Summary
이 동영상은 실험실에서 뒤쪽 아노 펠 레스 gambiae하는 데 사용되는 일반적인 기법을 보여줍니다. 실험실 모기를 돌보는위한 방법은 혈액 먹이 어른 pupae에 애벌레에서 유기체의 생명주기의 모든 단계를 통해 증명하고 있습니다.
Abstract
이 프로토콜은 insectary에 모기 양육에 대해 설명합니다. insectary 객실은 28 유지 ° C와 12 시간 함께 ~ 80 %의 습도. 주 / 야주기. 이 절차를 들어, 모기 연습장 10 % 살균 자당 솔루션, 종이 수건, 비커, 왓먼 필터 종이, 유리 모이통, 인간 혈액 및 혈청, 물 목욕, parafilm, 증류수, 깨끗한 플라스틱 쟁반, 모기 음식 (설명 필요 아래), 어른을 수집하기 위해 트레이, 진공 및 수집 챔버를 충당하기 위해 그물 모기.
Protocol
모기 음식 :
- 음식 : 접지된 물고기 음식 (Aquaricare). 작은 핀치가 추가되어야합니다.
- 식품 B : CAT 식품 (Purina)을 접지. 작은 핀치가 추가되어야합니다.
- 식품 C : 고양이 음식 (Purina). 두 정제가 추가되어야합니다.
블러드 :
동물이나 인간의 혈액은 뒷면 모기하는 데 사용할 수 있습니다. 신선한 피가 주사기로 수집하여 혈액의 각 10 ML에 대한 CPD (항응고제)의 1ml를 포함하는 멸균 15 ML 팔콘 튜브에 넣어 부드럽게 섞어 5 분 2000 rpm으로 실온에서 centrifuged입니다. 뜨는 다른 혈액 세포 (예 : WBC)을 구성되어 버피 코트를 제거를 돌보는 삭제됩니다. RBC 펠렛은 다음 pipetting하여 RPMI 매체의 동일한 볼륨에 정지하고, 추가로이 중간에 세 번 씻어입니다. 최종 세척 후 pelleted RBCs가 RPMI 매체의 동일한 볼륨에 resuspended 아르 4에 저장된 ° C (80~10일 보존 수 있습니다.) 먹이를하기 전에, RBC는 (RPMI)를 셀 아래로 펠렛을 (5 분 2000 RPM) centrifuged이며, 포장 RBC는 40 % 혈소판을 얻기 위해 혈청 (O + 인간 혈청)에 resuspended 있습니다. 피를 ° C 항상 먹이를 위해 37 보관해야합니다.
DAY 1 :
- 3-5일 오래된 성인 여성 모기는 알을 낳기 위해 혈액을 공급하고 있습니다.
- 혈액 먹이를 들어, 인공 막 (parafilm) 수유 방법은 다음과 같이 사용됩니다 :
- 적혈구는 (혈액 준비 위 참조) ~ 40 %의 혈소판을 (RBC 40 % 혈청 60 %를 포장)을 구하는 열 inactivated 혈청과 혼합됩니다. 이것은 유리 피더에 추가됩니다.
- 피더는 (37 ° C) 물 재킷 따뜻한 연결하고, 멤브레인 표면에 모기의 액세스를 허용하기 위해 새장에 배치됩니다.
- 모기는 ~ 30 분 동안 피드를 사용할 수 있습니다.
3 일 :
- 그들은 피를 먹이 후 암컷 이틀 알을 낳습니다. 원뿔 모양에 싼 작은 종이 필터는 필터 종이 촉촉한도록하고, 증류수가 들어있는 작은 비커에 들어가게된다. 비커는 알을 낳기 위해 모기에 대한 밤새 케이지 내부에 보관됩니다.
DAY 4 :
- 모기 계란을 포함 여과지는 ~ 300 ML 증류수와 플라스틱 트레이에 배치됩니다. 음식의 핀치는 트레이에 추가하고 달걀은 다음 일 동안 애벌레로 부화 수 있습니다.
