Summary
एक प्रत्यारोपित परासरणी पंप के माध्यम से आइसोप्रोटेरेनॉल के पुराने प्रशासन व्यापक रूप से चूहों में उन्नत दिल की विफलता की नकल करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. यहाँ, हम 3 सप्ताह से अधिक निरंतर isoproterenol प्रशासन के लिए शल्य मिनी पंप प्रत्यारोपण में विस्तृत तरीकों का वर्णन, साथ ही, सफल मॉडल निर्माण के लिए इकोकार्डियोग्राफिक मूल्यांकन.
Abstract
Isoproterenol (आईएसओ), एक गैर चयनात्मक बीटा-एड्रीनर्जिक एगोनिस्ट है, जो चूहों में हृदय की चोट को प्रेरित करने के लिए व्यापक रूप से प्रयोग किया जाता है। जबकि तीव्र मॉडल तनाव प्रेरित कार्डियोमायोपैथी की नकल करता है, पुरानी मॉडल, एक परासरणी पंप के माध्यम से प्रशासित, मनुष्यों में उन्नत दिल की विफलता की नकल करती है। वर्णित प्रोटोकॉल का उद्देश्य एक प्रत्यारोपित मिनी पंप का उपयोग कर चूहों में पुरानी आईएसओ प्रेरित दिल की विफलता मॉडल बनाने के लिए है. इस प्रोटोकॉल inbred चूहों के 100 + उपभेदों में दिल की विफलता प्रेरित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. शल्य पंप प्रत्यारोपण पर तकनीक विस्तार से वर्णित हैं और चूहों में एक दिल की विफलता मॉडल बनाने में रुचि किसी के लिए प्रासंगिक हो सकता है. इसके अलावा, प्रत्येक तनाव और मॉडल विकास के लिए अपेक्षित समय के लिए इकोकार्डियोग्राफिक मापदंडों के आधार पर साप्ताहिक कार्डियक remodeling परिवर्तन प्रस्तुत कर रहे हैं. संक्षेप में, विधि सरल और reproduible है. 3 से 4 सप्ताह से अधिक प्रत्यारोपित मिनी पंप के माध्यम से प्रशासित सतत आईएसओ कार्डियक remodeling प्रेरित करने के लिए पर्याप्त है। अंत में, आईएसओ मॉडल निर्माण के लिए सफलता धारावाहिक इकोकार्डियोग्राफी अतिवृद्धि का प्रदर्शन द्वारा विवो में मूल्यांकन किया जा सकता है, वेंट्रिकुलर फैलाव, और रोग.
Introduction
कम निष्कासन अंश (HFrEF) के साथ दिल की विफलता हृदय homeostasis1बनाए रखने के लिए सहानुभूति तंत्रिका तंत्र की एक अच्छी तरह से मान्यता प्राप्त प्रतिपूरक प्रतिक्रिया के साथ है. हेमोडायनामिक तनाव और दिल और परिसंचरण पर हानिकारक प्रभाव पुरानी सक्रियण के साथ मनाया गया. ये दिल की विफलता के लिए समकालीन फार्माकोथेरेपी की आधारशिला बन गए हैं और न्यूरोहॉर्मोनल सिस्टम1के दिल की विफलता और चिकित्सीय विरोध की प्रगति में महत्वपूर्ण तंत्र हैं .
