뇌 조직 클리어링의 목적은 무엇입니까?

뇌 조직 클리어링은 투명도를 향상시켜 뉴런과 그 연결의 더 나은 시각화를 가능하게 합니다.

클리어링 과정에서는 어떤 용매가 사용됩니까?

이 과정에는 메탄올, 디클로로메탄, 디벤질 에테르가 클리어링 제로 사용됩니다.

클리어링 방법은 이미지 촬영을 어떻게 향상시킵니까?

색소와 지질을 제거함으로써 이 방법은 광 산란을 감소시켜 표지된 뉴런의 더 명확한 이미지를 생성합니다.

이 방법은 다른 유형의 조직에 적용할 수 있습니까?

이 방법은 뇌 조직에 초점을 맞추고 있지만 유사한 기술이 다른 생물학적 샘플에 적용될 수 있습니다.

클리어링 과정의 주요 단계는 무엇입니까?

주요 단계에는 메탄올로의 탈수, 디클로로메탄 처리, 그리고 디벤질 에테르로의 최종 배양이 포함됩니다.

클리어링 과정은 얼마나 걸리나요?

전체 과정은 사용된 특정 단계와 조건에 따라 몇 시간에서 하룻밤까지 소요될 수 있습니다.

쥐 뇌 조직 샘플에 대한 소수성 조직 세척 방법

JoVE Encyclopedia of Experiments

Neuroscience

0 views • 2:08 min • April 28th, 2025

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색소와 지질의 존재로 인해 불투명한 뇌 조직 샘플로 시작합니다. 이러한 구성 요소는 형광 표지된 뉴런에서 빛 산란을 일으킵니다.

메탄올 농도가 증가하는 용액에서 조직을 순차적으로 배양하여 조직에서 수분을 제거하고 조직을 점차적으로 탈수합니다.

그런 다음 이 조직을 농축 메탄올로 처리하여 잔류 물을 제거하여 완전한 탈수를 보장합니다.

다음으로, 조직을 디클로로메탄과 메탄올이 포함된 초기 투명 용매로 옮깁니다.

용매가 조직 깊숙이 침투할 수 있도록 부드럽게 흔들면서 배양합니다.

디클로로메탄은 조직에서 색소와 지질을 제거하여 빛 산란을 줄이고 투명도를 향상시킵니다.

마지막으로 조직을 소수성 용매인 디벤질 에테르로 옮기고 흔들지 않고 배양합니다.

용매는 조직 투명성을 더욱 향상시키는 최종 투명제 역할을 합니다.

이 과정은 빛 투과를 향상시켜 표지된 뉴런과 뇌 조직의 연결을 보다 명확하게 시각화할 수 있게 해줍니다 견본.

샘플을 실온에서 각각 1시간 동안 20%, 40%, 60%, 80% 및 100% 메탄올에서 연속적으로 배양합니다. 그런 다음 신선한 100% 메탄올에서 밤새 배양합니다. 다음날, 33% 메탄올에 혼합된 66% DCM에서 시료를 실온에서 3시간 동안 흔들면서 배양합니다. 3시간 후, 샘플이 투명해질 때까지 흔들지 않고 디벤질 에테르에서 배양합니다. 그런 다음 이미징이 될 때까지 디벤질 에테르에 보관합니다.