생세포 형광현미경을 이용한 박테리아의 형태학적 변화 영상

유리 바닥 접시에 아가로스 슬래브 아래에 고정된 박테리아 배양부터 시작하세요.

박테리아 세포막은 형광 염료로 표지되어 있습니다.

또한 박테리아는 특정 mRNA를 표적으로 하는 안티센스 RNA를 발현하도록 설계되어 필수 세포 분열 단백질의 생성을 억제합니다.

역형 형광 현미경의 대물에 침수유 한 방울을 넣으세요.

접시를 금속 하우징에 넣고 현미경 스테이지에 고정하세요.

오일이 접시에 닿을 때까지 대물렌즈를 들어 올린 다음, 셀에 집중하세요.

이미지 소프트웨어를 사용해 여러 깊이에서 이미지를 캡처할 수 있도록 Z-스택을 설정하세요.

형광 타임랩스 이미지 수집을 시작하세요.

세포가 안티센스 RNA 발현에 반응하면서 분열하지 못하고 부풀어 오른 형태가 나타납니다.

막 조직이 깨지면서 불균일하고 초점 형광이 나타나 세포 분열이 결함이 있음을 나타냅니다.

샘플을 영상화하려면 거칠게 조절하는 초점 노브를 사용해 대물렌즈가 완전히 내려간 후 현미경 소프트웨어 내에서 현미경을 초기화합니다. 100X 오일 침수 대물에 굴절률 1.517 오일을 떨어뜨리고, 샘플이 담긴 유리 바닥 접시를 금속 하우징 관으로 옮깁니다.

접시를 무대 클램프에 부드럽게 밀어 넣고, 거친 조절 노브로 대물렌즈를 들어 올려 오일이 접시 유리 바닥에 닿도록 하세요. 아이피스와 미세 조절 노브를 사용해 샘플을 초점 맞추고 카메라 모드로 전환하세요. Resolve 3D 창의 영상 소프트웨어에서 설계/실험 실행 아이콘을 선택하세요.

'설계/실험 실행'이라는 새로운 대화 상자가 나타납니다. 대화상자에서 디자인 및 섹션 탭을 열어 Z 스택 수와 샘플 두께를 설정하세요. 샘플 내 셀의 두께를 측정하려면 Resolve 3D 대화상자의 위아래 화살표를 사용해 Z-평면을 점진적으로 조정하여 셀이 초점이 흐려지는 지점을 이미지 획득의 상한선과 하한선으로 설정합니다.

Resolve 3D 대화상자에서 선택한 채널별로 빛 세기의 퍼센트 투과율과 노출 시간을 조정한 후, 포인트 리스트를 클릭하여 포인트 리스트를 엽니다. 디자인 탭과 타임랩스 탭에서 타임랩스 체크박스를 선택하고 타임랩스 매개변수를 입력하세요. 방문 지점 목록 옵션을 선택한 후, 텍스트 박스에 이미지를 지정할 지점을 입력하며, 완전한 시퀀스를 위해 쉼표나 하이픈으로 구분하세요.

그 다음 실행 탭에서 파일 이름과 파일 위치를 편집하고, 실험 시작 대화상자에서 재생을 선택하여 실험을 시작하세요.