कई माउस मॉडल दिल की विफलता की बुनियादी जांच के लिए उपलब्ध हैं. आनुवंशिक मॉडल आणविक चिकित्सा की खोज और संकेतन रास्ते की जांच के लिए आकर्षक हैं. हालांकि, इन मॉडलों दिल की विफलता के आम रूपों के लिए प्रासंगिक नहीं हो सकता है. अन्य आम मॉडल बाएं पूर्वकाल अवरोही (एलएडी) धमनी लिगेशन, ट्रांसोटिक संकुचन (टीएसी), और आइसोप्रोटेरेनॉल (आईएसओ) शामिल हैं, प्रत्येक एक अलग रोग वादी2परलक्ष्य ,3,4,5 ,6. LAD धमनी लिगेशन एक पूर्वकाल दीवार मायोकार्डियल इन्फेक्शन इस प्रकार इस्कीमिक कार्डियोमायोपैथी के लिए विशिष्ट एक मॉडल बनाने के लिए प्रेरित करती है। टीएसी दिल की विफलता का एक hypertensive मॉडल बनाने के लिए तीव्र दबाव अधिभार लाती है। हालांकि दबाव ढाल मापा जा सकता है, अतिवृद्धि के स्तरीकरण के लिए अनुमति देता है, उच्च रक्तचाप की तीव्र शुरुआत प्रत्यक्ष नैदानिक प्रासंगिकता4का अभाव है. दोनों LAD और टीएसी मॉडल निष्पादित करने के लिए शल्य विशेषज्ञता के एक उच्च स्तर की आवश्यकता होती है. दिल की विफलता के तीव्र आईएसओ मॉडल तनाव प्रेरित कार्डियोमायोपैथी की नकल करता है, जिसे टाकोटसुबो रोग के रूप में भी जाना जाता है, जो बाएं वेंट्रिकल में कैटेकोलैमाइन और गतिविधि में उल्लेखनीय वृद्धि की विशेषता है जो तीव्र मायोकार्डियल इन्फेक्शन7की नकल करताहै, 8. इसके विपरीत, दिल की विफलता के पुराने आईएसओ मॉडल वर्तमान में उन्नत दिल की विफलता के लक्षण लक्षण, catecholamines1के लंबे समय से ऊंचा स्तर के साथ. पुरानी आईएसओ मॉडल के फायदे हैं कि यह पुरानी adrenergic उत्तेजना है कि उन्नत दिल की विफलता mimics प्रदान करता है और यह अपेक्षाकृत बनाने के लिए आसान है. अन्वेषक को एक ऐसा मॉडल चुनना चाहिए जो उनके हितों की विकृति को सबसे अच्छा पुन: प्राप्त करे।
इस विधि का समग्र लक्ष्य चूहों में दिल की विफलता को प्रेरित करने के लिए एक प्रत्यारोपित मिनी पंप का उपयोग कर रहा है जो दिल की विफलता केरोगियोंमें पाए जाने वाले पुरानी सहानुभूति सक्रियण की नकल करने के लिए आईएसओ को लगातार जारी करता है 1 . विधि सरल और reproduible है. हालांकि माउस उपभेदों के बीच स्पष्ट भिन्नता है, आईएसओ पर प्रशासित 3 से 4 सप्ताह पर 30 mg/kg/दिन ज्यादातर चूहों में हृदय remodeling प्रेरित करने के लिए पर्याप्त है. विशेष रूप से, आईएसओ सप्ताह 1 के दौरान एक समर्थक hypertrophic प्रतिपूरक चरण की ओर जाता है दीवार thinning, वेंट्रिकुलर फैलाव और सप्ताह 2 और 32द्वारा सिस्टोलिक समारोह में कमी के बाद. आईएसओ मॉडल निर्माण के लिए सफलता सीरियल इकोकार्डियोग्राफी द्वारा विवो में मूल्यांकन किया जा सकता अतिवृद्धि का प्रदर्शन, फैलाव, और वेंट्रिकुलर रोग, साथ ही साथ intramyocardial के लिए काटा हृदय ऊतक के हिस्टोलॉजिकल और आणविक मूल्यांकन के माध्यम से पूर्व vivo लिपिड संचय, फाइब्रोसिस, ईआर तनाव, एपोप्टोसिस, और जीन अभिव्यक्ति9,10,11,12.
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Protocol
इस प्रोटोकॉल कैलिफोर्निया विश्वविद्यालय, लॉस एंजिल्स (एआरसी प्रोटोकॉल #2010-075) के पशु देखभाल दिशा निर्देशों का पालन करता है. पाठकों को सलाह दी जाती है कि वे अपने स्वयं के IACUC-अनुमोदित प्रोटोकॉल का पालन करें, के रूप में पेरी-प्रक्रिया माउस देखभाल और analgesia प्रबंधन संस्था-विशिष्ट हो सकता है.
1. आइसोप्रोटेनोल परासरणी पंप की तैयारी
नोट: इस प्रक्रिया को सफलतापूर्वक 9 + सप्ताह पुराने मादा चूहों पर लागू किया गया है 18 + जी से 100 से अधिक inbred माउस उपभेदों, साथ ही, पुरुष चूहों में उपभेदों के एक सबसेट में. इस प्रक्रिया के लिए कोई अधिकतम शरीर के वजन की सीमा नहीं है. हमेशा उम्र से मेल खाने वाले नियंत्रण शामिल करें, क्योंकि यह अज्ञात है कि क्या उपचार की उम्र दिल की विफलता के विकास के लिए आइसोप्रोटेरेनॉल प्रेरित संवेदनशीलता को प्रभावित करती है।
- वजन और प्रत्येक माउस के लिए शरीर के वजन रिकॉर्ड.
