Name: Dextran의 황산 나트륨 (DSS)를 사용 Murine 대장염 모델링 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-01-19T17:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 39 s
Description: 배우세요 생쥐에서 덱스트란 황산 나트륨(DSS)을 이용한 급성 대장염 유도 방법과 조직 채취 및 처리 절차. 이 프로토콜은 염증성 장 질환 연구에 재현성 있는 실험 결과를 제공합니다.

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NIH (1 K08 DK080221 - 01)와 밴더빌트 기관 개발 기금에서 제공하는 자금.

1 부 : 상해 - 복구 대장염 모델 <ol><li> 기준 무게 DSS 치료를 시작하기 전에 각각의 마우스에 대한 취득해야합니다. </li><li> 3 % (W / V) Dextran의 황산 나트륨 소금물에 솔루션과 0.45 μm의의 셀룰로스 아세테이트 필터와 필터를 확인하십시오. </li><li> 나흘 동안 3 % DSS 솔루션 마우스 케이지에서 식수를 교체합니다. 쥐를 물의 다른 소스 (자동 급수 시스템에 위치 즉, 제외 팁)에 액세스할 수 없습니다. </li><li> 일 4 층에 일부 colonic 상피 복구를 허용, 추가로 3 일 동안 물을 DSS 솔루션을 대체합니다. 생쥐는 대장염의 체계적 결과를 계량하기 위해 일 넷 무게해야합니다. 체중 감소는 심각한 부상 일반적입니다. </li><li> 일 7, 무게 및 생쥐를 희생. 마우스가 isoflurane, 또는 institutionally 상대방의 inhalational 과용으로 euthanized 수 IACUC이 방법을 승인했다. </li></ol> 2 부 : 검시와 콜론의 착취 <ol><li> 복부에 가리지 액세스를 보장하기 위해 마우스 및 보안 다리 복부 측면을 폭로. 70 % 에탄올로 완전히 복부가 젖었어. </li><li> 티슈 포셉와 복부의 정중선을 파악하고 tenting 피부를 따라서 위쪽으로 연장. 따라서 복부 내용을 노출 복부를 절개하는 미세 밀고 가위를 사용합니다. 정중선에서 xyphoid 과정의 끝에으로 절개를 확장하고 양자 늑골 여백의 하부 측면 따라 연장. </li><li> 소장, 맹장 및 결장을 식별합니다. 신중하게 해부하다 / 주변 장간막에서 콜론을 괴롭혀. 말초 콜론과 직장을 무료로 골반 깊은 콜론을 가로로 쪼개다. 근위 대장을 무료로 colonocecal 여백에 콜론을 가로로 쪼개다. 케어는 천공이 발생하는 경우에는 콜론이 문제가 될 청소로 콜론을 손상하지 않도록이 과정에서 촬영해야합니다. </li><li> 20G 먹이를 바늘과 10 ML의 주사기를 사용 intubate 및 eluate가 대변을 완전히 명확 때까지 얼음처럼 차가운 PBS로 콜론을 플러시. </li><li> 해부 현미경으로 매크로 분석 원하는 경우이 시점에서, 콜론은 "소시지"으로 해결할 수 있습니다. histologic 분석은 4 "급성 대장염의 Histological 분석을 위해 스위스 롤스 만들기"부분으로 진행보다 원하는 경우. </li></ol> 3 부 : 전체 대장의 매크로 해석에 대해 "소시지"으로 처리 <ol><li> 그것은 콜론의 올바른 방향을 유지하는 것이 중요하다, 따라서, 운영자에 가장 가까운 콜론의 말초 끝을 유지. 비 흡수성 봉합사 두 조각 (SP116 1.5 통계 꼰 실크), 길이 한 약 1 인치, 다른 2인치 컷. </li><li> 여전히 좋은 도장을 유지하면서 가능한 한 여백에 가까운 말초 끝을 묶을 봉합의 2 인치 조각을 사용합니다. </li><li> 10 % 5 ML을 포함 20G 먹이 바늘은 결장의 근위 끝에 포르말린 인산염을 버퍼 플레이스. 대충 먹이 바늘의 전구 즉시 근위 봉합의 나머지 부분을 묶어. 먹이 바늘의 전구에 단단히 콜론을 파악하고 콜론이 확장 때까지 포르말린 달이다. 당신은 따라서 "소시지"으로 주입 확장 콜론을두고, 먹이를 바늘을 철회로 봉합에 매듭을 조인다. </li><li> 10 % 포르말린 인산염을 버퍼와 튜브에 콜론을 장소와 15 ML 원뿔 튜브를 입력합니다. 24 시간 동안 수정. </li><li> 포르말린을 붓고 및 추가 24에 대한 70 % EtOH로 바꿉니다. (콜론은 상온에서 무한정 70 % EtOH에 저장할 수 있습니다.) </li><li> 원뿔 관에서 콜론을 제거하고 대장을 손상하지 않도록주의하고, 메스 각 끝에있는 문자열을 잘라. 