Name: 헤르페스의 연구를위한 예비 신경 세포 문화 시스템은 바이러스 지연 및 재가입을 단순 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 22 s
Description: 배우세요 HSV-1 잠복 및 재활성화 메커니즘을 연구하기 위한 1차 신경 세포 배양 시스템을 설정하는 방법을. 상부 경동맥 신경절 분리 및 EGFP 바이러스 감염을 통해 바이러스-신경 상호작용을 분자 수준에서 분석할 수 있습니다.

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우리는이 원고를 개선하는 데 도움이 그들의 사려깊은 제안 리뷰어 감사드립니다. 이 작품은 NIH에서 MVC (NS21072, HD23315) ACW (GM61139, S10RR017970)와 메신저 (AI073898, GM056927)에 교부금에 의해 지원되었다. MK는 NIH 연수 보조금 (5T32 AI007180)에 의해 부분적으로 지원되었다.

<ol><li>Camarena, V., Kobayashi, M., Kim, J. Y., Roehm, P., Perez, R., Gardner, J., Wilson, A. C., Mohr, I., Chao, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nature+and+duration+of+growth+factor+signaling+through+receptor+tyrosine+kinases+regulates+HSV-1+latency+in+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Host+%26+Microbe%22%5BJournal%5D)">Nature and duration of growth factor signaling through receptor tyrosine kinases regulates HSV-1 latency in neurons.</a> Cell Host & Microbe. 8, 320-330 (2010).</li>
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<li>Benboudjema, L., Mulvey, M., Gao, Y., Pimplikar, S. W., Mohr, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Association+of+the+herpes+simplex+virus+type+1+us11+gene+product+with+the+cellular+kinesin+light-chain-related+protein+PAT1+results+in+the+redistribution+of+both+polypeptides%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Association of the herpes simplex virus type 1 us11 gene product with the cellular kinesin light-chain-related protein PAT1 results in the redistribution of both polypeptides.</a> J. Virol. 77, 9192-9203 (2003).</li>
<li>Blaho, J., Morton, E. R., Yedowitz, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus%3A+propagation%2C+quantification+and+storage%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Protoc.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus: propagation, quantification and storage.</a> Curr. Protoc. Microbiol. Chapter 14, Unit 14E.1(2005).</li>
<li>Van Zeijl, M., Fairhurst, J., Jones, T. R., Vernon, S. K., Morin, J., LaRocque, J., Feld, B. L., O'Hara, B. L., Bloom, J. D., Johann, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+class+of+thiourea+compounds+that+inhibit+herpes+simplex+virus+type+1+DNA+cleavage+and+encapsidation%3A+resistance+maps+to+the+UL6+gene%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Novel class of thiourea compounds that inhibit herpes simplex virus type 1 DNA cleavage and encapsidation: resistance maps to the UL6 gene.</a> J. Virol. 74, 9054-9061 (2000).</li>
<li>Newcomb, W. W., Brown, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+herpes+simplex+virus+replication+by+WAY-150138%3A+assembly+of+capsids+depleted+of+the+portal+and+terminase+proteins+involved+in+DNA+encapsidation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of herpes simplex virus replication by WAY-150138: assembly of capsids depleted of the portal and terminase proteins involved in DNA encapsidation.</a> J. Virol. 76, 10084-10088 (2002).</li>
<li>Pesola, J. M., Zhu, J., Knipe, D. M., Coen, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+1+immediate-early+and+early+gene+expression+during+reactivation+from+latency+under+conditions+that+prevent+infectious+virus+production%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus 1 immediate-early and early gene expression during reactivation from latency under conditions that prevent infectious virus production.</a> J. Virol. 79, 4516-14525 (2005).</li>