일 5-8 :
- 성장하는 애벌레가 음식을 C의 두 돌판과 함께 매일 공급하고, 밀도와 인구에 대한 모니터링입니다. 여덟째 날 (오일 된 애벌레)에서 애벌레 인구는 각 트레이에 식품 식품 C의 두 정제를 한 스푼과 함께 1 트레이에서 ~ 10 트레이로 희석합니다. (~ 30 분)
일 9-12 :
- 애벌레는 12 일 (구일 된 애벌레)에서 식품 C. 매일 같이 먹이 있으며, 물을 신선한 물로 변화이며, 음식 (식품 및 식품 B C의 두 정제의 핀치) 추가됩니다. pupae이 단계에서 개발 시작합니다. 쟁반은 성인의 탈출을 방지하기 위해 그물로 덮여있다. (~ 80-10 분)
DAY 13-15 :
삼일 - pupae는 다음 2 성인에 등장할 수 있습니다. 식품은 신중하게 성인의 탈출 방지하기 위해 그물을 제거하여 애벌레 / pupae 매일 주어집니다.
DAY 16 :
- 성인은 진공에 연결된 흡인기를 통해 케이지로 수집하고 있습니다. 케이지는 10 %의 자당 (autoclaved) 및 케이지 처리하는 동안 발생할 수있는 잠재적인 설탕 유출 소크하기 위해 바닥에 종이 타월 라이닝과 함께 배어있는 목화 심지와 작은 100 ML 병으로 구성되어 있습니다. (~ 30-40 분)
DAY 17-21 :
- 성인 (남성과 여성 모두) 다음 4~5일에 대한 insectary 방에 보관들은 다음주기를 시작하기 위해 다시 혈액 공급되기 전에 10 %의 자당에 공급하고 있습니다. 동일한 모기는 한 번 이상 알을 낳기 위해 사용할 수 있습니다.
- 실험이나 양육을 위해 필요하지 않은 모기는 냉동실에 새장을 배치에 의해 사망 수 있습니다. 사용 트레이와 케이지 그들이 다시 사용하기 전에 청소하고 건조해야합니다.
참고 :이 모기 양육 방식에서 일부 차이를 보일 수 있으며, 다른 연구소 서로 다른 기술을 가지고 있습니다.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| Food A | Aquaricare | Grounded fish food. A small pinch needs to be added. | ||
| Food B | Purina | Grounded cat food. A small pinch needs to be added. | ||
| Food C | Purina | Cat food. Two tablets needs to be added | ||
| RBC | prepared red blood cells: 40% hematocrit in human serum | |||
| RPMI | Medium | |||
| CPD | anticoagulant | |||
| serum | O+ human serum | |||
| Mosquito feeder | ||||
| parafilm | ||||
| Anopheles gambiae | mosquitos | |||
| 10% sucrose | mosquito food | |||
| insectary |
References
- Bangs, M. J., Soelarto, T., Barodji,, Wicaksana, B. P., Boewono, D. T. Colonization of Anopheles maculatus from Central Java, Indonesia. J Am Mosq Control Assoc. 18, 359-363 (2002).
- Beier, M. S., Beier, J. C., Merdan, A. A., el Sawaf, B. M., Kadder, M. A. Laboratory rearing techniques and adult life table parameters for Anopheles sergentii from Egypt. J Am Mosq Control Assoc. 266, 266-270 (1987).
- Benedict, M. Q. Care and maintenance of anopheline mosquitoes, The molecular biology of disease vectors: A methods manual. Crampton, J. M., Beard, C. B., Louis, C. , Champman & Hall. London. 3-12 (1997).
- Casanges, A. H., Mcgovran, E. R., Chiles, J. V. Rearing of Anopheles quadrimaculatus Say and Aedes aegypti (L.) in the laboratory. Mosq News. 9, 112-117 (1949).
- Merritt, R. W., Dadd, R. H., Walker, E. D. Feeding behavior, natural food and nutritional relation ships of larval mosquitoes. Annual Rev. Entomol. 37, 349-376 (1992).
- Nasirian, H., Ladonni, H. Artificial bloodfeeding of Anopheles stephensi on a membrane apparatus with human whole blood. J Am Mosq Control Assoc. 22, 54-56 (2006).
- Ng'habi, K. R., John, B., Nkwengulila, G., Knols, B. G., Killeen, G. F., Ferguson, H. M. Effect of larval crowding on mating competitiveness of Anopheles gambiae mosquitoes. Malar J. 30 (4), 49 (2005).
- Stobart, R. H. Factors affecting the control of body volume in the larvae of the mosquitoes Aedes aegypti and Aedes detritus. Edw. J. Exp. Boil. 54, 67-82 (1971).