말초 끝이 문자열의 가장 긴 부분을했다는 것을 기억 하여라. 그것은 긴 시트를 형성 있도록 결장의 근위 끝에 말초에서 길이 방향 컷. 이 시점에서 콜론은 해부 현미경으로 볼 수 있습니다. </li></ol> 4 부 : 급성 대장염의 Histological 분석을 위해 스위스 롤스 만들기 <ol><li> 그것은 콜론의 올바른 방향을 유지하는 것이 중요하다, 따라서, 운영자에 가장 가까운 콜론의 말초 끝을 유지. </li><li> 콜론의 길이를 측정합니다. 이 통계는 부상의 심각도의 또 다른 지표이다. 대장염은 부종을 증가 시키며, 전체 대장의 길이를 단축. </li><li> 세부적으로 밀고 가위를 사용하여 콜론의 근위 끝에 말초에서 길이 방향 절개. 따라서 평면 시트로 콜론을 표시 절개 중 가장자리를 파악하고 distally -&gt; proximally 길을 작업을 옆으로 열어 좋은 밀고 집게를 사용하십시오. </li><li> 콜론 롤링 것은 포셉 한 켤레, 두 손으로 기술을 필요로합니다. 포셉와 말초 여백 중 하나 가장자리를 파악. 순차적으로 근위 여백을 진행 포셉를 회전하고 공개하여 콜론을 롤로 진행합니다. 따라서 3 차원 또는 "스위스 롤"로 나선형을 생성.압연 양식을 유지하려면, 집게로 단단히 롤을 파악하고 27G1 / 2 바늘로 그것을 가로로 쪼개다. 그것이 출구 롤로 바늘을 절곡하여 바늘을 고정합니다. </li><li> 10 % 병에 적절하게 표시 조직 카세트과 장소에 롤 장소는 조직 고정을 위해 24 시간을위한 상온에서 포르말린 인산염을 버퍼. </li><li> 포르말린을 붓고 및 추가 24에 대한 70 % EtOH로 바꿉니다. (콜론은 상온에서 무한정 70 % EtOH에 저장할 수 있습니다.) </li><li> 샘플가 해결되면, 그것은 파라핀 - 임베디드, sectioned 및 histologic 분석을위한 슬라이드에 장착할 수 있습니다. </li></ol> 제 5 부 : 대표 결과 급성 대장염에 대한 DSS 모델은 연구자가 얻을 수정, 그 모델 급성 대장염 콜론을 분석할 수 있습니다. (그림 1) 정상적으로 압연하는 경우 스위스 롤을 절단하고 장착하면, 그것은 전체 결장의 대표 슬라이스를 형성한다. 장착 롤은 말초 (내부) 끝에서 근위 (외부) 끝 (그림 2), 콜론 손상의 범위를 결정하기 위해 H &amp; E 물들일 수 있습니다. Immunohistochemistry 또한 염증성 infiltrates를 파악하고 계량하는 스위스 롤을 수행할 수 있습니다. 소시지 방법이 올바르게 수행되고있다면, 고정 콜론이 확대되고 전체 점막 표면이 쉽게 해부 현미경 (그림 3)에서 조작하고 볼 수 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig1.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig1tmb.jpg" alt="그림 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 1"></a> 그림 1. 적절한 실행 "스위스 롤". (A) 콜론은 근위 끝에 말초에서 굴러 바늘로 가로와 바늘의 끝을 굽힘에 의해 보안됩니다. 그것은 다음 고정을위한 조직 카세트에 배치됩니다. (B) H &amp; E는 DSS (D = 말초 콜론 P = 근위 대장)를 취급 마우스 콜론 만든 스위스 롤 5 μm의 부분을 얼룩. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig2.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig2tmb.jpg" alt="그림 2" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 2"></a> 그림 2. DSS 취급 콜론은 급성 대장염의 흔적을 보여줍니다. 염증과 토굴 손상이 물 처리 제어에 비해 DSS - 처리 대장에 분명 있습니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1652/1652fig3.jpg"><img src="/files/ftp_upload/1652/1652fig3tmb.jpg" alt="그림 3" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="그림 3"></a> 그림 3. "소시지"의 예. 소시지는 포르말린과 함께 주입하고 완전하게 확대했습니다. 약간의 각도는 결장의 자연 굴절률이 존재 보조 것입니다. 열린 소시지가 평평 거짓말을한다.