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<li>Danaher, R. J., Jacob, R. J., Steiner, M. R., Allen, W. R., Hill, J. M., Miller, C. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histone+deacetylase+inhibitors+induce+reactivation+of+herpes+simplex+virus+type+1+in+a+latency-associated+transcript-+independent+manner+in+neuronal+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurovirol%22%5BJournal%5D)">Histone deacetylase inhibitors induce reactivation of herpes simplex virus type 1 in a latency-associated transcript- independent manner in neuronal cells.</a> J. Neurovirol. 11, 306-317 (2005).</li>
<li>Terry-Allison, T., Smith, C. A., DeLuca, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Relaxed+repression+of+herpes+simplex+virus+type+1+genomes+in+murine+trigenminal+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Relaxed repression of herpes simplex virus type 1 genomes in murine trigenminal neurons.</a> J. Virol. 71, 12394-12405 (2007).</li>
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<li>Stroop, W. G., Banks, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Herpes+simplex+virus+type+1+strain+KOS-63+does+not+cause+acute+or+recurrent+ocular+disease+and+does+not+reactivate+ganglionic+latency+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Neuropathol%22%5BJournal%5D)">Herpes simplex virus type 1 strain KOS-63 does not cause acute or recurrent ocular disease and does not reactivate ganglionic latency in vivo.</a> Acta Neuropathol. 87, 14-22 (1994).</li>
<li>Sawtell, N. M., Poon, D. K., Tansky, C. S., Thompson, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+latent+herpes+simplex+virus+type+1+genome+copy+number+in+individual+neurons+is+virus+strain+specific+and+correlates+with+reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">The latent herpes simplex virus type 1 genome copy number in individual neurons is virus strain specific and correlates with reactivation.</a> J. Virol. 72, 5343-5350 (1998).</li>
<li>Thompson, R. L., Cook, M. L., Devi-Rao, G., Wagner, E. K., Stevens, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+and+molecular+analysis+of+the+avirulent+wild-type+herpes+simplex+virus+type+1+strain+KOS%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Functional and molecular analysis of the avirulent wild-type herpes simplex virus type 1 strain KOS.</a> J. Virol. 58, 203-211 (1986).</li>
<li>Wilcox, C. L., Smith, R. L., Freed, C. R., Johnson, E. M. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+growth+factor-dependence+of+herpes+simplex+virus+latency+in+peripheral+sympathetic+and+sensory+neurons+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Nerve growth factor-dependence of herpes simplex virus latency in peripheral sympathetic and sensory neurons in vitro.</a> J. Neurosci. 10, 1268-1275 (1990).</li>
<li>Roehm, P. C., Camarena, V., Gardner, J. B., Wilson, A. C., Mohr, I., Chao, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cultured+vestibular+ganglion+neurons+demonstrate+latent+herpes+simplex+type+I+reactivation%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Cultured vestibular ganglion neurons demonstrate latent herpes simplex type I reactivation.</a> Laryngoscope. 121, 2268-2275 (2011).</li>
<li>Kuhn, M. A., Nayak, S., Camarena, V., Gardner, J., Wilson, A., Mohr, I., Chao, M. V., Roehm, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+cell+culture+model+of+facial+palsy+resulting+from+reactivation+of+latent+herpes+simplex+virus+type+1%5BTitle%5D)+AND+%22Otology+%26+Neurotology%22%5BJournal%5D)">A cell culture model of facial palsy resulting from reactivation of latent herpes simplex virus type 1.</a> Otology & Neurotology. , Forthcoming (2012).</li>
</ol>

