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치쿤구니야 바이러스 유사 입자(VLP)는 지질 이중층 내에 내장된 바이러스 외피 단백질로 구성되고 유전 물질이 없는 비감염성 구조입니다.
치쿤구니야 VLP를 생산하려면 치쿤구니야 구조 유전자 카세트를 발현하는 재조합 바큘로바이러스로 Spodoptera frugiperda Sf9 곤충 세포를 감염시킵니다. 카세트는 캡시드를 암호화하는 치쿤구니야 구조 유전자 및 외피 단백질과 융합된 바큘로바이러스 프로모터로 구성됩니다.
배양하는 동안 바큘로바이러스 외피 당단백질은 곤충 세포의 표면 수용체에 결합합니다. 이는 바큘로바이러스의 세포질 진입 및 바이러스 DNA의 방출을 촉진하여 치쿤구니야 캡시드와 외피 단백질을 포함하는 다단백질을 생성합니다.
합성 후, 캡시드 단백질의 자가촉매 절단은 소포체, ER에서 외피 단백질을 소유하는 전구체 다단백질을 생성합니다. ER 내강에서 효소는 전구체 다단백질을 절단하여 추가 처리를 위해 골지 구획으로 들어가 단백질 헤테로삼량체를 형성하는 개별 단백질을 생성합니다.
골지체 상주 프로테아제는 단백질 헤테로삼량체를 절단하여 E2 및 E1 단백질로 성숙한 외피 단백질을 생성합니다. 이러한 외피 단백질은 막으로 이동하여 VLP로 발아하고 배지로 방출됩니다.
감염된 배양물을 튜브로 옮기고 원심분리하여 곤충 세포를 펠릿화합니다. VLP 함유 상청액을 흡인하고 여과하여 파편을 제거합니다.
치쿤구니야 VLP를 포함하는 생성된 여과액은 면역병리학 연구에 사용할 준비가 되었습니다.
이전에 준비된 Spodoptera frugiperda 또는 Sf9 세포를 다지점 교반 플레이트 시스템에서 130rpm으로 지속적으로 교반하여 스피너 플라스크에 현탁액으로 배양합니다. 적절한 폭기를 위해 배양량을 스피너 플라스크 부피의 절반 이하로 유지하십시오. 다음으로, 스피너 플라스크에서 250밀리리터의 Sf9 세포를 밀리리터당 2 x 10 6 세포의 밀도로 미리 준비된 재조합 바큘로바이러스로 감염시켜 CHIK VLP를 발현하고 세포를 섭씨 28도 인큐베이터로 되돌립니다.
트리판 블루 배제를 사용하여 세포 생존율이 70% 내지 80%로 감소했는지 확인합니다. 확인되면 배양액을 현탁액에서 50밀리리터 원뿔형 튜브로 직접 옮기고 세포를 아래로 회전시킵니다. 상청액을 수집하고 침전하기 전에 0.22미크론 기공막을 통해 여과합니다.