<ol><li>Okayasu, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+in+the+induction+of+reliable+experimental+acute+and+chronic+ulcerative+colitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice.</a> Gastroenterology. 98 (3), 694-702 (1990).</li>
<li>Martinez, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Deletion+of+Mtgr1+sensitizes+the+colonic+epithelium+to+dextran+sodium+sulfate-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Deletion of Mtgr1 sensitizes the colonic epithelium to dextran sodium sulfate-induced colitis.</a> Gastroenterology. 131 (2), 579-588 (2006).</li>
<li>Moolenbeek, C., Ruitenberg, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%22Swiss+roll%22%3A+a+simple+technique+for+histological+studies+of+the+rodent+intestine%5BTitle%5D)+AND+%22Lab+Anim%22%5BJournal%5D)">The "Swiss roll": a simple technique for histological studies of the rodent intestine.</a> Lab Anim. 15 (1), 57-59 (1981).</li>
<li>Mahler, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+susceptibility+of+inbred+mouse+strains+to+dextran+sulfate+sodium-induced+colitis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Differential susceptibility of inbred mouse strains to dextran sulfate sodium-induced colitis.</a> Am J Physiol. 274, G544-551 (1998).</li>
<li>Aharoni, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunomodulatory+therapeutic+effect+of+glatiramer+acetate+on+several+murine+models+of+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Exp+Ther%22%5BJournal%5D)">Immunomodulatory therapeutic effect of glatiramer acetate on several murine models of inflammatory bowel disease.</a> J Pharmacol Exp Ther. 318 (1), 68-78 (2006).</li>
<li>Hahm, K. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+transforming+growth+factor+beta+signalling+in+the+intestine+contributes+to+tissue+injury+in+inflammatory+bowel+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Loss of transforming growth factor beta signalling in the intestine contributes to tissue injury in inflammatory bowel disease.</a> Gut. 49 (2), 190-198 (2001).</li>
<li>Green, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenergic+modulation+of+Escherichia+coli+O157%3AH7+adherence+to+the+colonic+mucosa%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Physiol+Gastrointest+Liver+Physiol%22%5BJournal%5D)">Adrenergic modulation of Escherichia coli O157:H7 adherence to the colonic mucosa.</a> Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 287 (6), G1238-1246 (2004).</li>
<li>Dieleman, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+experimental+colitis+induced+by+dextran+sulphate+sodium+%28DSS%29+is+characterized+by+Th1+and+Th2+cytokines%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Exp+Immunol%22%5BJournal%5D)">Chronic experimental colitis induced by dextran sulphate sodium (DSS) is characterized by Th1 and Th2 cytokines.</a> Clin Exp Immunol. 114 (3), 385-391 (1998).</li>
</ol>

동물 실험은 밴더빌트 IACUC에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다.

