Summary
इस प्रोटोकॉल का वर्णन करता है साल्मोनेला संचालित आंत्र फाइब्रोसिस के एक माउस मॉडल है कि transmural सूजन और फाइब्रोसिस सहित Crohn रोग के प्रमुख रोग पहचान जैसा दिखता है. इस विधि मेजबान कारकों है कि उत्परिवर्ती चूहों एक C57Bl/6 आनुवंशिक पृष्ठभूमि पर बनाए रखा का उपयोग कर फाइब्रोटिक परिणामों को बदलने का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
Abstract
कोलेजन जैसे extracellular मैट्रिक्स के रोग संचय द्वारा विशेषता ऊतक फाइब्रोसिस लगातार सूजन और डिस्विनियमित मरम्मत का परिणाम है। सूजन आंत्र रोग (आईबीडी) में, फाइब्रोसिस आवर्तक सख्त संरचनाओं की ओर जाता है जिसके लिए सर्जिकल लकीर के अलावा कोई प्रभावी चिकित्सा नहीं है। इसकी देर से शुरुआत के कारण, फाइब्रोसिस ड्राइव करने वाली प्रक्रियाओं का कम अध्ययन किया जाता है और काफी हद तक अज्ञात होता है। इसलिए, फाइब्रोटिक जटिलताओं IBD में एक बड़ी चुनौती का प्रतिनिधित्व करते हैं. इस प्रोटोकॉल में, आंतों फाइब्रोसिस के विवो मॉडल में एक मजबूत वर्णन किया गया है जहां C57Bl/6 चूहों के स्ट्रेप्टोमाइसिन पूर्व उपचार के बाद टीका ग्रेड साल्मोनेला टाइफिमरियम के साथ मौखिक गैवेज द्वारा पीछा किया जाता है -AroA उत्परिवर्ती लगातार रोगज़नक़ उपनिवेशन की ओर जाता है और सीकम का फाइब्रोसिस एस तैयार करने के लिए पद्धति टीका लगाने के लिए Typhimurium -AroA, सीकम और प्लीहा में रोगज़नक़ भार की मात्रा, और आंतों के ऊतकों में कोलेजन जमाव का मूल्यांकन समझाया जाता है. यह प्रयोगात्मक रोग मॉडल मेजबान कारकों की जांच करने के लिए उपयोगी है जो या तो सीडी की तरह आंतों के फाइब्रोसिस को बढ़ाते हैं या बढ़ा देते हैं।
Introduction
अल्सरेटिव कोलाइटिस (यूसी) और क्रोहन रोग (सीडी) आईबीडी के दो प्रमुख रूप हैं और गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल ट्रैक्ट 1,2के पुराने और relapsing सूजन विकारों के रूप में विशेषता है। इन विकारों का रोगियों के जीवन की गुणवत्ता पर बड़ा प्रभाव पड़ता है। IBD के लक्षण पेट में दर्द, दस्त, मतली, वजन घटाने, बुखार, और थकान3शामिल हैं. हाल के अध्ययनों से आनुवंशिक और पर्यावरणीय कारकों की पहचान की गई है जो रोग रोगजनन में योगदान करते हैं; ऐसा माना जाता है कि ऐसे जोखिम कारक उपकला बाधा के विघटन में योगदान देते हैं जिसके परिणामस्वरूप ल्यूमिनल एंटीजन4का स्थानांतरण या अधिक नमूना होता है . एक परिणाम के रूप में, यह आंतों की प्रतिरक्षा कोशिकाओं द्वारा मध्यस्थता commensal वनस्पति के लिए एक aberant भड़काऊ प्रतिक्रिया शुरू करता है4. आईबीडी से जुड़ी जटिलताओं की विशेषताएं जीआई ट्रैक्ट से परे साइटों तक पहुंच सकती हैं जो जोड़ों, त्वचा और यकृत1,2सहित विभिन्न अंगों को प्रभावित करती हैं। यूसी के हॉलमार्क में गंभीर और फैलाना सूजन शामिल है जो आमतौर पर बृहदान्त्र1में स्थानीयकृत होती है . रोग विकृति आंत्र के श्लेष्म और सबम्यूकोसा को प्रभावित करती है जिसके परिणामस्वरूप सतही म्यूकोसल अल्सरेशन1होता है . इसके विपरीत, सीडी जीआई पथ के किसी भी हिस्से को प्रभावित कर सकता है हालांकि रोग के सबूत आमतौर पर बृहदान्त्र और दूरस्थ ileum2में पाया जाता है। इसके अलावा, सीडी में सूजन transmural है, आंत्र दीवार2के सभी परतों को प्रभावित.
