편광 신경 조직의 엔지니어링된 실크-콜라겐 기반 3D 모델 개발

도넛 모양의 폴리-D-라이신 코팅된 다공성 실크 스캐폴드를 멀티웰 플레이트에 놓습니다.

배양 배지를 첨가하여 스캐폴드에 수화를 공급하여 세포 부착을 촉진합니다.

과도한 매체를 흡인합니다. 스캐폴드에 신경 세포 현탁액을 시드하고 배양합니다.

코팅된 표면과 스캐폴드 기공은 고밀도 세포 부착을 위한 넓은 표면적을 제공하고 효율적인 영양분 및 폐기물 확산을 촉진합니다.

부착되지 않은 세포를 제거하고 세포외 기질 단백질인 콜라겐을 첨가합니다.

콜라겐 중합을 위해 배양합니다. 이 과정은 다공성 스캐폴드의 젤 모양의 3D 매트릭스 내에 세포를 삽입합니다.

미디어 추가. 배양하고 정기적으로 배양 배지의 절반을 교체하여 세포를 방해하지 않고 영양분을 보충합니다.

배양 내에서 신경 세포체는 실크 스캐폴드에 고정된 상태로 유지되는 동안 축삭은 콜라겐 기질을 통해 성장하여 3D 축삭 네트워크를 형성합니다.

이 구획화된 세포체와 축삭 국소화는 3D 뇌와 유사한 편광 신경 조직 모델을 형성합니다.

세포 배양 후드 내부에 한 쌍의 멸균된 겸자, 세포 배양 배지 및 고압멸균된 스캐폴드를 놓습니다. 포장에서 96웰 플레이트를 꺼내 내부에 넣습니다. 스캐폴드를 파종하려면 먼저 96웰 플레이트에 웰당 하나의 멸균 스캐폴드를 놓습니다. 세포 배양 배지를 첨가하여 스캐폴드를 담그고 조직 배양 인큐베이터에서 섭씨 37도에서 배양하여 최소 30분 동안 평형을 유지합니다.

배양 후, 스캐폴드에서 여분의 배지를 흡인합니다. 그런 다음 스캐폴드당 100마이크로리터의 신경기저 배지에 6개의 쥐 피질 신경 세포에 2 x 10을 첨가합니다. 플레이트를 인큐베이터로 되돌리고 세포가 스캐폴드에 부착될 수 있도록 밤새 그대로 둡니다. 다음날 아침, 부착되지 않은 세포를 조심스럽게 흡인하고 200마이크로리터의 신선한 세포 배양 배지로 교체합니다. 짧은 시간 동안 섭씨 37도에서 배양합니다.

다음으로 우물에서 매체를 흡인합니다. 멸균 겸자를 사용하여 세포가 포함된 스캐폴드를 96웰 플레이트의 빈 웰로 옮깁니다. 그런 다음 각 스캐폴드에 밀리리터당 100밀리그램의 새로 희석된 얼음처럼 차가운 3밀리그램의 쥐 꼬리 콜라겐 용액을 추가합니다.

세포를 섭씨 37도 인큐베이터로 되돌려 30분 동안 콜라겐이 중합되도록 합니다. 인큐베이터에서 플레이트를 제거하고 웰당 100마이크로리터의 예열된 세포 배양 배지를 추가합니다. 원하는 세포 성장 기간 동안 플레이트를 인큐베이터로 되돌리고 최대 1주일 동안 매일 각 웰의 배지의 절반을 신선한 배지로 교체합니다.