이 프로토콜은 급성 부상, 부상 - 수리, 또는 만성 colonic 부상 프로세스를 모델로 수정할 수 있습니다. 급성 상해 변경 : 즉각적인 희생 뒤에 4~6일에 대한 DSS 처리 광고 lib과 상해 - 수리 수정 : 3-4일과 희생의 복구 기간 (위의 프로토콜에서 설명) 다음 DSS 치료 4-6일로 부상. 만성 대장염의 변경 : 생쥐는 각 사이클 사이에 회복 명이나 일 3 % DSS의 세 5 일주기에 게재됩니다. 생쥐는 마지막 16 일 휴식 기간 이후에 희생됩니다. 연구자들은이 모델로 인식하고 있어야 할 몇 가지 문제가 있습니다 : <ol><li> 부상 사이트의 다양성이 : 우리 손...

<table><tbody><tr><td>Dextran Sulfate Sodium Salt</td><td>USB Corp., Affymetrix</td><td>9011-18-1</td><td>분자량 40,000-50,000</td></tr><tr><td>10% 완충 포르말린 인산염</td><td>Fisher Scientific</td><td>SF100-4</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane, USP</td><td>Phoenix Pharmaceuticals, Inc.</td><td>NDC 57319-474-06</td><td></td></tr><tr><td>TISSUE PATH Macrosette 카세트</td><td>Fisher Scientific</td><td>15182706</td><td></td></tr><tr><td>BD 10 ml 주사기</td><td>BD Biosciences</td><td>309604</td><td></td></tr><tr><td>에틸 알코올</td><td>Pharmco-AAPER</td><td>E190</td><td>증류수로 70%까지 희석</td></tr><tr><td>20G Straight 급이용 바늘</td><td>VWR international</td><td>20068-612</td><td></td></tr><tr><td>27G1/2 PrecisionGlide 바늘</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>해부용 가위 (Sharp/Blunt Tip)</td><td>VWR international</td><td>82027-588</td><td></td></tr><tr><td>Waugh 포셉</td><td>VWR international</td><td>82027-428</td><td></td></tr><tr><td>비흡수성 봉합사</td><td>LOOK Surgical</td><td>SP116</td><td></td></tr><tr><td>Whatman 블로팅 페이퍼</td><td>VWR international</td><td>28298-020</td><td>필요에 따라 절단</td></tr><tr><td>Nalgene 계면활성제 제거 셀룰로오스 아세테이트(SFCA) 필터</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-06731-2</td><td></td></tr><tr><td>탄소 섬유 복합재 디지털 캘리퍼스</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-007-958</td><td></td></tr></tbody></table>

dextran의 황산 나트륨 (dss)를 사용 murine 대장염 모델링

Murine Colitis Modeling using Dextran Sulfate Sodium (DSS)

- Crohn의 대장염 궤양성 대장염 특히 및 Crohn의 질병의 colonic 변종, 대장염은 바이러스 또는 박테리아 감염, 허혈성 모욕, 또는자가 면역 질환에서 발생할 수 있습니다. 급성 대장염은 복부 통증과 팽창, 흡수 장애, 설사, hematochezia 및 배설물에 점액과 함께 제공됩니다. 우리는 환경, 유전 및 대장염의 염증성 장 질환과 동물 모델에서 상피 장벽 부전이 질병의 우리의 이해를 발전에 필수되었습니다 사이의 복잡한 상호 작용을 이해하기 시작하고 있습니다. 하나의 인기있는 모델은 몇 일 지속 상피 손상과 콜론의 강력한 염증 반응의 결과로, 낮은 분자량 Dextran 나트륨 황산 (DSS)와 생쥐의 식수를 보충 포함<sup&gt; 1</sup이 방법의&gt;. 유사 급성 부상, 수리 뒤에 급성 부상 및 복구 모델링 만성 염증성 질환과 interspersed DSS의 반복주기를 모델로 사용할 수 있습니다<sup&gt; 2</sup&gt;. 식수의 3 % DSS의 단일 4 일간 치료 후, 마우스는 체중 감소, 피가 stools, 그리고 설사를 포함한 급성 대장염의 흔적을 보여줍니다. 생쥐는 치료 과정의 결론에 euthanized하고 검시 해부 콜론에서 처리하고 &#39;스위스&#39;압연 수 있습니다<sup&gt; 3</sup&gt; 전체 대장의 미세 분석을 허용하거나 매크로 분석을 허용하는 &quot;소시지&quot;로 포르말린과 함께 들어갈 수 있습니다. 조직은 다음 sectioned 파라핀에 내장하고, histologic 검토를 위해 얼룩이다.