आईबीडी की पहचान किए गए अनेक आईबीडी संवेदनशीलता जीनों से यह संकेत मिलता है कि उपकला बाधा या प्रतिरक्षा का विविनियमन रोग की प्रगति5के लिए महत्वपूर्ण योगदानकर्ता हैं . मोनोसाइट्स द्वारा व्यक्त न्यूक्लिओटाइड ओलिगोमराइजेशन डोमेन 2 (NOD2) में उत्परिवर्तन सीडी के लिए बढ़ी हुई संवेदनशीलता के साथ जुड़े पाए गए; इसमें जीवाणु घटकों औररोग6 के परिवर्तित सहज प्रतिरक्षा का पता लगाने के बीच एक कड़ी पर प्रकाश डाला गया है . हाल ही में जीनोम-वाइड एसोसिएशन अध्ययन (जीडब्ल्यूएएस) ने आईबीडी के रोगजनन में संभावित रूप से शामिल अतिरिक्त रास्ते का पता लगाया है जिसमें आनुवंशिक बदलाव शामिल हैं: STAT1, NKX2-3, IL2RA, IL23R निर्भर रास्ते अनुकूली प्रतिरक्षा से जुड़ा हुआ , MUC1, MUC19, और PTGER4 आंत्र बाधा रखरखाव में , और ATG16L- मध्यस्थताautophagy 7,8,9. हालांकि इन जनसंख्या आधारित आनुवंशिकी अध्ययनआईबीडी के बारे में हमारी समझ में वृद्धि हुई है, लेकिन केवल संवेदनशीलता alleles शुरू करने और पुरानी बीमारी3को बनाए रखने में अपर्याप्त हैं. आंत microbiome संरचना में परिवर्तन और विविधता में कमी सहित अन्य गैर आनुवंशिक कारकों आंतों की सूजन के साथ जुड़ा हुआ है. हालांकि, यह स्पष्ट नहीं है कि आंत डिस्बिओसिस से पहले होता है या डिस्विनियमित प्रतिरक्षाप्रतिक्रियाओं 3का परिणाम है। हालांकि आईबीडी के ईटियोलॉजी स्पष्ट नहीं है, रोग के रोगजनन के बारे में हमारी समझ आंतों की सूजन के प्रयोगात्मक माउस मॉडल द्वारा बढ़ाया गया है10,11. इन मॉडलों को व्यक्तिगत रूप से पूरी तरह से मानव रोग की जटिलता का प्रतिनिधित्व नहीं करते हैं, लेकिन वे pathophysiological रास्ते है कि IBD के लिए प्रासंगिक हो सकता है और अस्थायी चिकित्सीय रणनीतियों के सत्यापन के लिए स्पष्ट करने के लिए मूल्यवान हैं10, 11| इस तरह के माउस मॉडल आम तौर पर रासायनिक प्रेरण या संक्रमण, प्रतिरक्षा सेल हस्तांतरण, या आनुवंशिक हेरफेर द्वारा सूजन की शुरुआत पर भरोसा करते हैं। इसके अलावा, इन रणनीतियों अक्सर उपकला अखंडता या जन्मजात या अनुकूली प्रतिरक्षा के मॉडुलन में क्षोभ शामिल है.