관심의 어떠한 충돌 선언 없습니다.

이 예비 신경 세포 문화 및 감염 시스템은 HSV-1 지연과 재활 성화를 밑에있는 분자 메커니즘을 탐구하기위한 간단하고 효과적인 방법을 제공합니다. 시스템은 충실히 recapitulates 인간 감염 모두에서, 라이브 - 동물 모델에서 정의된 대기 시간의 인정된 특징을. 바이러스가 SCG 문화에 숨어있는 경우, 전염성 입자와 바이러스 lytic 유전자 제품은 감지되지 않습니다. latently에 감염된 뉴런에서 검색된 유일한 바이러스성 유전자 산물이 핵 내에 축적 비 코딩 LAT 성적 증명서입니다. 재가입 바이러스는 lytic 유전자의 표현과 일치하며 전염성 입자의 생산에 culminates. 또한,이 일차 신경 세포의 세포 배양 모델은 효과적으로 lytic 바이러스 복제를 유도 TSA 등 허용 재활 성화 inducers에 반응입니다. 다른 화학 inducers는 다양한 extents에 재가입을 자극하고 특성과 속도론. 예를 들어, TSA는 re...

<table border="1"><tbody><tr><td> 시약 </td><td> 회사 </td><td> # 카탈로그 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 70μm 나일론 필터 (세포 스트레이너) </td><td> BD Biosciences </td><td> 352,350 </td><td></td></tr><tr><td> 1X 행크의 균형 소금 솔루션 (HBSS - / -) </td><td> Invitrogen </td><td> 14,175 </td><td> W / O CaCl 2, MgCl 2 </td></tr><tr><td> 1X 최소 필수 미디어 (MEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 11095-080 </td><td></td></tr><tr><td> 5 - 플루오로-2&#39;-deoxyuridine </td><td> 시그마 </td><td> F0503 </td><td> -20 ° C에 상점; 1X MEM에서 20 밀리미터 재고를 준비 </td></tr><tr><td> 96 - 웰 평판 잘 하단 TC 플레이트 </td><td> 코닝 </td><td> 3599 </td><td></td></tr><tr><td> 아시 클로 비어 </td><td> &lt;em&gt;를 Calbiochem </td><td> 114,798 </td><td> -20 ° C에 상점, DMSO 31 밀리미터 재고를 준비 </td></tr><tr><td> Aphidicolin </td><td> Calbiochem </td><td> 178,273 </td><td> -20 ° C에 상점, DMSO 10 밀리미터 재고를 준비 </td></tr><tr><td> B-27 보충 </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-44 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase </td><td> 시그마 </td><td> C2674 </td><td> -20 ° C에 상점; - / - HBSS 10 MG / ML 주식을 준비 </td></tr><tr><td> D-(+)-포도당 </td><td> 시그마 </td><td> G6152 </td><td> H 2 O에서 40 %의 주식을 준비, 필터는 4 시에 소독 및 저장 ° C </td></tr><tr><td> L-글루타민 </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-081 </td><td></td></tr><tr><td> Laminin </td><td> 시그마 </td><td> L2020 </td><td> 급속 냉동 20 μl, H 2O에 1 MG / ML 주식을 준비-80시 aliquats &amp; 매장 ° C ~; 묽은 ~ 2 μg / ML 작업 conc. 멸균 H 2 O의 </td></tr><tr><td> Leibovit&#39;z L-15 미디어 </td><td> Invitrogen </td><td> 11,415 </td><td></td></tr><tr><td> 신경 성장 인자 </td><td> 할란 연구소 </td><td> BT.5017 </td><td> / - - HBSS에서 50 μg / ML 주식을 준비, -80 ° C에 저장 </td></tr><tr><td> Neurobasal 매체 </td><td> Invitrogen </td><td> 12,348 </td><td></td></tr><tr><td> Phosphonoacetic 산 (PAA) </td><td> 시그마 </td><td> P6909 </td><td> -20 ° C에 상점, H 2 O, 75 MG / ML 주식을 준비 </td></tr><tr><td> 폴리-D-라이신 브롬화 수 소산 </td><td> 시그마 </td><td> P0899 </td><td> -20 ° C에 상점, H 2 O, 20 MG / ML 주식을 준비 </td></tr><tr><td> 둥둥 꼬리 콜라겐 </td><td> Millipore </td><td> 08-115 </td><td>농도는 공급 많이 따라 다릅니다, 4시 점포 ° C와 묽은으로 0.66 밀리그램 / ML 작업 conc. 멸균 H 2 O의 </td></tr><tr><td> Trichostatin </td><td> 시그마 </td><td> T8552 </td><td> -20 ° C에 상점, DMSO 1 밀리미터 재고를 준비 </td></tr><tr><td> 트립신 2.5 % </td><td> Invitrogen </td><td> 15090-04 </td><td></td></tr></tbody></table>

헤르페스의 연구를위한 예비 신경 세포 문화 시스템은 바이러스 지연 및 재가입을 단순

A Primary Neuron Culture System for the Study of Herpes Simplex Virus Latency and Reactivation