- प्रत्येक माउस के लिए समप्रोटेरेनॉल की उपयुक्त मात्रा और सांद्रता की गणना करें (तालिका 1 देखें ; पूरक फ़ाइल).
नोट: इस प्रयोग में प्रयुक्त परासरणी पंपों की मात्रा 100 डिग्री सेल्सियस है और इन्हें 28 दिनों तक सतत प्रवाह दरों पर औषधियों को वितरित करने के लिए अभिकल्पित किया गया है। पंप लोडिंग के दौरान भरने ट्यूब में मात्रा हानि के लिए खाते में पंप प्रति आइसोप्रोटेरेनॉल समाधान के एक अतिरिक्त 20 डिग्री एल तैयार करें। - एक विश्लेषणात्मक संतुलन का उपयोग करके समप्रोटेनोल की उचित मात्रा (सारणी 1) का उपयोग करें और इसे बाँझ 0ण्9% NaCl समाधान के 120 डिग्री एल में भंग कर दें। पिपेट जोरदार या भंवर 1 मिनट के लिए पूरी तरह से solubilize isoproterenol.
नोट: एक प्रयोगशाला जैव सुरक्षा कैबिनेट में परासरणी पंप तैयार करें. पंप्स शल्य दस्ताने के साथ नियंत्रित किया जाना चाहिए. बाँझ तकनीक परासरणी पंपों की तैयारी के दौरान और शल्य प्रत्यारोपण प्रक्रिया के दौरान की सिफारिश की है। - वजन और अपने प्रवाह मध्यस्थ के साथ एक साथ खाली परासरणी पंप रिकॉर्ड और फिर प्रवाह मध्यस्थ को हटा दें.
- एक 1.0 एमएल सिरिंज में आइसोप्रोटेरेनॉल समाधान के 120 डिग्री एल एस्पायर और 27 गेज कुंद-टिप भरने ट्यूब परासरणी पंपों के साथ प्रदान की संलग्न।
नोट: सुनिश्चित करें कि सिरिंज और भरने ट्यूब हवा के बुलबुले से मुक्त कर रहे हैं। - जबकि ईमानदार स्थिति में पंप पकड़े, शीर्ष पर पंप खोलने के माध्यम से भरने ट्यूब डालने जब तक भरने ट्यूब की नोक पंप जलाशय के नीचे के पास बैठता है.
- सिरिरिंज प्लंजर को धीरे-धीरे धकेलकर परासरणी पंप लोड करें जब तक कि आइसोप्रोटेरेनॉल समाधान पंप खोलने तक नहीं भर जाता है।
- ध्यान से भरने ट्यूब को हटाने और अतिरिक्त समाधान पोंछ।
- पंप बंद करें और किसी भी अतिरिक्त समाधान को पोंछने के लिए प्रवाह मॉडरेटर को वापस डालें।
- पुष्टि करें कि जलाशय की मात्रा का 90% से अधिक परासरणी पंप reweighing द्वारा भरा गया है.
नोट: नियंत्रण पंप बाँझ 0.9% NaCl समाधान के साथ पंप जलाशय भरने के द्वारा एक ही तरीके से तैयार कर रहे हैं।
2. शल्य चिकित्सा उपकरणों की तैयारी
- फाइबर ऑप्टिक ओ-रिंग प्रकाश माइक्रोस्कोप illuminator, 2 संदंश, सुई धारक, गर्म मनका sterilizers, कांच मोती, और कैंची(सामग्री की तालिका)सहित सभी शल्य चिकित्सा उपकरणों को साफ करें।
- सर्जरी से पहले उपकरणों को बाँझ करने के लिए 30 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर ऑटोक्लेव सर्जिकल उपकरण।
3. इसोप्रोटेरेनॉल परासरणी पंप सर्जिकल प्रत्यारोपण
- 95% O2 और 5% CO2 में 3% आइसोफ्लुरेन के साथ एक प्रेरण कक्ष में माउस रखकर संज्ञाहरण को प्रेरित करें। एक नाक कोन के माध्यम से 2% आइसोफ्लुरेन के साथ संज्ञाहरण बनाए रखें।
- analgesia के लिए कंधे ब्लेड के बीच गर्दन की घसीट करने के लिए 5 मिलीग्राम / किलो carprofen एस.सी.