साल्मोनेला एंटरिका सीरोवार्स आंतों के रोगजनक हैं जो मनुष्यों और चूहों को संक्रमित कर सकते हैं। घूस के बाद, साल्मोनेला एपिथेलिया, एम कोशिकाओं, या एंटीजन पेश कोशिकाओं12के प्रत्यक्ष आक्रमण से आंत उपनिवेश कर सकते हैं। चूहे एस के साथ मौखिक रूप से संक्रमित Typhimurium मुख्य रूप से जीआई पथ12में अपेक्षाकृत कम बहुतायत के साथ तिल्ली और मेसेंटेरिक लिम्फ नोड्स के रूप में प्रणालीगत साइटों के उपनिवेशमें परिणाम है . हालांकि, स्ट्रेप्टोमाइसिन के साथ चूहों के pretreatment सामान्य microbiota13के मेजबान सुरक्षात्मक प्रभाव को कम करके आंत के साल्मोनेला उपनिवेशन की दक्षता को बढ़ाता है। इस मॉडल की पैथोलॉजिकल विशेषताओं में उपकला बाधा, ग्रैन्युलोसाइट भर्ती, और गंभीर एडीमा13के विघटन या अल्सर शामिल हैं। वैकल्पिक रूप से, टीका ग्रेड एस के साथ संक्रमण Typhimurium ]AroA उत्परिवर्ती cecum और बृहदान्त्र के पुराने उपनिवेशन की ओर जाता है कि संक्रमण14के बाद 40 दिन तक बनी रहती है . एस. Typhimurium [AroA तनाव खुशबूदार अमीनो एसिड के biosynthesis में एक दोष है; यह उत्परिवर्ती तनाव avirulent renders और एक अत्यधिक प्रभावी टीका15के रूप में उपयोग किया जा सकता है . चूहों में मौखिक संक्रमण एक Th1- और Th17-cytokine संबद्ध भड़काऊ प्रतिक्रिया की ओर जाता है, व्यापक ऊतक remodeling, और कोलेजन बयान. ऊतक विकृति प्रो-फाइब्रोटिक कारक जैसे TGF-जेड 1, CTGF, और IGF14के ऊंचा स्तर के साथ जुड़ा हुआ है। इस मॉडल में रिपोर्ट transmural फाइब्रोटिक scarring सख्त संरचनाओं की याद ताजा करती है अक्सर IBD में मनाया जाता है. साल्मोनेला द्वारा फाइब्रोसिस को शामिल करने के लिए साल्मोनेला रोगजनकता द्वीपों (एसपीआई)-1 और 2 12द्वारा विरुलेशन की आवश्यकता होती है . महत्वपूर्ण बात, यह एस. Tymphimurium ]AroA संक्रमण मॉडल उत्परिवर्ती चूहों में फाइब्रोटिक प्रतिक्रियाओं के अध्ययन के लिए एक उपयोगी प्रणाली है एक C57/Bl6 पृष्ठभूमि पर बनाए रखा. C57/Bl6 तनाव एस के लिए बेहद संवेदनशील है Typhiumurim SL1344 जीन में एक हानि के समारोह उत्परिवर्तन के कारण संक्रमण प्राकृतिक प्रतिरोध संबद्ध मैक्रोफेज प्रोटीन एन्कोडिंग (NRAMP)-116,17. हमने पाया है कि आईएल-17ए और आरओआर-निर्भर जन्मजात लसीकाभ कोशिकाएं इस मॉडल18में रोगजनन में महत्वपूर्ण योगदान देती हैं।
सीडी की एक प्रमुख जटिलता कोलेजन2,19सहित अतिरिक्त कोशिकीय मैट्रिक्स (ईसीएम) का डिस्रेविनियमित और अत्यधिक जमा करना है. हालांकि जीआई पथ के पुनर्जनन के लिए एक अपेक्षाकृत उच्च क्षमता है, फाइब्रोटिक scarring अनसुलझे घाव उपचार प्रतिक्रियाओं है कि पुरानी और गंभीर सूजन के साथ जुड़े रहे हैं के कारण पैदा कर सकते हैं20,21. सीडी में, यह ऊतक वास्तुकला पर हानिकारक प्रभाव में परिणाम महत्वपूर्ण अंग हानि के लिए अग्रणी21,22. सीडी में पाई जाने वाली सूजन की ट्रांसमरल प्रकृति अंततः लक्षणीय स्टेनोसिस या सख्त गठन21से संबंधित आंत्र दीवार की मोटाई से पहले होती है . इस जटिलता22के लिए लगभग एक तिहाई सीडी रोगियों को आंत्र लकीर की आवश्यकता होती है . आईबीडी में कोई प्रभावी एंटी-फाइब्रोटिक उपचार नहीं है, यह देखते हुए कि इम्यूनोसप्रेसेंट जैसे कि अजाथियोपिनयान या एंटी-टीएनएफजेड जीवविज्ञान का कोई प्रभाव नहीं पड़ता है या केवल मामूली रूप से सर्जिकल हस्तक्षेप ों की आवश्यकता को कम किया जाता है19,23 . जबकि फाइब्रोसिस को पुरानी सूजन का परिणाम माना जाता है , फाइब्रोब्लास्ट्स और पेरिसाइट्स जैसे मेसेन्काइमल मूल की कोशिकाओं को फाइब्रोटिक scarring21,24में ईसीएम के प्राथमिक सेलुलर स्रोत माना जाता है । जीर्ण एस Typhimurium -AroA संक्रमण आंत्र फाइब्रोसिस का एक मजबूत माउस मॉडल है कि सीडी की तरह सुविधाओं के रोगजनन में अंतर्दृष्टि की पेशकश कर सकते हैं.