헤르페스는 타입 1 (HSV-1)은 말초 신경의 평생 잠재 감염을 수립 바이러스를 단순. 이것은 잠재 저장조는 전송을 보장하고 임상 질환에 기여하는 반복 재가입 이벤트의 소스입니다. 현재 antivirals는 잠재 저수지에 영향을주지 않으며 아무 백신은 없습니다. lytic 복제 분자 세부 사항이 잘 특성화 있지만, 뉴런에 지연 시간을 조절하는 메커니즘은 애매 남아있다. 대기 시간 우리의 현재 이해 바이러스성 유전자 요구 사항 및 면역 반응의 역할을 정의를 위해 불가 결한되어 작은 동물 모델을 이용한 생체내 연구에서에서 파생됩니다. 그러나, 그것은 살아있는 동물의 면역 또는 이외의 연결을 지원하는 세포에 의해 매개 감염의 더 일반적인 결과로부터 바이러스 신경 세포의 관계에 대한 구체적인 효과를 구별하는 것은 불가능합니다. 또한, 동물 실험은 호스트를 조작 위해 비용이 많이 드는 시간 소모와 사용 가능한 옵션 면에서 제한처리합니다. 이러한 한계를 극복하기 위해 신경 세포 전용 시스템은 필사적으로 지연 및 재가입의 생체내 특성에를 재현하지만, 균질성 및 접근성 측면에서 조직 문화의 혜택을 제공하는 필요합니다. 여기에 맞는 HSV-1 지연과 재활 성화를 공부 쥐 우수한 경추 신경 (SCG) (그림 1)에서 교양 기본 공감 뉴런을 이용한 체외 모델을 제시 대부분의 모든 원하는 조건의 경우. 이외의 연결을 세포를 제거하면 거의 균질 TrkA + 신경 세포 배양은 lytic 복제를 억제하는 아시 클로 비어의 존재 (ACV)에서 HSV-1에 감염됩니다. 아래 ACV 제거, 신실 대기의 인정 특징이 효율적으로 설립되어 전시 비생산적인 HSV-1 감염. 특히, lytic mRNAs, 단백질 및 전염성 바이러스도 선택의 부재에서 감지되고 있지만, 지연 - 관련 증명서 (LAT) 특급이온 핵의 연결에 지속. 바이러스성 genomes은 신경 세포 당 25의 평균 사본 번호로 유지하고 생산 PI3 - 키나 아제 / Akt 신호 또는 신경 성장 인자 1의 간단한 인출을 방해하여 복제에 시달릴 수 있습니다. 바이러스성 lytic 단백질 Us11로 융합된 재조합 HSV-1 인코딩 EGFP는 쉽게 계량되어 재가입으로 인한 복제 기능, 실시간 마커를 제공합니다. 화학 요법과 더불어, 그러한 lentiviral 벡터를 통해 RNA 간섭이나 유전자 전달과 같은 유전적인 방법론이 성공적으로 매우 어려운이 아니라면 불가능한, 동물에있는 기계론의 연구를 허용하는 시스템에 적용할 수 있습니다. 요약에서는 SCG 기반 HSV-1 대기 / 재가입 시스템은 뉴런의 HSV1 지연 및 재활 성화, 누구의 솔루션을 새로운 치료법을 개발에 신선한 통찰력을 제공할 수 있습니다 바이러스학의 오랜 퍼즐을 제어하는​​ 분자 메커니즘을 해명하기위한 강력하고 필요한 도구를 제공합니다 대상 t그는 herpesvirus 탱크를 잠재.

프로토콜은 헤르페스 바이러스 1 형 (HSV-1) 대기 시간과 재활 성화를 단순 공부하는 효율적이고 재현성 모델 시스템을 설명합니다. 분석은 동질적인 교감 신경 세포 배양을 고용하고 RNA 간섭 및 재조합 단백질의 표현을 포함한 다양한 도구를 사용하여 바이러스 신경 세포 상호 작용의 분자 해부을 허용합니다.

단순포진바이러스 1형(HSV-1)은 말초 신경세포에 평생 지속되는 잠복 감염을 형성합니다. 이러한 잠복 저장소는 재발성...

