전혈을 이용한 신속한 호중구 화학요법 분석을 위한 미세유체 칩 기반 방법

전혈 샘플에 호중구를 제외한 혈액 세포에 대한 특정 항체 복합체를 추가합니다.

항체 복합체 결합 혈액 세포에 결합하는 자성 입자를 추가합니다.

면역자기 태그가 부착된 샘플을 미세유체 칩의 세포 로딩 포트로 옮깁니다.

셀 로딩 포트에 자기 디스크를 연결합니다.

자기장은 면역자기 태그가 붙은 세포를 끌어당겨 포트의 측벽에 가둡니다.

태그가 없는 호중구는 칩으로 흘러 들어가 세포 도킹 영역에 갇히게 됩니다.

형광 표지된 화학유인 용액과 이동 배지를 지정된 저장소에 추가합니다. 액체는 미세유체 채널을 통해 흐르며 농도 구배를 형성합니다.

화학유인제가 호중구 수용체에 결합하면 세포내 변화를 유발하여 호중구가 세포골격을 재구성하고 가족류를 확장하게 됩니다.

이 유사족류는 발 역할을 하여 호중구를 더 높은 화학유인 농도로 추진하는데, 이를 화학주성이라고 합니다.

적절한 현미경 기술을 사용하여 화학유인 구배에 대한 반응으로 호중구 이동을 모니터링합니다.

장치에서 탈이온수를 제거하고 배출구에서 100마이크로리터의 피브로넥틴 용액을 추가합니다. 모든 채널이 피브로넥틴 용액으로 채워졌는지 확인하기 위해 3분 정도 기다리십시오. 그런 다음 덮개를 덮은 페트리 접시에 장치를 실온에서 한 시간 동안 배양합니다.

그런 다음 장치에서 피브로넥틴 용액을 제거하고 배출구에서 100마이크로리터의 이동 배지를 추가합니다. 다시 3분 정도 기다렸다가 모든 채널이 마이그레이션 매체로 채워졌는지 확인합니다. 화학주성 실험에서 장치를 사용하기 전에 실온에서 한 시간 더 장치를 배양합니다. 10마이크로리터의 전혈을 1.5밀리리터 튜브에 넣습니다. 그런 다음 호중구 분리 키트에서 2마이크로리터의 자성 입자에 2마이크로리터의 항체 칵테일을 첨가하고 항체 태그가 지정된 세포를 자기적으로 라벨링하기 위해 튜브를 부드럽게 혼합합니다. 라벨 혼합물을 실온에서 5분 동안 배양합니다.

그런 다음 장치의 셀 로딩 포트 양쪽에 두 개의 작은 자기 디스크를 부착합니다. 장치의 모든 포트에서 매체를 흡인합니다. 그런 다음 라벨링된 혈액 혼합물 2마이크로리터를 세포 로딩 포트에서 미세유체 장치로 천천히 피펫팅합니다. 미세유체 장치를 섭씨 37도의 온도 제어 현미경 스테이지에 놓습니다. 충분한 호중구가 세포 도킹 영역에 갇힐 때까지 몇 분 정도 기다리십시오.

다음으로, 두 개의 피펫터를 사용하여 100마이크로리터 이동 배지에 100마이크로리터의 화학유인 용액을 지정된 입구 저장소에 추가합니다. 이것은 연속 층류 기반 화학 혼합에 의해 화학 유인 구배를 생성합니다. 화학유인제는 FMLP와 같은 재조합 단백질일 수도 있고, COPD 환자의 가래 상청액과 같은 임상 샘플일 수도 있습니다.

흐름이 안정화되면 채널에서 FITC 덱스트란 구배의 형광 이미지를 획득합니다. 그런 다음 온도 제어 현미경 스테이지 또는 기존 세포 배양 인큐베이터에서 15분 동안 장치를 배양합니다. 배양 후, 데이터 분석을 위해 세포의 최종 위치를 기록하기 위해 10배 대물렌즈를 사용하여 그래디언트 채널을 이미지