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Protocol
सभी पशु प्रोटोकॉल ब्रिटिश कोलंबिया विश्वविद्यालय के पशु देखभाल समिति द्वारा अनुमोदित किया गया.
1. चूहों के मौखिक गैवेज के लिए सालमोनेला टायफिमुरियम की तैयारी
- एस के एक जमे हुए ग्लिसरोल स्टॉक से Typhimurium [AroA, LB agar का उपयोग करके एक लकीर प्लेट तैयार करें जिसमें 100 ग्राम/एमएल स्ट्रेप्टोमाइसिन युक्त एक बाँझ टीका पाश के साथ। 37 डिग्री सेल्सियस पर रात भर इनक्यूबेट। स्ट्रीक प्लेट्स को एक सप्ताह तक 4 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया जा सकता है।
- संक्रमण से एक दिन पहले, 2.5 एमएल पानी में 0.5 ग्राम स्ट्रेप्टोमाइसिन को भंग करके एंटीबायोटिक तैयार करें। फिल्टर स्टर्लाइज़िंग स्ट्रेप्टोमाइसिन समाधान के बाद, मौखिक रूप से चूहों को एक बल्ब से फट2जी गैवेज सुई और 1 एमएल सिरिंज का उपयोग करके स्ट्रेप्टोमाइसिन समाधान (20 मिलीग्राम स्ट्रेप्टोमाइसिन/ एक संरोपण पाश का उपयोग करना, एक एकल कॉलोनी के साथ एक संस्कृति ट्यूब में एलबी शोरबा (50 डिग्री ग्राम/ इनक्यूबेट साल्मोनेला संस्कृति वायुगति से 37 डिग्री सेल्सियस पर रात भर 200 आरपीएम पर मिलाते हुए के साथ।
- संक्रमण के दिन, बाँझ पीबीएस में रात भर साल्मोनेला संस्कृतियों के 2 लगातार 1/10 कमजोर पड़ने के प्रदर्शन से अंतिम संक्रमण खुराक तैयार करें। यह लगभग 3 x 106 CFU युक्त एक 100 $L inoculum में परिणाम होगा.
- एक बल्ब से फट 22G gavage सुई और एक 1 एमएल सिरिंज का उपयोग करना, तैयार Salmonella के 100 डिग्री एल के साथ प्रत्येक माउस gavage.
नोट: aseptic तकनीक का उपयोग कर Salmonella संस्कृतियों तैयार करें. साल्मोनेला के अंतिम टीका एकाग्रता streptomycin के साथ एलबी agar पर सीरियल कमजोर पड़ने चढ़ाना द्वारा सत्यापित किया जा सकता है। एस Typhimurium [AroA तनाव प्रोफेसर McNagny (kelly@brc.ubc.ca) से संपर्क करके प्राप्त किया जा सकता है.
2. ऊतकों में साल्मोनेला बोझ का आकलन
- बाँझ पीबीएस के 1 एमएल और एक autoclaved स्टेनलेस स्टील मनका के साथ 2 एमएल सुरक्षित ताला, गोल नीचे microtubes तैयार करें। ऊतक संग्रह से पहले ट्यूबों को पूर्व वजन.
- चूहों से सीकल और प्लीहा ऊतकों को कार्बन डाइऑक्साइड के संपर्क से हटादिया जाता है। अलग-अलग ट्यूबों में अलग-अलग जानवरों से ऊतक एकत्र करें। ऊतक वजन निर्धारित करने के लिए ट्यूब वजन.