본 실험의 목적은 단순포진바이러스(herpes simplex virus)의 잠복 및 재활성화를 연구하는 데 일차 신경세포 배양 시스템을 어떻게 활용할 수 있는지 보여주는 것입니다. 이를 위해 먼저 RA 배아에서 상경신경절(superior cervical ganglia) 뉴런을 분리하고, 비신경세포를 제거한 후 해리된 신경절에서 분리한 뉴런을 배양합니다. 그 다음, 용해성 복제 억제제가 존재하는 상태에서 EGFP 바이러스를 사용하여 뉴런을 감염시킴으로써 잠복성 HSV 감염을 유도합니다.다음 단계는 잠복 감염된 배양 세포의 재활성화를 유도하는 것입니다. 마지막으로, 시간에 따른 EGFP 발현을 모니터링하여 재활성화 효율을 평가합니다. 궁극적으로, 화학적 억제제, RNA 간섭 및 유전자 전달을 이용하여 다양한 신경 신호 전달 경로가 단순포진바이러스의 잠복 및 재활성화를 어떻게 조절하는지 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.기존 방법과 비교하여 이 기술의 주요 장점은 숙주 뉴런 내에서 단순 헤르페스 바이러스의 잠복 상태를 조절하는 상호작용을 분자 수준에서 상세히 연구할 수 있다는 점입니다. 이 방법은 잠복 게놈을 억제하는 신호는 무엇인지, 그리고 분자 수준에서 재활성화는 어떻게 유도되는지와 같이 단순 헤르페스 바이러스 잠복 분야의 핵심 질문들에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 뉴런 내에서 이 방법은 HSV-1 잠복 상태에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다.이 방법은 다른 신경영양성 알파 헤르페스 바이러스에도 적용될 수 있습니다. 해당 절차의 시연은 저희 실험실의 대학원생인 marigo, Kochi 및 Julian Kim이 진행하겠습니다. 본 프로토콜에서 사용하는 상경신경절(SCG) 뉴런은 임신한 암컷 쥐의 자궁에서 적출한 E 21 쥐 태아로부터 분리합니다. 해부대에서 가위를 어깨 바로 위의 목 기저부에 대고 머리를 몸통에서 분리하여 각 태아를 안락사시킵니다. 신경절을 노출시키기 위해 23게이지 바늘을 사용하여 머리의 목 부분이 위로 오도록 세 군데에 고정합니다.먼저 척수를 핀으로 고정합니다. 둘째로, 앞쪽 피부를 코 위로 당겨 핀으로 고정하고, 셋째로 식도와 기관을 목 뒤쪽에서 떨어뜨려 핀으로 고정합니다. 경동맥 분지점을 찾아 상경신경절(SCG)을 확인합니다.경동맥은 한 쌍으로 이루어진 구조입니다. 목의 양측에 두 개의 분기점이 있으므로, 개체당 두 개의 SCG가 존재합니다. SCG는 분기점 바로 아래에 위치합니다.

a-primary-neuron-culture-system-for-study-herpes-simplex-virus

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

synaptically 연결 뉴런을 추적하는 방법이 설명되어 있습니다. 우리는 관심의 세포 인구가 유전자 정의 셀 유형에서 시냅스 입력을 받고 있는지 여부를 조사하기 위해 상류 세포의 TVA의 특이성을 사용합니다.

유 전적으로 정의 된 신경 회로의 추적 바이러스

포진 성 각막 질환의 대부분의 연구는 주요 감염 모델을 사용합니다. 그러나, HSV-1 기본 감염은 일반적으로 인간의 질병으로 이어질하지 않습니다. 여기보다 밀접하게 인간의 질병을 모방 포진 성 각막 질환의 재발 모델을 설명합니다.

마우스의 재발 포진 성 각막염 Stromal, 인간 HSK 유학을위한 모델

Source: Nguyen, H., et al. Growth, Purification, and Titration of Oncolytic Herpes Simplex Virus. J. Vis. Exp. (2021).This video demonstrates the propagation and harvesting of oncolytic herpes simplex virus in mammalian cell cultures, highlighting viral entry, replication, and the recovery of virus-loaded cells. It further shows methods for preserving infected cells for downstream processing.