- कॉर्निया निर्जलीकरण को रोकने के लिए आंखों पर नेत्र मलम रखें।
- श्वसन दर, टो प्रतिक प्रतिवर्त, और श्लेष्म झिल्ली के रंग की निगरानी करके संज्ञाहरण की गहराई की जाँच करें।
- माउस को एक गर्म पैड पर एक सुपाच्य स्थिति में रखें। पेट के निचले हिस्से से बाल निकालें और बीटाडीन या क्लोरहेक्सीडीन के साथ त्वचा को कीटाणुरहित करें।
नोट: पोस्ट ऑपरेटिव संक्रमण को कम करने के लिए, सुनिश्चित करें कि शल्य क्षेत्र घटना बालों से मुक्त है. - एक 1 सेमी लंबी मिडलाइन त्वचा चीरा कटौती करने के लिए शल्य कैंची की एक जोड़ी का प्रयोग करें। कुंद समाप्त कैंची की एक जोड़ी का प्रयोग करें ध्यान से अंतर्निहित peritoneal दीवारों से त्वचा विच्छेदन.
नोट: पंप के आकार को समायोजित करने के लिए एक इंट्रापर्टोनल डिलीवरी को पसंद किया जाता है। - peritoneal दीवारों को संदंश के साथ अंतर्निहित आंत्र से दूर खींचो और ठीक शल्य कैंची का उपयोग कर peritoneal दीवारों में एक 0.8 सेमी छेद में कटौती.
- पहले प्रवाह मॉडरेटर अंत के साथ peritoneal गुहा में परासरणी पंप डालें.
- एक बाधित फैशन में 5.0 अवशोषित टांके का उपयोग कर peritoneal दीवारों में पकड़ बंद करो. एक बाधित फैशन में त्वचा चीरा बंद करने के लिए 6.0 गैर अवशोषित टांके का प्रयोग करें।
- वसूली के दौरान इसे गर्म और सूखा रखने के लिए माउस को एक समर्पित इनक्यूबेटर में रखें। सामान्य श्वास और आंदोलन की वापसी के लिए पहले दो घंटे में हर 30 मिनट में माउस की निगरानी द्वारा संज्ञाहरण से वसूली का आकलन करें।
- एक बार माउस पूरी तरह से संज्ञाहरण से बरामद हो गया है, यह नियमित आवास के लिए वापस. 3 दिन तक दैनिक जटिलताओं के लिए जानवर की निगरानी करने के लिए जारी रखें और फिर प्रयोग के अंत तक हर 2 से 3 दिन बाद।
नोट: जानवरों के बाद ऑपरेटिव दर्द या संक्रमण के सबूत के लिए निगरानी की जानी चाहिए, वजन घटाने के लक्षण, गतिशीलता की कमी, असामान्य मुद्रा, दूल्हे के लिए विफलता, और अत्यधिक चाट या चीरा क्षेत्र के काटने. - 48 एच तक और उसके बाद आवश्यकता के अनुसार कारप्रोफेन 5mg/kg s.c. हर 24 एच प्रशासन।
- शल्य साइट संक्रमण को रोकने के लिए 5 दिनों के लिए पीने के पानी में 0.25 मिलीग्राम/एमएल एमोक्सिसिलिन को प्रशासित करें।
- 7 से 10 दिनों के बाद गैर अवशोषित टांके निकालें।
4. संज्ञाहरण के तहत इकोकार्डियोग्राफिक मूल्यांकन
नोट: इकोकार्डियोग्राफिक मूल्यांकन कई हफ्तों से अधिक धारावाहिक हृदय remodeling की निगरानी करने के लिए बार-बार किया जा सकता है। हम 3 सप्ताह से अधिक साप्ताहिक अंतराल पर इकोकार्डियोग्राफिक माप प्रदर्शन किया.