- Homogenize 30 हर्ट्ज पर 15 मिनट के लिए एक मिक्सर मिल उपकरण का उपयोग कर. एक 96-अच्छी तरह से 2-एमएल मेगाब्लॉक में प्रति अच्छी तरह से पीबीएस के 900 डिग्री सेल्सियस स्थानांतरण। पिपेट 100 डिग्री ऊतक homogenates के पहले अच्छी तरह से, अच्छी तरह से मिश्रण है, और बाद के कुओं के लिए 100 डिग्री सेल्सियस जोड़कर सीरियल कमजोर पड़ने प्रदर्शन जब तक एक 10-6 कमजोर पड़ने प्राप्त की है. एलबी एगर पर प्रत्येक कमजोर पड़ने की प्लेट 10 डिग्री सेल्सियस जिसमें 100 ग्राम/एमएल स्ट्रेप्टोमसिन होता है।
- गिनती और 100 के एक कारक द्वारा औसत CFU गुणा 1000 $L नमूना के 10 $L के बाद से चढ़ाया गया था, और उचित कमजोर पड़ने कारक. ऊतक वजन द्वारा ऊतक वजन कुल CFU विभाजित ऊतक के ग्राम प्रति CFU निर्धारित करने के लिए.
नोट: ऊतक प्रसंस्करण के दौरान बर्फ पर या 4 डिग्री सेल्सियस पर सभी नमूनों रखें। ऊतक homogenates के साथ धारावाहिक कमजोर पड़ने प्रदर्शन करते समय व्यापक-ओरिफ़िस पिपेट सुझावों का प्रयोग करें। पहले से पीबीएस युक्त 96-वेल मेगाब्लॉक तैयार करें।
3. Picrosirius लाल धुंधला और कोलेजन की मात्रा.
- 10% बफर फॉर्मलिन में रात भर सीकल ऊतकों को ठीक करें और पैराफिन एम्बेडिंग के लिए तैयार करें। Picrosirius लाल धुंधला के लिए 5-$m वर्गों कट के रूप में पहलेवर्णित 25.
- एक उज्ज्वल क्षेत्र माइक्रोस्कोप पर पूरे सीकल पार वर्गों के समग्र छवियों पर कब्जा।
- फिजी खोलें (ImageJ) और खींचें और उपकरण पट्टी पर .tif छवि फ़ाइल ड्रॉप.
- छवि को लाल, हरे और नीले चैनलों में विभाजित करने के लिए मेनू पट्टी पर, छवि का चयन करें और लिखें- आरजीबी स्टैक करें. चैनल को ग्रीन पर सेट करने के लिए पैनल के निचले भाग पर क्षैतिज पट्टी स्लाइड करें.
- छवि खोलें gt; समायोजित करें ]gt; थ्रेशहोल्ड उपकरण. किसी भी पृष्ठभूमि संकेतों को खत्म करने के लिए न्यूनतम और अधिकतम सीमा समायोजित करें। एक बार वांछित थ्रेशोल्ड सेट हो जाने पर, थ्रेशोल्ड उपकरण बंद करें और विश्लेषण करें पर जाएँ | क्षेत्र, क्षेत्र भिन्न, सीमा सीमातक चेक ऑफ़ करें, और लेबल प्रदर्शित करें.
- या तो फ्रीहैंड चयन या बहुभुज चयन उपकरण के साथ ऊतक अनुभाग गेट और विश्लेषणपर क्लिक करके कोलेजन के लिए % क्षेत्र सकारात्मक उपाय
- ऊतक क्षेत्र के लिए कोलेजन धुंधला के लिए पूर्ण क्षेत्र सकारात्मक सामान्य.
