状鞘が外側樹状セグメントを取り囲み、先端細孔に伸びることを示した。7つの分岐されていない外側樹状セグメントは、外側の空洞に囲まれた内側の受容体リンパ腔内に存在していた。管状体は、各細径ソケットベースの他の外樹状セグメントから樹状鞘によって分離した。毛様体領域では、8つの双極性ニューロンの存在を示す、異なる直径の8つの樹状突起が同定された。この技術は、単一細胞記録やその時点でのハイブリダイゼーションなどの神経の機能をさらに研究するために使用することができる。

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Environment

環境

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&gt;jove_content&lt;走査型電子顕微鏡観察のための生物学的サンプルの処理における問題には、細胞の崩壊、湿った微小環境からのサンプルの処理、および細胞破壊が含まれます。ここでは、花分裂組織、卵分裂組織、真菌(Agaricales)などの困難なサンプルの調製に適した低コストで比較的迅速なプロトコルをまとめ、詳細に説明しています。...

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ここでは、走査電子顕微鏡(SEM)を用いて繊細な組織サンプルをイメージングするための詳細な処理プロトコルを紹介する。すなわち、ヘキサメチル・ジシラザナ(HMDS)化学乾燥、単純な空気乾燥、および臨界点乾燥の3つの異なる処理方法が、硬質卵殻、初期発達段階における胚、および真菌培養物をそれぞれ調製するために記載されている。...

電子顕微鏡検査用胚、卵殻、真菌培養の処理

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微小断層撮影による ショウジョウバエメラノガスター の動物全体イメージング

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菌従属栄養植物組織における真菌のコロニー形成と種子の共生発芽を解釈するための顕微鏡技術

このレポートは、 ショウジョウバエ の幼虫の神経筋接合部を視覚化するための新しいサンプル調製手順を提供します。この方法は、従来の方法と比較してサンプルのカールを防ぐのにより効果的であり、 ショウジョウバエの...

ショウジョウバエ幼虫の神経筋接合部の透過型電子顕微鏡法のためのサンプル調製プロセスの最適化

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森林ウッドボーラーからの昆虫病原性真菌の分離、行動同定、および病原性評価

学ぶ木管化カブトムシの感覚毛のSEM・TEM試料調製法。Tween-20を添加した固定液で試料変形を防ぎ、蛍光顕微鏡を用いた正確な切片作成により、神経構造の鮮明な観察を可能にする。

木管化カブトムシの付属物の走査型および透過型電子顕微鏡の試料調製方法

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