Propagation and Harvesting of Oncolytic Herpes Simplex Virus in Mammalian Cells

뉴클레오사이드 유사체를 이용한 복제 중인 HSV-1 게놈의 표지

alphaherpes 바이러스 감염의 라이브 셀 이미징 직접 수송 및 간 스프레드의 동적 이벤트 분석을 할 수 있습니다. 여기, 우리는 차 신경의 감염시 바이러스 어셈블리의 시각화를 촉진하기 위해 형광 융합 단백질을 발현하는 재조합 바이러스의 변종을 활용 방법론을 제시한다.

Alphaherpes 바이러스 선행 성 전송 및 확산의 라이브 셀 이미징

우리는 동물 모델의 조직 섹션 내의 영속 DNA 바이러스 게놈의 검출을 위해 현장 하이브리드 프로토콜에 형광등을 설치했다. 이 프로토콜은 바이러스 게놈의 codetection, 자사의 RNA 제품, 단일 세포 내에서 바이러스 또는 세포 단백질에 의해 감염 과정을 연구 할 수 있습니다.

형광에 의한 신경 조직의 영구 DNA 바이러스의 게놈 및 성적 증명서의 검출 현장에서 하이브리드 면역 염색과 결합

피부는 인간 병원체인 단순 헤르페스 바이러스 1형(HSV-1)의 표적 조직 중 하나입니다. HSV-1의 조직 침입 경로를 조사하기 위해 피부의 가장 바깥쪽 층을 나타내는 쥐 표피 시트의 생체 외 감염 모델을 구축했습니다.

단순 포진 바이러스 1 형과 쥐 표피의 생체 감염

신경생물학에서는 인간 뉴런에서 생체 내에서 일어나는 일에 대한 번역 모델 역할을 하는 신뢰할 수 있고 복제 가능한 체외 시스템을 보유하는 것이 중요합니다. 이 프로토콜은 SH-SY5Y 인간 신경모세포종 세포를 in vitro 응용 프로그램에 사용할 수 있는 생존 가능한 뉴런으로 배양하고 분화하는 방법을 설명합니다.

SH-SY5Y 인간 신경 모세포종 세포 라인의 차별화

이 보고서에서 organotypic 문화와 지 루트 마우스 파생 중추의 해리 주 문화의 장점 다양 한 메커니즘 neuroplasticity, 상호 작용 신경 폐해와 관련 된 조사를 강조 표시 됩니다. neuroinflammation, 그리고 바이러스 성 감염에 응답입니다.

성인 마우스 DRG Explant와 해리 셀 모델 Neuroplasticity 바이러스 성 감염을 포함 한 환경 모욕에 대 한 응답을 조사 하

에이즈 효율적인 재 활성화의 기능 평가 및 잠재 proviruses의 높은 처리량 프로토콜 설명 이며 HIV 전사에 개입의 영향을 테스트 하 고 접합 하 여 적용 합니다. 대기 시간 반전 LTR 기반 전사에 에이전트와 접합의 효과의 대표적인 결과 제공 됩니다.

대기 시간 반전 HIV 전사 및 접합에 에이전트의 체 외 평가에서 높은 처리량

이 프로토콜은 BAC16 유래 비리온을 사용하여 카포시 육종 관련 헤르페스 바이러스의 새로운 용해 감염을 모델링하는 시험관 내 시스템을 설명합니다. 이 방법을 사용하면 초기 바이러스 복제 및 전파를 조사할 수 있습니다. 감염성 바이러스 생산은 GFP 기반 감염 단위 분석 및 캡슐화된 바이러스 게놈의 실시간 PCR에 의해 정량화됩니다.

무세포 카포시 육종 관련 헤르페스 바이러스에 의한 새로운 용해 감염의 확립 및 정량화

배우세요 HSV-1 잠복 및 재활성화 메커니즘을 연구하기 위한 1차 신경 세포 배양 시스템을 설정하는 방법을. 상부 경동맥 신경절 분리 및 EGFP 바이러스 감염을 통해 바이러스-신경 상호작용을 분자 수준에서 분석할 수 있습니다.

헤르페스의 연구를위한 예비 신경 세포 문화 시스템은 바이러스 지연 및 재가입을 단순

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