नोट: फिजी (ImageJ) https://fiji.sc पर डाउनलोड किया जा सकता है कि एक खुला स्रोत प्रोग्राम है. एक ही कब्जा शर्तों के साथ छवियाँ (यानी, चमक और ध्यान केंद्रित) सटीक परिमाणीकरण के लिए समान सीमा सीमा होनी चाहिए. यदि चयनित ऊतक के भीतर कोई पृष्ठभूमि धुंधला है, तो निरपेक्ष क्षेत्र को मापें और इसे पूरे ऊतक से कोलेजन के लिए सकारात्मक क्षेत्र से घटाएं।
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Representative Results
एस के साथ मौखिक संक्रमण के बाद स्ट्रेप्टोमाइसिन उपचार। टायफिमुरियम एरोआ के कारण विशेष रूप से सीकम में आंतों की सूजन और फाइब्रोसिस मजबूत होती है (चित्र 1)। 108 से 109 CFU प्रति 1 ग्राम सेकम और 104 CFU प्रति 1 ग्राम तिल्ली के विशिष्ट रोगज़नक़ का भार संक्रमित जंतुओं से वसूल किया जा सकता है (चित्र 2) . पिक्रोसिरियस लाल दाग वाले सीकल खंडों में फाइब्रोसिस का आकलन संक्रमण के 21 दिनों के बाद पीक फाइब्रोसिस का संकेत देता है जबकि अधिकांश विकृति दिन 42 पाई द्वारा हल की जाती है (चित्र 3 और चित्र 4) । कोलेजन जमाव आंत के submucosa में सबसे अधिक स्पष्ट है, जबकि श्लेष्म में फाइब्रोसिस मामूली है।
चित्र 1. ऊतक विज्ञान के लिए सीकल सेक्शनिंग का आरेख, साल्मोनेला बोझ मूल्यांकन, और साइटोकिन परिमाणीकरण।
सीकल टिप का प्रतिनिधित्व करने वाले खंड 1 का उपयोग जीन अभिव्यक्ति विश्लेषण के लिए किया जा सकता है जबकि खंड 2 को हिस्टोलॉजी के लिए 10% बफर फॉर्मेलिन में तय किया जाएगा और खंड 3 को बैक्टीरियल गणना के लिए homogenized किया जाएगा।
चित्र 2. सेका और तिल्ली में रोगजनक बोझ।
साल्मोनेला संक्रमण के दौरान ऊतक के प्रति वजन CFU. यह आंकड़ा लो एट अल26से संशोधित किया गया है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
चित्र 3. पिक्रोसियसियस लाल आंतों के ऊतकों के क्रॉस सेक्शन दागता है।
संक्रमित जानवरों और जानवरों से ceca के उज्ज्वल क्षेत्र छवियों 21 और 42 दिनों एस के बाद. Typhimurium ]AroA संक्रमण. स्केल बार, 200 डिग्री मी. यह आंकड़ा लो एट अल26से संशोधित किया गया है.
चित्र 4. आकृतिमितीय विश्लेषण द्वारा कोलेजन जमाव का परिमाणीकरण।
(ए) PSR + धुंधला ऊतक क्षेत्र के लिए सामान्यीकृत. डन्स पोस्ट टेस्ट के साथ एक तरह से ANOVA Kruskal-वालिस परीक्षण द्वारा निर्धारित महत्व। *, पी एंड एलटी; 0.01, एन.एस., पी एंड 0.05. यह आंकड़ा लो एट अल26से संशोधित किया गया है. (बी)फिजी का उपयोग करके सेकल ऊतक में कोलेजन परिमाणीकरण का उदाहरण। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.
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Discussion
IBD के रोगजनन की हमारी समझ आंतों की सूजन के माउस मॉडल द्वारा काफी बढ़ाया गया है। हालांकि इस तरह के व्यक्तिगत मॉडल जटिल और बहुकारक मानव रोग की सभी विशेषताओं recapitulate नहीं है, वे रोग प्रगति की प्रमुख विशेषताओं की पहचान करने में उपयोगी रहा है. आईबीडी के साथ जुड़े फाइब्रोटिक सख्तियां एक प्रमुख कच्ची नैदानिक आवश्यकता बनी हुई हैं क्योंकि वर्तमान उपचार रोग के विकास को पीछे करने में अप्रभावी हैं। इसके अलावा, आंतों फाइब्रोसिस वर्तमान पशु मॉडल में सीमाओं के कारण एक प्रयोगशाला सेटिंग में अध्ययन करने के लिए मुश्किल है। BALB/c चूहों में TNBS के लिए पुरानी जोखिम आईएल-13 और TGF-B1 संकेत27,28द्वारा संचालित है कि बृहदान्त्र में मजबूत कोलेजन जमा प्रेरित करने के लिए दिखाया