- एक प्रेरण कक्ष में संज्ञाहरण को 1.25% से 1.5% आइसोलुरेन के लिए प्रेरित करें। एक बार उचित बेहोश हो जाने पर, माउस को टेप के साथ इकोकार्डियोग्राफी प्लेटफॉर्म पर सुरक्षित करें जिससे माउस को नाक शंकु के माध्यम से संज्ञाहरण प्राप्त करना जारी रखने की अनुमति मिल सके।
- नकारात्मक कालक्रम और अधिक सेडेशन के inotropic प्रभाव को कम करने के लिए 1% के रखरखाव खुराक के लिए isoflurane कमी. अध्ययन के दौरान श्वसन और हृदय की दर पर ध्यान दें और जरूरत के अनुसार isoflurane खुराक समायोजित करें।
- एक depilatory लोशन के साथ छाती बाल निकालें और बालों से मुक्त छाती पोंछ.
- छाती पर अल्ट्रासाउंड जेल रखें और दिल की छवि के लिए अल्ट्रासाउंड जांच की स्थिति।
- बी-मोड में, पैरास्टर्नल लांग-अक्ष दृश्य में बाएं वेंट्रिकल (एलवी) को छवि करें। अल्ट्रासाउंड बीम के विमान में महाधमनी वाल्व और एलवी शीर्ष संरेखित करने के लिए इकोकार्डियोग्राफी मंच समायोजित करें।
- इकोकार्डियोग्राफी मंच को झुकाएं ताकि एलवी लंबी धुरी को 90 डिग्री पर अल्ट्रासाउंड बीम और छवि के केंद्र में एलवी अधिकतम व्यास के लिए रखें।
- अल्ट्रासाउंड जांच 90 डिग्री मोड़ द्वारा LV लघु अक्ष छवि।
- एम मोड में LV दीवार मोटाई और आंतरिक आयाम उपाय.
- माउस को पिंजरे में वापस रखें। सामान्य श्वास और सहज शरीर आंदोलनों की वापसी के लिए मॉनिटर करें।
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Representative Results
हमारे पहले प्रकाशित अध्ययन में, हम 105 हाइब्रिड माउस विविधता पैनल (HMDP) उपभेदों2,13भर में परासरणी पंप के माध्यम से 21 दिनों में 30 mg/kg/d की एक आईएसओ खुराक प्रशासित . हमने आधार रेखा पर निष्पादित इकोकार्डियोग्राम का उपयोग करके परिणामों का मूल्यांकन किया, ISO उपचार के सप्ताह 1, 2 और 3 (चित्र 1)। एक पूर्व अध्ययन के समान जहां लेखकों 23 माउस उपभेदों के बीच isoproterenol के प्रभाव का अध्ययनकिया 14,हम echocardiographic मापदंडों के बीच हड़ताली अंतर तनाव भिन्नता मनाया. इकोकार्डियोग्राफिक पैरामीटरों और मॉडल विकास के लिए अपेक्षित समय पर आधारित साप्ताहिक परिवर्तनों का सारांश प्रस्तुत किया गया है (चित्र 2 और चित्र 3)2,15. हालांकि बदलाव माउस उपभेदों के बीच देखा गया, औसत पर, अंत diastole पर interventricular septal दीवार मोटाई (IVSd) और आंशिक shortening (FS) पहले सप्ताह में वृद्धि लेकिन बाद में समय अंक से कमी; अंत डायस्टोल (LVIDd) में बाएँ वेंट्रिकुलर आंतरिक व्यास और बाएं वेंट्रिकुलर द्रव्यमान (LVM) 3 सप्ताह की अवधि में वृद्धि(चित्र 3)। इन निष्कर्षों के साथ संगत कर रहे हैं एक समर्थक hypertrophic प्रतिपूरक चरण के दौरान सप्ताह 1 isoproterenol के बाद दीवार thinning, वेंट्रिकुलर फैलाव और सिस्टोलिक समारोह में कमी. हमारे पहले प्रकाशित अध्ययन भी सप्ताह 32द्वारा फाइब्रोटिक मार्कर Lgals3 और दिल की विफलता मार्कर Nppb सहित बाएं वेंट्रिकुलर अतिवृद्धि के साथ जुड़े कई जीन सबसेट के upविनियमन का प्रदर्शन किया. अन्य अंतर विनियमित जीन एंजियोजेनेसिस में शामिल उन लोगों में शामिल हैं, गुप्त संकेत ग्लाइकोप्रोटीन, पॉलीसैकराइड बंधन, actin cytoskeleton, chemokine संकेतन मार्ग, प्रोटीनी extracellular मैट्रिक्स, और कोलेजन2. इन परिणामों इकोकार्डियोग्राफिक और हिस्टोलॉजिकल निष्कर्षों द्वारा पुष्टि कर रहे हैं: माउस दिल आईएसओ के तहत visibly बड़ा बाएँ वेंट्रिकुलर कक्ष आयाम और saline नियंत्रण के सापेक्ष आईएसओ उपचार के तहत फाइब्रोसिस की अधिक मात्रा का प्रदर्शन किया(चित्र 4)।
चित्रा 1: क्रोनिक Isoproterenol (आईएसओ)-मिनी-पंप के माध्यम से प्रेरित दिल विफलता मॉडल.
