내피 세포에서 막 전위를 측정하는 것의 중요성은 무엇인가요?

막 전위를 측정하면 내피 세포의 기능 상태와 신호 전달 경로를 이해하는 데 도움이 됩니다.

칼슘에 민감한 염료는 어떻게 작동합니까?

염료는 칼슘 이온에 결합하고, 형광 강도는 칼슘 농도가 높을수록 증가하여 세포내 칼슘 수준의 정량화를 가능하게 합니다.

변경된 막 전위의 의미는 무엇인가요?

변경된 막 전위는 이온 채널 활성화나 신호 전달 경로 관여 등 세포 활동의 변화를 나타낼 수 있습니다.

이 방법을 다른 세포 유형에 적용할 수 있나요?

네, 이 방법론은 다른 세포 유형의 막 전위와 칼슘 신호전달을 연구하는 데 사용하도록 적용할 수 있습니다.

이 연구에서 약물 작용제는 어떤 역할을 하나요?

약물 작용제는 신호 전달 경로를 조작하고 칼슘 수준 및 막 전위에 미치는 영향을 평가하는 데 사용됩니다.

이 기술은 생체 세포 이미징에 적합한가요?

네, 이 기술은 생체 세포 이미징을 위해 설계되어 세포 역학을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

Calcium Dynamics and Membrane Potential Changes in a Mouse Arteriolar Endothelium(쥐 세동맥 내피의 칼슘 역학 및 막 전위 변화 분석)

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:38 min • April 28th, 2025

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마우스 뇌에서 채취한 세동맥 내피관을 연속 완충 흐름이 있는 챔버에 고정합니다.

챔버를 녹화 설정에 배치합니다.

칼슘에 민감한 형광 염료를 도입합니다. 세포가 염료를 흡수할 수 있도록 배양합니다.

내재화되지 않은 염료를 제거하기 위해 세척하십시오.

내피 세포에 전극을 삽입하고 휴식 막 전위를 기록합니다.

염료에 대한 세포내 칼슘 결합을 촉진하기 위해 수조 온도를 생리학적 온도로 올립니다.

염료를 여기시키고 형광을 측정하여 기본 세포 칼슘 수치를 정량화합니다.

내피 세포의 특정 G-단백질 결합 수용체에 결합하는 약물을 도입하여 신호 전달 캐스케이드를 시작합니다.

이 캐스케이드는 소포체에서 세포질로 칼슘 이온을 방출하여 칼슘-염료 결합 및 형광을 향상시킵니다.

세포

질 칼슘 수치가 상승하면 칼륨 채널도 활성화되어 칼륨 이온 유출을 촉진하고 막 전위를 감소시킵니다.

데이터를 기록합니다.

형

광 증가 및 막 전위 감소는 기능적인 내피관을 나타냅니다.

내피막 전위를 측정하려면 4배 대물렌즈를 통해 보면서 미세 조작기를 사용하여 동맥 내피관의 세포 바로 위에 날카로운 전극 끝을 흐르는 생리학적 염 용액에 조심스럽게 배치합니다. 점차적으로 배율을 400배로 높이고 필요에 따라 전극 팁의 위치를 변경합니다. 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 날카로운 전극의 끝을 내피관의 세포 중 하나에 부드럽게 삽입하고 전위계를 사용하여 VM 기록을 시작합니다.

내피 휴식 VM이 영하 30밀리볼트에서 영하 40밀리볼트까지 안정되면 실험 목표에 따라 원하는 약리학적 제제를 적용합니다. 원형질막 또는 원하는 소기관에 대한 형광 추적기를 내피 튜브에 섭씨 37도에서 15-30분 동안 로드합니다. 신선한 과융합 생리 염 용액으로 세포를 세척하고 현미경으로 각 염료의 여기 파장에서 살아있는 세포를 이미지화합니다.