गया है. हालांकि, आंतों फाइब्रोसिस आमतौर पर इस तरह के डीएसएस उपचार, आईएल-10 कमी, या दत्तक टी सेल हस्तांतरण मॉडल के रूप में कोलाइटिस के अन्य नियमित रूप से इस्तेमाल प्रयोगशाला मॉडल में मनाया नहीं है। ग्रासल एट अल. ने दिखा दिया कि सी 57Bl6 के क्रोनिक गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल संक्रमण को क्षीण किया गया है जिसमें एरोआ उत्परिवर्ती सालमोनेला तनाव होता है जिसके परिणामस्वरूप सीकम12के म्यूकोसल और सबम्यूकोसल क्षेत्रों में मजबूत फाइब्रोसिस होता है। उन्होंने बताया कि पीक फाइब्रोसिस संक्रमण के तीन सप्ताह बाद हुई और Th1 और Th17 प्रतिरक्षा और ऊंचा समर्थक फाइब्रोटिक कारकों TGF-B1, CTGF, और IGF-112के साथ जुड़ा हुआ था. इस विकृति सीडी की याद ताजा करती है के रूप में गंभीर सूजन और फाइब्रोसिस transmural है. जबकि IBD आम तौर पर प्रगतिशील है, पुरानी साल्मोनेला संक्रमण मॉडल का एक महत्वपूर्ण सीमा फाइब्रोटिक इम्यूनोपैथोलॉजी की क्षणिक प्रकृति है। C57Bl/6 चूहों में, आंतों की बीमारी आम तौर पर संक्रमण के बाद छह सप्ताह से हल हो जाती है। इस कमी के बावजूद, इस संक्रमण मॉडल के बाद के चरणों का उपयोग रोग छूट को बढ़ावा देने में शामिल कारकों या प्रक्रियाओं की पहचान करने के लिए किया जा सकता है26.
हालांकि कोलाइटिस के जीवाणु रोगजनक-चालित मॉडल का अच्छी तरह से अध्ययन किया जाता है, लेकिन साल्मोनेला और सीडी के बीच कोई संबंध नहीं है। हालांकि, यह प्रस्तावकिया गया है कि पुरानी साल्मोनेला उपनिवेशन के बाद के चरणों के दौरान फाइब्रोटिक रोग का परिमाण सीधे रोगजनक बोझ के साथ सहसंबंधित नहीं करता है जो यह सुझाव देता है कि पैथोलॉजी गंभीर आंतों के बाद "स्व-प्रॉपेटिंग" है सूजन साल्मोनेला29द्वारा शुरू की जाती है । इसके विपरीत, अनुयायी इनवेसिव Escherichia कोलाई (AIEC) pathovar दृढ़ता से रोगियों के ileal mucosa में अपनी उच्च प्रसार की वजह से सीडी के विकास से जुड़ा हुआ है30. इसके अलावा, लगातार AIEC उपनिवेशन (अप करने के लिए 9 सप्ताह) ileum, cecum और C57Bl/6 सहित कई माउस उपभेदों के बृहदान्त्र flagellin अभिव्यक्ति के माध्यम से पेट में मजबूत मैट्रिक्स संचय की ओर जाता है इस प्रकार इस के फाइब्रोजेनिक प्रेरण क्षमता का प्रदर्शन पाथोबियन31,32. आंतों फाइब्रोसिस के संक्रमण संचालित मॉडल के हाल के विकास ने आईबीडी के मजबूत प्रयोगात्मक मॉडल प्रदान किए हैं। इन नई प्रणालियों उनके उग्र कारकों सहित आंत्र जीवाणु प्रजातियों के बीच संबंधों को विभाजित करने के लिए प्रदान की है, और मेजबान संवेदनशीलता कारक है कि IBD संबद्ध फाइब्रोसिस की हमारी समझ में वृद्धि कर सकते हैं.
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Disclosures
लेखकों के हित का कोई वित्तीय संघर्ष का खुलासा किया है.
Acknowledgments
हम ऊतक विज्ञान सेवाओं के लिए इंग्रिड बार्टा धन्यवाद देते हैं।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 ml round bottom safe lock tubes | Eppendorf | 22363344 | |
| Stainless steel beads | Qiagen | 69989 | |
| PBS | Gibco | 10010031 | |
| Large-Orifice Pipet Tips | Fisher | 2707134 | |
| 2 mL megablock plates | Sarstedt | 82.1972.002 | |
| Gavage needles | FST | 18061-22 | |
| Streptomycin sulfate | Sigma | S9137 | |
| Mixer mill | Retsch | MM |
References
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