यह आंकड़ा वांग एट अल2 और चांग एट अल से अनुमति के साथ अनुकूलित किया गया है15कृपया यहाँ क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए.
चित्र 2: संकर माउस विविधता पैनल (HMDP) माउस उपभेदों के बीच हृदय संरचना और समारोह के इकोकार्डियोग्राफिक उपायों में भिन्नता.
काले सलाखों के क्रम में आधार रेखा शर्त के तहत माप का प्रतिनिधित्व करते हैं. सफेद सलाखों के निरंतर आईएसओ जलसेक के 3 सप्ताह के बाद माप का प्रतिनिधित्व करते हैं. आईवीएसडी - इंटरवेंट्रिक्युलर पट दीवार मोटाई; LVIDd - अंत डायस्टोल में छोड़ दिया वेंट्रिकुलर आंतरिक व्यास; LVM - बाएं वेंट्रिकुलर द्रव्यमान; FS ] आंशिक लघुन. त्रुटि पट्टियाँ साधन (SEM) की मानक त्रुटियों का प्रतिनिधित्व करती हैं. यह आंकड़ा वांग एट अल2 और चांग एट अल15से अनुमति के साथ अनुकूलित किया गया है।
चित्र 3: प्रत्येक शास्त्रीय inbred तनाव के लिए प्रत्येक आईएसओ समय बिंदु पर आधार रेखा की तुलना में इकोकार्डियोग्राफिक उपायों में औसत परिवर्तन.
यह आंकड़ा वांग एट अल2 और चांग एट अल15से अनुमति के साथ अनुकूलित किया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्रा 4: क्रोनिक आइसोप्रोटेरेनॉल जलसेक के बाद इकोकार्डियोग्राफिक और हिस्टोलॉजिक परिवर्तन।
(ए) प्रतिनिधि एम-मोड इकोकार्डियोग्राम छवियों से 2 चूहों आधार रेखा पर और सप्ताह में 3 आइसोप्रोटेरेनॉल के दिखाए जाते हैं। नोट दोनों चूहों में बाएँ वेंट्रिकुलर आंतरिक आयामों के वृद्धि के रूप में के रूप में अच्छी तरह से एंडोकार्डियल फाइब्रोसिस के विकास (लाल तीर) माउस #2 में. (बी)छोटे अक्ष में बाएं वेंट्रिकल के मैसन के ट्राइक्रोम दाग आइसोप्रोटेरेनॉल उपचार (स्केल बार: 2 मिमी) के साथ व्यापक फाइब्रोसिस को दर्शाता है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
| शरीर का वजन (छ) | दैनिक खुराक ($g/ | फ्लो रेट (जेडएल/ | एकाग्रता (जेडएल/ | आइसोप्रोटेरेनॉल (mg/120 डिग्री सेल्सियस) |
| 20 | 600 | 2.64 | 227 | 27.3 |
| 21 | 630 | 2.64 | 239 | 28.6 |
| 22 | 660 | 2.64 | 250 | 30 |
| 23 | 690 | 2.64 | 261 | 31.4 |
| 24 | 720 | 2.64 | 273 | 32.7 |
| 25 | 750 | 2.64 | 284 | 34.1 |
| 26 | 780 | 2.64 | 295 | 35.4 |
| 27 | 810 | 2.64 | 307 | 36.8 |
| 28 | 840 | 2.64 | 318 | 38.2 |
| 29 | 870 | 2.64 | 330 | 39.5 |
| 30 | 900 | 2.64 | 341 | 40.9 |
तालिका 1: Isoproterenol एकाग्रता और 30 मिलीग्राम/किलोग्राम/d की परासरणी पंप दर पर प्रतिनिधि शरीर के वजन के लिए तैयारी। इस तालिका को वांग एट अल 2और चांग एट अल15से अनुमति के साथ अनुकूलित किया गया है।
पूरक फ़ाइल. इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