식수에서 실시 Dextran 황산 나트륨 (DSS)은 급성 대장염의 설립 murine 염증성 손상 모델입니다. 이 프로토콜은 DSS 치료와 조직의 준비를 위해 방법을 설명합니다.

Dextran의 황산 나트륨 (DSS)를 사용 Murine 대장염 모델링

결장염은 바이러스 또는 박테리아 감염, 허혈성 손상 또는 자가면역 질환으로 인해 발생할 수 있으며, 특히 궤양성 결장염과 ...의 결장 변이형이 대표적입니다.

마우스에 3% DSS를 4일 동안 자유 섭취하게 합니다. 매일 체중과 설사 및 분변 혈흔의 존재 여부를 기록하며, 4일 후에는 DSS를 멸균수로 교체합니다. 멸균수를 3일 동안 섭취시킨 후, 마우스를 안락사시키고 결장을 적출합니다.결장의 길이를 측정하고 무게를 잽니다. 그 후 결장을 스위스 롤(Swiss roll) 형태나 소시지 형태로 만들어 현미경으로 관찰합니다. 본 비디오 기사에서는 궤양성 대장염 마우스 모델에서 결장의 채취 및 처리 과정을 시연합니다.이 절차는 덱스트란 황산나트륨 처리를 시작하기 전, 밴더빌트 대학교 암생물학과의 Christopher Williams 박사 연구실에서 대장염을 연구하는 데 사용됩니다. 실험 과정 전반에 걸쳐 기초 체중을 측정합니다. 생쥐의 체중을 매일 측정한 후, 물에 덱스트란 황산나트륨(DSS) 염을 3% w/v 농도로 용해하여 DSS 용액을 만듭니다.이 모델이 효과적이려면 DSS는 저분자량이어야 합니다. 각 마우스 케이지의 급수병을 채울 수 있을 만큼 충분한 양의 DSS 용액을 조제하고, 0.45 micrometer 셀룰로오스 아세테이트 필터로 용액을 여과하십시오. 마우스 케이지의 식수병을 3% DSS 용액이 담긴 병으로 교체하십시오. 기관에서 자동 급수 시스템을 사용하는 경우, 마우스가 다른 수원에 접근할 수 없도록 급수구에 차단 팁을 장착하십시오.4일 후, 대장염의 전신적 영향을 정량화하기 위해 마우스의 체중을 다시 측정합니다. 심각한 손상이 있을 때 체중 감소가 흔히 나타나지만, 동일한 날에 몇 일 더 지나야 뚜렷해질 수도 있습니다. 4일 차에 DSS 용액을 물로 교체하여 3일 더 유지함으로써 결장 상피 세포가 일부 회복될 수 있도록 합니다.3일 후인 7일 차에 마우스의 체중을 다시 측정합니다. 그 후 다음 섹션에 설명된 대로 안락사시킨 마우스에서 결장을 적출할 수 있습니다. 결장을 적출하려면 안락사시킨 마우스의 복부 쪽을 노출시켜 복부에 방해 없이 접근할 수 있도록 합니다.복부를 70% ethanol로 완전히 적십니다. 조직 포셉으로 복부 중앙선을 잡고 들어 올립니다. 이렇게 하여 미세 팁 가위를 이용해 피부를 텐트 모양으로 띄웁니다.복부를 절개하여 복강 내 장기를 노출합니다. 절개선을 중앙선 상의 검상돌기 끝까지 확장한 다음, 양측 늑골 가장자리의 하단을 따라 확장합니다. 소장, 맹장 및 결장을 확인합니다.주변 장간막으로부터 결장을 조심스럽게 박리하거나 떼어냅니다. 그 후, 골반 깊은 곳까지 결장을 횡단하여 직장으로부터 원위부 결장을 분리합니다.동맥이나 정맥이 절단되지 않도록 주의해야 합니다. 또한, 결장은 쉽게 찢어질 수 있으므로 주의하시기 바랍니다. 따라서 장간막에서 결장을 조심스럽게 분리하십시오.근위 결장을 분리하기 위해 Colona sequel 경계 부위에서 결장을 절단합니다. 결장을 제거한 후, 20 gauge 피딩 바늘과 10 milliliter 시린지를 사용하여 삽관하고, EIT에서 대변이 완전히 제거될 때까지 얼음처럼 차가운 PBS로 결장을 세척합니다. 결장의 원위부 끝이 본인과 가장 가까이 있도록 유지하여 결장의 올바른 방향을 유지하는 것이 중요합니다.디지털 캘리퍼를 사용하여 결장 길이를 측정하는 것으로 시작하십시오. 결장 길이는 손상 정도를 나타내는 또 다른 지표입니다. 결장염은 부종을 증가시키고 전체적인 결장 길이를 단축시킵니다.이 단계에서 수확한 결장은 육안 분석을 위해 소시지 형태로 처리하거나, 급성 결장염의 조직학적 분석을 위해 스위스 롤(Swiss roll) 형태로 제작할 수 있습니다. 다음 섹션에서는 결장을 소시지 형태로 처리하는 기술을 시연하겠습니다. 결장 전체의 육안 분석을 위해서는 결장의 올바른 방향을 유지하는 것이 중요합니다. 따라서 결장의 원위단을 사용자에게 가장 가까운 쪽에 두십시오.