순환 miRNA 추출: 유기 추출 및 Small RNA 농축을 통해 혈장 샘플에서 miRNA를 분리하는 방법

- MicroRNA 또는 miRNA는 mRNA를 분해하거나 mRNA가 기능적 단백질로 번역되는 것을 차단하여 유전자 발현을 조절하는 작은 비암호화 RNA입니다. 순환하는 miRNA는 잠재적인 암 바이오마커이며 혈장과 같은 체액에서 추출할 수 있습니다. 먼저 혈장을 시료를 균질화하는 동시에 RNA 분해 리보뉴클레아제를 억제하는 변성 용액과 혼합합니다.

산성 페놀-클로로포름과 원심분리기로 처리하여 샘플을 DNA와 단백질을 포함하는 낮은 유기상과 RNA를 포함하는 상부 수성상의 두 단계로 분리합니다. 수성 상을 회수합니다. 용액에서 RNA를 침전시키기 위해 절대 에탄올을 첨가합니다.

샘플 에탄올 농도를 25%로 끌어올려 대규모 RNA 분리에 도움이 되는 초기 조건을 설정합니다. 혼합물을 사전 조립된 필터 카트리지와 원심분리기로 옮깁니다. 큰 RNA는 필터에서 선택적으로 고정되는 반면 작은 miRNA는 여과액에 모입니다.

그런 다음 에탄올 농도를 55%로 증가시켜 miRNA 분리를 선호합니다. 여과액을 새 필터 카트리지와 원심분리기로 옮겨 miRNA를 트랩합니다. 카트리지를 수집 튜브에 놓고 적절한 용리 완충액을 추가합니다. miRNA를 튜브로 용리시키기 위한 원심분리기. 다음 프로토콜에서는 대장암 환자의 혈장에서 순환하는 miRNA 분리를 보여줍니다.

시작하려면 400마이크로리터의 혈장 샘플을 RNase가 없는 2밀리리터 튜브로 옮깁니다. 그런 다음 튜브에 400마이크로리터의 변성 용액을 추가합니다. 4마이크로리터의 1나노몰 스파이크인을 추가합니다.

용액을 혼합 한 후 800 마이크로 리터의 산 페놀 클로로포름을 첨가하십시오. 용액을 60초 동안 소용돌이치고 15분 동안 최대 속도로 원심분리기를 합니다. 다음으로, 상부 수성상에 포함 된 용해물을 깨끗한 튜브로 옮기고 간기를 방해하지 않도록주의하십시오.

회수된 수성상의 부피를 측정하고 용해물에 1/3 부피의 에탄올을 첨가합니다. 그런 다음 필터 카트리지를 새 수집 튜브에 넣습니다. 최대 700마이크로리터의 에탄올 용해물 혼합물을 필터 카트리지로 옮깁니다. 필터 카트리지를 10,000 x g에서 30초 동안 원심분리합니다.

다음으로, 플로우 스루의 총 부피를 측정합니다. 그런 다음 여과액에 에탄올 부피의 2/3를 넣고 잘 섞습니다. 두 번째 필터 카트리지를 새 수집 튜브에 넣습니다. 그런 다음 최대 700마이크로리터의 샘플을 카트리지로 옮기고 10,000 x g에서 30초 동안 원심분리한 후 관류를 폐기합니다.

700마이크로리터의 microRNA 세척 용액을 필터 카트리지에 추가하고 10,000 x g의 수집 튜브로 15초 동안 원심분리합니다. 플로우 스루를 버리고 필터 카트리지를 동일한 튜브에 다시 넣습니다.

그런 다음 필터 카트리지를 새 수집 튜브로 이동합니다. 그런 다음 100마이크로리터의 예열된 용출 용액을 카트리지에 추가합니다. 필터 카트리지를 10,000 x g에서 30초 동안 원심분리하여 microRNA를 회수합니다.

• MicroRNAs - Small non-coding RNAs that regulate gene expression.
• Circulating miRNAs - miRNAs in body fluids used as possible cancer biomarkers.
• Denaturing Solution - Homogenizes the sample and inhibits RNA-degrading ribonucleases.
• Acid phenol-chloroform - Used to separate the sample into distinct phases.
• Elution Buffer - A solution added to elute miRNAs into a collection tube.

• Introduce MicroRNAs - Small molecules regulating gene expression (e.g., mirna).
• Key Concepts – Summarize the roles and potential of miRNAs in cancer research (e.g., mirna plasma kit).
• Underlying Mechanisms – miRNAs are isolated using specific procedures (e.g., mirvana isolation kit).
• Connect to Experiment – The study utilizes miRNA isolation from plasma samples.

• What are MicroRNAs and how to extract them (using mirna extraction kits)?
• How does the process of miRNA isolation work (using mirvana paris kit)?
• What is the role of circulating miRNAs in cancer research?

• Practical Applications – miRNAs in diagnostics, research, and treatment (e.g., micro rna isolation).
• Industry Impact – Impacting biotech, healthcare sectors (e.g., s1122-1830).
• Societal Importance – Potential benefits in early disease detection (e.g., miRNA isolation protocol).
• Link to Scientific Advancements – Emergence of advanced extraction kits (e.g., mirna plasma extraction kit).