हमने इस विधि को पुरानी बीटा-एड्रेनर्जिक उत्तेजना2,13के कारण हृदय परिणामों का आकलन करने के लिए इनब्रेड चूहों के 100 से अधिक उपभेदों पर लागू किया है . आइसोप्रोटेरेनॉल की संवेदनशीलता में महत्वपूर्ण अंतर माउस उपभेदों के बीच मौजूद होने के लिए जाना जाता है और16की जरूरत के रूप में ब्याज के तनाव के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। यह माउस उपभेदों के बीच बीटा-एड्रीनर्जिक रिसेप्टर समारोह में भिन्नता के कारण हो सकताहै 17, स्वायत्त तंत्रिका तंत्र गतिविधि में तनाव पर निर्भर मतभेद16, बीटा-एड्रेनर्जिक रिसेप्टर (बीटा-एआर) घनत्व और / और उपभेदों के बीच अन्य आनुवंशिक मतभेद. विवो धारावाहिक इकोकार्डियोग्राफी के साथ-साथ पूर्व विवो कार्डियक ऊतक ऊतक ऊतक और आईएसओ के बिना जीन अभिव्यक्ति के आधार पर, पुरानी आइसोप्रोटेनोल उपचार सेलुलर प्रक्रियाओं से फैले हड़ताली मतभेदों को प्रेरित किया, सूजन के लिए extracellular मैट्रिक्स प्रणाम2,13. निम्नलिखित विचार इस दिल की विफलता मॉडल के आवेदन के लिए प्रासंगिक हो सकता है.
आइसोप्रोटेनोल परासरणी पंप से रोपे गए 30% चूहों की मृत्यु प्रायोगिक प्रोटोकॉल2,13के अंत से पहले ही हो गई . इनमें से 90% से अधिक पंप प्रत्यारोपण के बाद पहले 48 घंटे के भीतर मर गया. ये मौतें विशेष रूप से तनाव विशिष्ट दिखाई दीं, जिसमें BXA-12/PgNJ, BXD-34/TyJ, BTBRT/lt;+gt;tf/J, N$W/LacJ, BXD40/TyJ, और BALB/cJ सबसे अधिक अतिसंवेदनशील उपभेदों के साथ दिखाई दिया। इसके अलावा, हमने देखा कि चूहों का वजन और lt; 20 जी एक उच्च जल्दी के बाद ऑपरेटिव मृत्यु दर था (48 एच के भीतर मौत). चूहों को कम से कम 9 से 10 सप्ताह की उम्र या 20 ग्राम तक परिपक्व होने की अनुमति देने से प्रारंभिक प्रसवोत्तर मृत्यु दर को कम किया जा सकता है। इसलिए, किसी प्रयोग की योजना बनाते समय तनाव-विशिष्ट अंतरों और प्रारंभिक प्रसवोत्तर मृत्यु दर का हिसाब रखना महत्वपूर्ण हो सकता है। हमने मृत्यु के कारणों का पता लगाने के लिए शव परीक्षण नहीं किया। इसलिए, हम परासरणी पंपों की विफलता दर निर्धारित करने में सक्षम नहीं हैं। चूहों कि बलिदान किया गया था हम कोई दृश्य दोष का पता चला.
इसोफ्लुरेन को ऋणानुक्रमीय तथा अस्थानिक माना जाता है इकोकार्डियोग्राफिक माप पर सीडेशन और आईसोफ्लुरेन के प्रभाव को कम करने के लिए सावधानी बरती जानी चाहिए। यदि स्टर्नम एक बोनी छाया डाले और छवि गुणों को नीचा, माउस की स्थिति एक अलग इंटरकोस्टल अंतरिक्ष के माध्यम से दिल छवि. interventricular दीवार मोटाई माप सही वेंट्रिकुलर दीवार की उपस्थिति से जटिल है, खराब रेखांकित सीमाओं को कम करने के लिए एक अलग इंटरकोस्टल अंतरिक्ष के माध्यम से reimage. सटीक माप डाउनस्ट्रीम तुलनात्मक विश्लेषण के लिए महत्वपूर्ण हैं.
चूहों में परासरणी मिनीपम्पों के प्रयोग का दस्तावेजीकरण करने वाला साहित्य18,19है . पाठकों को ध्यान देना चाहिए कि इस प्रोटोकॉल केवल चूहों के साथ इस्तेमाल किया गया है और अन्य साहित्य अन्य प्रजातियों के साथ प्रयोग के लिए संदर्भित किया जाना चाहिए.
