Leukemic Subpopulation Harvest: 2D 공동 배양에서 백혈병 세포 하위 집단의 공간적 분리 방법

- 백혈병 세포가 중간엽 기질 세포와 공동 배양되면 기질 세포와 상호 작용하여 3개의 하위 집단을 형성합니다. 자유롭게 떠다니는 부유 세포, 중간엽 단층의 표면에 부착된 위상 밝은 세포, 중간엽 단층 아래의 위상 희미한 세포. 각 하위 모집단을 분리하려면 중간엽 기질 세포 단층이 있는 조직 배양 플레이트를 취합니다.

종양 특이적 배양 배지에 존재하는 백혈병 세포를 단층에 파종하고 원하는 기간 동안 플레이트를 배양합니다. 다음으로, 자유롭게 떠다니는 세포를 별도의 튜브에 피펫팅하여 현탁액의 종양 세포를 수집합니다. 이제 플레이트에 새로운 배지를 추가하고 격렬하게 피펫을 사용하여 중간엽 단층 표면에서 위상 밝은 종양 세포를 제거합니다.

이러한 세포를 별도의 튜브에 피펫팅하여 수집합니다. 부착된 중간엽 세포를 제거하기 위해 플레이트에 트립신을 추가합니다. 소 태아 혈청(FBS)을 첨가하여 트립신의 작용을 멈추고 세포 응집체를 분해합니다. 이제 튜브에 위상 dim 셀을 수집합니다. 서로 다른 세포 subpopulation을 포함하는 3개의 튜브를 모두 개별적으로 원심분리하고 추가 분석을 위해 펠릿을 새로운 배지에 재현탁합니다. 다음 프로토콜에서는 현탁액, 위상 밝기 및 위상 밝기 백혈병 세포를 2D 공동 배양에서 분리합니다.

- 부유 종양 하위 집단을 수확하려면 백혈병 세포 공동 배양 플레이트에서 배지를 흡인하고 동일한 배지를 사용하여 플레이트를 한 번 부드럽게 헹굽니다. 그런 다음 부동 현탁 백혈병 세포 하위 집단을 15ml 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 위상 밝기 종양 하위 집단을 수확하려면 10ml의 새로운 배지를 공동 배양 플레이트에 다시 추가합니다.

그리고 약 5회 정도 세게 헹구어 부착 세포 단층을 제거하지 않고 부착 백혈병 세포를 제거합니다. 그런 다음 위상 밝기 하위 모집단을 자체 15ml 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 위상 딤 종양 하위 집단을 수확하려면 1mL PBS 헹굼으로 나머지 배지를 제거하고 섭씨 37도에서 3mL의 트립신으로 세포를 분리합니다.

5분 후 플레이트의 측면을 부드럽게 두드려 부착 세포를 제거한 다음 FBS 1ml를 첨가하여 효소 반응을 멈춥니다. 그런 다음 혈청을 3-5회 헹구어 큰 세포 응집체를 분해하고 정제되지 않은 위상 dim 하위 집단을 새로운 15ml 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 모든 하위 집단이 수집되면 세포를 스핀다운하고 각 펠릿을 1ml의 예열된 배지에 재현탁합니다.

• Leukemic cells - Abnormal cells that overwhelms healthy blood cells and control their function.
• Mesenchymal Stromal Cells - Multipotent cells that support cell growth.
• Subpopulation - Portion of a population distinguished by characteristic behaviors.
• Fetal Bovine Serum (FBS) - Common supplement used in cell culture.
• Trypsin - Enzyme used to break down proteins and detach cells in culture.

• Introduce Leukemic cells to Mesenchymal Stromal Cells - Illustrate the interaction (e.g., Co-culture).
• Outline Cell Subpopulations - Explain different cell types in the co-culture (e.g., Suspended, Adherent).
• Explain Cell Separation Techniques - Brief on the use of medium, trypsin, pipetting (e.g., Co-culture experiment).

• What is co-culture and how do leukemic cells interact with mesenchymal stromal cells?
• What are the subpopulations of cells in a co-culture?
• How are different cell subpopulations separated in a co-culture?

• Describe Practical Application - Co-culture experiments in studying cancer (e.g., Leukemia research).
• Industry Impact - Advances in healthcare and drug development (e.g., Cancer treatments).
• Societal Importance - Role in disease understanding and prevention (e.g., Health awareness).
• Link to Scientific Advancement - Contribution towards biomedical sciences.