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DOI: 10.3791/4350-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a method for tracking photo switched cells in living zebrafish embryos using photoconvertible fluorescent proteins. The technique allows for the monitoring of cell biological events during development through confocal microscopy.
여기에서는 살아있는 제브라피시 배아에서 광전환성 형광 단백질(PCFP)의 광활성화 전환과 발달 중 특정 시점에서 광변환 단백질을 추적하는 방법을 제시합니다. 이 방법론을 사용하면 살아있는 척추동물 유기체의 다양한 발달 과정의 기저에 있는 세포의 생물학적 사건을 모니터링할 수 있습니다.
이 절차의 전반적인 목표는 살아있는 제브라 피쉬 배아에서 사진 전환 세포를 추적하는 것입니다. 이것은 먼저 배아를 매립하고, 조직 특이적 광, 낮은 용융 온도에서 컨버터블 형광 단백질을 발현함으로써 달성됩니다. 다음으로, 관심 영역 내의 단백질은 완전히 광으로 변환됩니다.
그런 다음 배아를 aros에서 조심스럽게 제거하고 후기 단계까지 섭씨 28.5도의 난수 속에서 유지합니다. 마지막으로, 사진으로 변환된 배아는 다시 낮은 용융 온도의 배아에 삽입됩니다. 궁극적으로, 컨포칼 현미경 검사를 통해 광변환된 단백질의 안정적인 존재로 인해 광변환된 세포가 나중에 정확하게 검출될 수 있음을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.
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