पिछले साहित्य से पता चलता है कि ostoproterenol के दैनिक इंजेक्शन और osmotic पंपों के माध्यम से निरंतर प्रशासन शरीर के वजन के सापेक्ष इसी तरह के वेंट्रिकुलर वजन का कारण20. तथापि, हीमोडायनामिक्स में अंतर है। दैनिक इंजेक्शन तत्काल हाइपोटेंशन और क्षिप्रहृदयता का कारण बनते हैं जिसके बाद कुछ घंटों के भीतर प्रतिक्षेप उच्च रक्तचाप होता है। सतत प्रशासन पंप प्रत्यारोपण के दिन तत्काल हाइपोटेंशन का कारण बनता है जिसके बाद 220दिन तक हल्के उच्च रक्तचाप के लिए रक्तचाप सामान्य हो जाता है . समग्र हेमोडायनामिक रुझान दिल की विफलता के रोगियों में लंबे समय से सक्रिय सहानुभूति हार्मोन की नकल करते हैं।
isoproterenol के 1 सप्ताह में, संकुचन वृद्धि हुई थी या supernormal. सप्ताह 2 और 3 तक, contractility सबसे उपभेदों के लिए सामान्य करने के लिए वापस आ गया था और कुछ उपभेदों के लिए कमी आई. चल रहे isoproterenol की पृष्ठभूमि में, सामान्य contractility के रूप में आंशिक shortening (FS) और निष्कासन अंश (EF) द्वारा मापा, वास्तव में, बिगड़ा संकुचन आरक्षित प्रतिनिधित्व कर सकते हैं. यदि अन्वेषक हृदय हानि का एक और अधिक गहरा डिग्री प्रेरित करने के लिए इच्छाओं, एक आईएसओ खुराक में वृद्धि या आईएसओ उपचार की अवधि को लंबा कर सकते हैं 4 सप्ताह, जबकि वृद्धि हुई पोस्ट ऑपरेटिव मृत्यु दर के जोखिम वजन. अंत में, हमारे द्वारा प्रस्तुत डेटा केवल मादा चूहों पर आधारित थे। मादा चूहों ने पुरुष चूहों21की तुलना में इस्किमिया रिपरफ्यूजन चोट मॉडल में उच्च पोस्ट-इस्कीमिक संकुचन समारोह और कम एटीपी-डिप्रन का प्रदर्शन किया है। इसके अलावा, एक पुरानी आईएसओ मॉडल में, पुरुष चूहों शरीर के वजन अनुपात के लिए एक ऊंचा दिल का प्रदर्शन किया है और महिलाओं की तुलना में parotid और submaxillary ग्रंथियों में कुल norepinephrine के स्तर को कम22. उपयोगकर्ता महिलाओं और पुरुषों के लिए इस दृष्टिकोण को लागू करते समय मनाया परिणामों में लिंग आधारित अंतर पर विचार करने की आवश्यकता हो सकती है.
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Disclosures
लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
लेखकों के समर्थन के वित्तपोषण के लिए NIH K08 HL133491 स्वीकार करते हैं.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Micro-Osmotic Pump System with Flow Moderator in Place | Alzet | Model 1004 | Includes filling tube, flow moderator and pump body |
| (-)-Isoproterenol hydrochloride | Sigma-Aldrich | 16504-1G | (-)-Isoproterenol hydrochloride is a powder that needs to be stored at -20°C. |
| 1 ml sterile syringe | VWR | BD309602 | |
| 30 W LED Fiber optic O-ring light microscope illuminator | AmScope | SKU: LED-30WR | |
| 5-0 COATED VICRYL (polyglactin 910) Suture | Ethicon | J303H | 5-0, absorbable |
| Fine Scissors - Sharp | FST | 14060-09 | |
| Glass beads | FST | 18000-46 | |
| Hot bead sterilizers | FST | 18000-50 | |
| Iris forceps | WPI | 15915 | |
| Look Sharpoint 6-0, 18" Black Nylon Monofilament Suture | LOOK | AA-2176 | 6-0, non-absorbable |
| Needle holder | WPI | 15926 | |
| Normal Saline, 0.9% NaCl | Fisher | 89167-772 |
References
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