비흡수성 봉합사를 두 조각 자르는데, 하나는 약 1인치 길이로 하고 다른 하나는 2인치 길이로 합니다. 2인치 길이의 봉합사를 사용하여, 밀봉 상태를 잘 유지하면서 결장 원위단(distal end)을 절단면과 최대한 가깝게 묶습니다. 그런 다음 10% 완충 포르말린 인산염 5mL가 들어 있는 20게이지 피딩 바늘을 결장 근위단(proximal end)에 삽입합니다.공급 바늘의 벌브 바로 근위측에 남은 봉합사를 느슨하게 묶습니다. 이제 공급 바늘의 벌브 부분에서 결장을 단단히 잡고, 결장이 확장되도록 충분한 양의 포르말린을 주입합니다. 공급 바늘을 뽑으면서 봉합사의 매듭을 조여, 주입된 포르말린으로 확장된 결장 상태를 유지합니다.소시지와 같은 형태로 15 milliliter 원추형 튜브에 10% 완충 포르말린 인산염 용액을 채우고 튜브에 라벨을 붙입니다. 결장을 튜브에 넣고 24시간 동안 고정합니다. 24시간 후, 포르말린을 적절한 폐기물 용기에 버리고 70% ethanol로 교체하여 추가로 24시간 동안 보관합니다.결장은 실온의 70% ethanol에 무기한 보관할 수 있습니다. 결장을 분석할 준비가 되면 원뿔형 튜브에서 꺼내십시오. 메스를 사용하여 결장이 손상되지 않도록 주의하며 양 끝의 실을 자릅니다.원위단에 가장 긴 실이 연결되어 있음을 기억하십시오. 결장을 원위단에서 근위단 방향으로 세로로 절개하여 긴 시트 형태로 만듭니다. 이제 해부 현미경으로 결장을 관찰할 수 있습니다.결장을 세로로 절개하여 평평한 시트 형태로 펼칩니다. 결장을 말기 위해서는 두 쌍의 포셉과 양손 기술이 필요합니다. 포셉으로 원위부 결장 가장자리의 양측 외측단을 잡고, 포셉을 회전시키고 푸는 과정을 반복하며 근위부 가장자리 방향으로 순차적으로 말아줍니다. 이렇게 하면 3차원 나선형 구조인 스위스 롤(Swiss roll)이 형성됩니다.결장이 watman 종이에 달라붙은 경우, 형태를 유지하기 위해 소량의 PBS로 종이와 결장을 적십니다. 핀셋으로 롤을 단단히 잡고 27.5 gauge 바늘로 가로 절단합니다. 바늘이 롤을 빠져나갈 때 바늘을 구부려 롤을 고정합니다.이제 롤을 라벨이 부착된 조직 카세트에 넣고, 카세트를 10% buffered formalin phosphate가 담긴 병에 넣습니다. 조직을 고정하기 위해 실온에서 24시간 동안 둡니다. 24시간 후, 포르말린을 따라내고 70% ethanol로 교체하여 4시간 동안 더 둡니다.대장은 70% ethanol에 담가 상온에서 무기한 보관할 수 있습니다. 이 모델을 통해 연구자는 대장을 적출, 고정 및 분석하여 대장염의 심각도를 분석할 수 있습니다. 전체 대장의 육안 분석을 위해, 대장을 포르말린으로 충전하여 완전히 확장시킨 소시지 형태로 처리할 수 있습니다.개방된 소시지는 평평하게 놓여 있어야 합니다. 소시지법이 올바르게 수행되었다면, 고정된 결장은 확장되어 있으며 전체 점막 표면을 해부 현미경 하에서 쉽게 조작하고 관찰할 수 있습니다. 조직학적 분석을 위해 결장은 스위스 롤(Swiss roll) 방식으로 처리할 수 있습니다.롤을 바늘로 고정하여 고정을 위해 조직 카세트에 넣습니다. 롤을 제대로 말았다면, 절단하여 마운팅했을 때 전체 결장의 대표적인 단면이 형성되어야 하며, 스위스 롤(Swiss roll)의 섹션을 헤마틴(hematin)과 ASIN으로 염색하여 결장 손상의 정도를 결정할 수 있습니다. 슬라이드 상의 롤 중심부에 결장의 원위단(distal end)이 위치한다는 점을 유의하십시오.이 예시에서는 물을 처리한 대조군과 비교하여 DSS 처리된 결장에서 염증과 은와 손상이 뚜렷하게 나타납니다. 지금까지 급성 결장염 마우스 모델에서 결장을 채취하고 처리하는 방법을 보여드렸습니다. 이 절차를 수행할 때는 희생 전 준비를 철저히 하는 것이 중요합니다.예를 들어, 생쥐 실험의 경우 각 생쥐별로 모든 튜브와 카세트에 라벨을 부착하고, 모든 도구와 시약을 즉시 사용할 수 있도록 준비합니다. 또한, 생쥐의 체중과 결장 길이에 대한 상세한 기록을 유지하십시오. 마지막으로, 처리 과정에 충분한 시간을 할당했는지 확인하십시오.초보자의 경우 마리당 보통 15분이 소요되며, 이 기술에 숙련된 사람의 경우 6분에서 8분 정도 소요됩니다.

