構造および生化学的研究のためのヒト溶質担体のハイスループット発現および精製(英語)

ヒト膜トランスポーターの構造的および生化学的研究には、安定で無傷の均質なタンパク質がミリグラム単位で必要です。ここでは、コドン最適化遺伝子を用いてヒト溶質キャリアトランスポーターをスクリーニング、発現、精製するためのスケーラブルな方法について説明します。

溶質担体(SLC)は、栄養素の取り込みに関与し、ヒトの病気に関与しています。しかし、SLCを標的とする薬剤は、研究が不十分なため、ほとんどありません。私たちは、SLCのクローニング、発現、精製のための効率的なアプローチを開発しました。

当社のワークフローは、純粋なタンパク質を生成し、生化学的および構造的研究を可能にし、最終的には創薬キャンペーンに洞察を提供します。生物学的プロセス、疾患、薬物送達において多くの役割を担っているため、SLCはますます注目を集めており、魅力的な治療標的となっています。民間のReSOLUTE IMIプロジェクトは、SLCの機能、生理学、病理学、および治療標的における新しい発見を可能にするために、オープンアクセスのリソースとデータを生み出しました。

従来、SLCは様々な基質と多様な輸送機構を持つ内在性膜タンパク質であるため、研究が困難でした。最近、クライオ電子顕微鏡、BacMam発現系、および新しい可溶化試薬により、その特性評価が大きく変化しました。純粋なタンパク質サンプルは、生化学的および構造的研究に必要です。

ヒトでは、溶質担体は過剰に発現すると収量が悪く、精製すると不安定になることがよくあります。そのため、これまでは、各ターゲットが個々の構造を開発し、下流アプリケーション用のタンパク質サンプルを製造するのに何年もかかっていました。私たちの方法は、複数のターゲットまたは単一のターゲットの構成物の並列かつ費用対効果の高い研究に最適化されています。

そのため、実験の柔軟性、コスト、時間、ラボリソースのバランスを慎重にとっています。さらに、この記事とReSOLUTEウェブポータルで、すべてのプロトコルとリソースへのオープンアクセスを提供しています。