항체 마이크로어레이: miRNA 처리된 폐암 세포의 단백질 발현을 연구하는 기술

- 단백질 샘플에 비오틴 용액과 라벨링 버퍼를 추가하는 것으로 시작합니다. 단백질에 비오틴이 쉽게 부착될 수 있도록 배양합니다. 정지 시약과 와류를 추가합니다. 다음으로, 항체의 비특이적 결합을 방지하기 위해 차단 시약이 들어 있는 접시에 항체 마이크로어레이 슬라이드를 놓습니다. 이중 증류수로 슬라이드를 세척하여 차단 용액을 제거하십시오. 마이크로어레이 슬라이드를 챔버에 놓습니다. 비오틴화된 단백질 샘플을 커플링 용액과 혼합하고 슬라이드에 첨가하여 표적 단백질이 해당 항체에 쉽게 결합할 수 있도록 합니다. 세척 버퍼가 들어 있는 접시에 슬라이드를 옮기고 버퍼를 이중 증류수로 교체하십시오. 다음으로, 형광 표지된 스트렙타비딘(streptavidin)이 포함된 검출 버퍼에 슬라이드를 넣어 비오틴화된 단백질에 대한 결합을 촉진합니다.

형광 강도를 유지하기 위해 어두운 곳에서 접시를 배양하십시오. 슬라이드를 제거하고 마이크로어레이 스캐너에 넣습니다. 스캐너는 표적 단백질에 결합된 스트렙타비딘에서 형광 신호를 찾습니다. 형광 강도를 기반으로 소프트웨어는 단백질 발현 정도를 분석합니다. 다음 프로토콜에서는 세포주기와 관련된 유전자 발현의 변화를 분석하기 위한 항체 마이크로어레이를 수행합니다.

- 본 실험은 microRNA 처리에 의한 모든 세포주기 경로 단백질의 발현 변화를 규명하기 위한 것입니다. transfection 섹션에 설명된 절차에 따라 단백질 샘플을 수집하고 BCA 분석으로 정량화합니다. 실험하기 1시간 전에 섭씨 영하 4도의 슬라이드를 제거하여 실온으로 가져오고 수분을 제거합니다. 70마이크로그램의 단백질 샘플을 채취하여 제조업체의 지침에 따라 샘플 슬라이드를 준비하며, 이는 텍스트 섹션에도 단계별로 설명되어 있습니다.

여기서 주목할 점은 초순수 탈이온수로 슬라이드를 적절하게 세척하는 것은 슬라이드의 배경을 줄이는 데 도움이 되기 때문에 또 다른 중요한 단계입니다. 또한 이 실험에서는 마지막 단계까지 샘플 슬라이드를 건조시키지 않는 것이 매우 중요합니다. 마지막으로 마이크로어레이 기계를 사용하여 슬라이드를 스캔하고 데이터를 분석합니다.