murine-colitis-modeling-using-dextran-sulfate-sodium-dss

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

염증성 장 질환의 실험적 모델은 우리가 pathogenesis와 관련된 복잡한 본래과 적응 면역 반응을 조사 수 있습니다. histological 채점, 프로 - 염증 크린 시토킨 및 myeloperoxidase 활동 부량 사용하여, 하나는 염증성 장 질환에서 볼 이러한 반응을 평가하기 시작할 수 있습니다.

IBD의 DSS 유발 모델에서 창자 염증을 조사

우리는 빠르게 친 염증성 에이전트 dextran 황산 나트륨 (DSS)의 세주기에 의해 다음과 일관되게 인간의 대장염에서 본 것과 morphologic와 분자 유사성과 마우스에 결장 종양을 생성 genotoxic 에이전트 azoxymethane (AOM)의 어느 관리의 프로토콜을 보여줍니다 암을 관련.

Azoxymethane (AOM)과 Dextran의 황산 나트륨 (DSS)와 모델링 대장염 - 관련 암

이 비디오는 염증성 장 질환인 대장염의 화학적 유도 쥐 모델을 생성하는 기술을 보여줍니다. 마우스는 적절한 기간 동안 덱스트란 황산나트륨(DSS) 용액을 섭취할 수 있습니다. DSS를 섭취하면 결장의 점액과 상피층 장벽이 손상되어 장내 미생물이 기저 조직으로 들어가 상주 면역 세포가 이를 감지하여 과장된 면역 반응을 매개하여 염증을 유발합니다.

