하이드로겔 기반 마이크로컬럼을 이용한 미세조직 공학 신경망 개발

마이크로 컬럼이 들어 있는 접시로 시작하십시오. 마이크로 컬럼에는 하이드로겔 외부 쉘과 세포외 기질 또는 ECM 코어가 있습니다.

같은 접시에 배양 배지 한 방울을 추가합니다.

신경 세포 응집체를 접시로 옮긴 다음 배지 물방울 중 하나에 넣습니다.

실체현미경으로 관찰하고 마이크로컬럼의 양쪽 끝에 세포응집체를 삽입합니다.

그런 다음 세포 생존력을 위해 시드된 마이크로 컬럼을 배지로 옮깁니다.

세포가 ECM에 부착될 수 있도록 배양합니다.

실체현미경을 사용하여 세포 부착을 확인합니다. 그런 다음 배양 배지를 추가하여 접시를 덮고 배양합니다.

부착된 뉴런은 ECM을 통해 축삭을 확장하기 시작합니다.

영양 수준을 유지하기 위해 정기적으로 반 배지를 신선한 배지로 교체하십시오.

시간이 지남에 따라 축삭은 성장하고 마이크로 컬럼의 전체 길이에 걸쳐 신경망을 형성합니다.

개발된 미세 조직 공학 신경망은 손상된 신경 회로를 재구성할 준비가 되어 있습니다.

배양 직후 세포 파종을 진행합니다. 약 10-20마이크로리터의 배양 배지를 마이크로 컬럼을 고정하는 페트리 접시의 두 개의 자유 영역으로 옮깁니다. 마이크로피펫을 사용하여 신경 응집체를 개별적으로 수집하고 구조물이 포함된 페트리 접시로 옮깁니다. 집게를 사용하여 응집체를 작은 배양 배지 풀 중 하나로 이동하여 세포 건강을 보존합니다.

실체현미경으로 관찰하는 동안 집게를 사용하여 단방향 마이크로 TENN의 경우 마이크로 컬럼의 한쪽 끝에, 양방향 아키텍처의 경우 양쪽 끝에 응집체를 삽입합니다. 그런 다음 시드된 마이크로 컬럼을 다른 작은 배양 배지 풀로 이동하여 탈수를 방지하고 골재 건강을 보존합니다. 모든 마이크로 컬럼이 로드되면 섭씨 37도 및 5% 이산화탄소에서 45분 동안 배양하여 응집체가 ECM에 부착되도록 합니다.

배양 후, 실체현미경을 사용하여 응집체가 마이크로 컬럼의 끝에 남아 있는지 확인합니다. 마지막으로, 피펫을 사용하여 micro-TENN이 포함된 페트리 접시에 배양 배지를 조심스럽게 넘깁니다. 장기 배양을 위해 접시를 섭씨 37도, 이산화탄소 5%의 인큐베이터에 넣습니다.