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단일장 줄기세포에서 오가노이드 배양
JoVE 신문
생물학
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JoVE 신문 생물학
Organoid Culture from a Single Intestinal Stem Cell

단일장 줄기세포에서 오가노이드 배양

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02:05 min

June 02, 2023

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June 02, 2023

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단일 에리스로포이에틴 생성 간세포 수용체 B2 또는 FEB2 양성 장 줄기 세포에서 오가노이드를 생성하기 위해 FEB2 발현을 기반으로 형광 활성화 세포 분류를 수행하고 얻은 세포를 높음, 중간, 낮음 및 음성의 4개 그룹으로 나눕니다. 섭씨 4도에서 3분 동안 390G에서 원심분리하여 FEB2 고세포 펠릿을 수집한 후, 피펫팅에 의해 ECM에 단일 분류된 FEB2 고세포를 임베드한 다음, 웰당 ECM 40마이크로리터당 100개의 싱글렛으로 24웰 플레이트에 세포를 시딩합니다. ECM의 중합을 위해 섭씨 37도 및 5% 이산화탄소에서 15분 동안 24웰 플레이트를 배양합니다.

다음에, 처음 이틀 동안 10 마이크로몰 행 관련 키나아제 또는 락 억제제를 함유하는 500 마이크로리터의 배양 배지로 ECM을 덮어 FEB2 높은 세포를 유지한다. 40X 배율의 도립 현미경을 사용하여 세포를 수동으로 검사하고 스페로이드 형성 및 선와돌출이 있는 생존 가능한 오가노이드를 관찰합니다. 정상적인 소장을 연상시키는 자기 조직화 크립트 빌라 구조는 단일 FEB2 높은 세포에서 재현되었습니다.

배양 5일째에는 구형과 같은 구조가 형성되었고, 7일째부터 9일째에는 지하실을 형성하기 위한 반점의 대피가 발생했습니다.

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