덱스트란 황산염 나트륨 유발 대장염의 쥐 모델을 생성하는 기술

이 비디오는 염증성 장 질환인 DSS 유발 대장염의 쥐 모델에서 결장 손상을 평가하기 위한 헤마톡실린 및 에오신(H&amp;E) 염색 방법을 보여줍니다. DSS를 투여한 쥐에서 결장을 분리하고 조직 절편을 채취한 후, 해당 절편의 H&amp;E 염색은 염증에 의한 조직 손상을 확인하는 데 도움이 됩니다.

DSS 유발 대장염에서 결장 손상을 평가하기 위한 Hematoxylin 및 Eosin 염색

DNBS / TNBS 유도 대장염은 다른 염증성 장 질환의 한테 진찰 Pathobiology을 연구하는 저렴한 방법을 제공합니다. 이 문서에서 설명하는 프로토콜은 생쥐와 쥐 대장염을 유도하는 DNBS의 성공적인 응용 프로그램을 설명 하나는 철저하게 호스트 매개 장 반응을 연구 할 수 있습니다.

DNBS / TNBS 대장염 모델 : 염증성 장 질환에 대한 통찰력과식이 지방의 효과를 제공

Murine 원심 인공 인간의 전환 colitis, 지저분한 스트림에서 제외 콜론 세그먼트에서 주로 림프 colitis 위한 murine 모델을 제공 합니다.

Murine 원심 인공, C57BL/6 마우스에 전환 Colitis의 새로운 모델

Murine 조직 처리에 대 한 표준화의 부족 인간의 표본에 비해 murine histopathological 분석의 품질을 줄일 수 있습니다. 여기, 선물이 murine 염증 및 uninflamed 저 승 조직 처리 및 인간의 샘플을 포함에 대 한 정기적으로 사용 하는 로봇 시스템의 타당성을 보여의 histopathological 검사를 수행 하는 프로토콜.

로봇 시스템을 사용 하 여 처리 하 고 저 승 Murine 샘플 조직학 분석 포함

제시된 프로토콜은 염증성 장 질환 관련 대장암의 유도에 이어 마우스에서 부록(caecal patch)의 막강 외과적 제거를 기술한다. 이 뮤린 충수 절제술 모델은 인간 위장 병기의 병인에서 부록의 생물학적 역할을 조사 할 수 있습니다.

만성 대장염 관련 대장암의 뮤린 충수 절제술 모델은 Caecal 패치의 정확한 국소화에 의해

무료 컴퓨터 보조 시스템을 사용하여 장 염증의 체계적인 점수는 궤양과 염증 변화의 존재를 특징으로 하는 대장염 모델의 조직 병리학적 변화를 정량적으로 비교할 수 있는 강력한 도구입니다. 조직학 대장염 점수 평가는 임상 관찰을 강화하고 데이터 해석을 용이하게합니다.

뮤린 Dextran 나트륨 황산염 유도 대장염 모형에 있는 장 염증을 위한 체계적인 채점 분석

찰스 테일러와 존 마샬이 인구 대체 전략의 효과를 평가하기위한 수학적 모델링의 유틸리티를 설명합니다. 통계는 계산 모델은 모기의 인구 역학과 A. gambiae subspecies을 통해 transposable 요소의 확산에 대한 정보를 제공할 수있는 방법으로 제공됩니다. 야생으로 유전자 변형 모기를 발표의 윤리적 고려 사항을 설명합니다.

수학 모델링을 사용 인구 교체 전략의 효과를 예측

배우세요 생쥐에서 덱스트란 황산 나트륨(DSS)을 이용한 급성 대장염 유도 방법과 조직 채취 및 처리 절차. 이 프로토콜은 염증성 장 질환 연구에 재현성 있는 실험 결과를 제공합니다.

Dextran의 황산 나트륨 (DSS)를 사용 Murine 대장염 모델링

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