Name: 사례 연구로 담배에 과도 단백질 발현 : 실험 접근의 디자인을 사용하여 복잡한 시스템의 특성 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-01-31T14:00:00.000+00:00
Duration: 20 min 24 s
Description: 학습하세요 담배 잎에서의 단백질 과도 발현을 위한 실험 설계 접근법을 통해 주요 매개변수의 영향을 정량화하고 예측 모델을 생성하는 방법을. 이 기법은 다양한 인자 간 상호작용을 감지하여 단일 인자 실험보다 우수한 결과를 제공합니다.

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저자는이 연구에서 사용 된 담배 식물을 재배의 pPAM 식물 발현 벡터 및 이브라힘 알 Amedi를 제공하는 토마스 박사 Rademacher는에게 감사의 말씀을 전합니다. 우리는 원고를 편집하는 그의 도움 박사 리처드 M. 트 와이에게 감사의 말씀을 전합니다. 이 작품은 부분적으로 유럽 연구위원회 고급 그랜트 &quot;미래 제약&quot;에 의해 추진, 제안 번호 269110과 프라운호퍼 Zukunftsstiftung (프라운호퍼 미래 재단).

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출판 비용은 부분적으로 원고 또는 그 내용에 대해 책임을의 준비에 참여에 참여하지 않은 기업 Statease, 주식 회사 (미국)와 Statcon (독일), 후원했다.

자원은 종종 부족하고 비용 때문에 모든 실험은 신중한 계획이 필요합니다. 계획 단계 (예를 들어, 모든 중요한 요소의 상호 작용을 포함하지 않는 기본 모델을 선택)하는 동안 오류가 실질적 결과 모델의 예측 능력을 감소함으로써 전체 실험을 평가 절하 할 수 있기 때문 미상 전략에 특히 사실이다. 그러나 이러한 오류는 쉽게 기본 절차에 따라 피할 수 있습니다. 미상 계획시 고려 사항 첫째, 각 피해자의 실행에 대한 (긍정적이거나 부정적인) 결과를 평가하기에 적합한 응답을 선택하는 것이 중요합니다. 예를 들어 : UV 흡수 (37)에 의해 결정된 표적 단백질의 농도는 특정 프로모터 / 5&#39;UTR 배합의 활성을 평가하는 데 유용하다. 그러나, 단백질의 기능 평가 (예. DsRed를의 경우 형광하거나 CAS있는 단백질에 바인딩그것은 또한 단백질의 품질 측면을 포함하고 있기 때문에 ...

식물이 성장 저렴하기 때문에 식물에서 바이오 의약품 단백질의 생산이 유리하다, 플랫폼은 더 많은 식물을 재배하여 확장 할 수 있으며, 인간의 병원체는 1,2를 복제 할 수 없습니다. DNA 전달 및 정제 된 제품의 배달 지점 사이의 시간을 세 미만 2 달 이상 3로 감소하기 때문에 아그로 박테 리움 튜메 파시 엔스 잎의 침투에 예를 들어 기반의 일시적 발현 전략은 추가 혜택을 제공한다. 일시적 발현은 기능 상실 돌연변이를 보완하기 위해 또는 단백질 상호 작용 4-6을 조사하기 위해 자신의 능력에 대한 유전자를 테스트하는 기능 분석, 예를 들어 사용됩니다. 그러나, 일시적인 발현은 형질 전환 식물체 7-9의 발현 수준보다 큰 배치 별 편차를 표시하는 경향이있다. 이는 바이오 의약품의 제조 공정은 일시적인 발현 위스콘신에 근거한다는 가능성을 줄여재현성이 중요한 품질 특성과 위험 평가 10 될 수 있으므로 우수 제조 기준 (GMP)의 맥락에서 승인 될 것이다. 이러한 변화는 연구자가 조사하고자하는 모든 상호 작용에 마스크를 적용 할 수 있습니다. 따라서 식물에서 과도 발현 수준에 영향을 고품질 정량적 예측 모델을 구축하는 주요 요인의 동정을 설정. 하나의 요인 -에서 - 타임 (OFAT) 접근 방식은 종종 실험 11의 결과에 대한 특정 매개 변수 (요인)의 영향 (효과) (응답)를 특성화하는 데 사용됩니다. 연구 (실험) 동안 개별 테스트 (실행) (설계 공간)을 테스트하는 요인에 의해 스팬 잠재적 인 영역을 통해 문자열에 진주처럼 정렬됩니다 때문에이 차선이다. 디자인 공간과 실험에서 파생 된 정보 따라서 정도의 범위는낮은,도 1a에 도시 된 바와 같이 12. 도 1b 13에 도시 된 바와 같이 또 다른 요인 (인자의 상호 작용) 사이의 상호 의존성은별로 모델 및 / 또는 거짓 옵티마의 예측 결과 은폐 남아있을 수있다. 전술 한 단점은 둘 이상의 요소가이 실행 (14) 사이에 변화되는 것을 의미하는 실험의 실행이 디자인 공간에 걸쳐 균등하게 분산되어있는 실험 (DOE) 방식의 설계를 사용하여 회피 할 수있다. 요인 (요인 설계) 및 반응에 인자에 미치는 영향의 정량 (반응 표면 방법, RSM 초) 15를 선별 혼합물에 대한 전문적인 디자인이있다. 또한, RSM의 중부 - 복합체 설계로 실현 될 수 있지만, 또한 실행의 선택을위한 다른 기준을 적용 할 수있는 특수한 소프트웨어를 사용하여 효과적으로 성취 될 수있다. 예를 들어, 소위 D-optimalitY 기준은 IV-최적 성 기준은 설계 공간 (15, 16)에 걸쳐 가장 낮은 예측 분산을 달성 실행을 선택하는 반면, 이렇게 생성 된 모델의 계수들에서 오류를 최소화하기 위해 실행을 선택한다. 우리는 여기 설명 RSM은 식물에서 과도 단백질 발현의 정확한 정량을 허용하지만, 간단하게 (5-8 ~) 몇개 관련된 모든 시스템으로 전송 될 수있는 숫자 요인 (예 : 온도, 시간, 농도) 및 소수 (~ 2 - 4) 기계 론적 설명은 모델에 사용할 수 없거나 너무 복잡 categoric 요인 (예를 들어, 프로모터, 색상)하는. 피해자의 접근 방식은 농업 과학에서 유래하지만, 그것이 신뢰할 수있는 데이터를 확보하는 데 필요한 실행의 수를 줄이고 복잡한 프로세스에 대한 설명이 포함 된 모델을 생성하는 데 유용합니다 어떤 상황에 양도 할 수 있기 때문에 다른 지역으로 확산하고있다. 이것은 차례로은 &quot;지침에서 미상의 포함되었다산업은 인간의 사용에 대한 제약 (ICH) (17)의 등록을위한 기술 요구 사항의 조화에 관한 국제 회의에서 발표 Q8 (R2) 의약품 개발은 &quot;. 미상은 현재 과학 연구 및 산업 (18)에 널리 사용된다. 그러나, 치료 중에주의해야 다중 선형 회귀 모델 (기본 모델)에 대한 부적절한 다항식 정도를 선택하기 때문에 계획과 실험의 실행은 제대로 모든 인자의 영향을 모델링하는 추가 실행을위한 필요를 소개 할 수있다. 또한, 손상되거나 누락 된 데이터가 잘못된 모델과 결함을 생성 예측, 심지어 프로토콜 및 토론 섹션 (18)에서 설명한 바와 같이 임의의 모형 구축 시도를 방지 할 수있다. 프로토콜 섹션에서, 우리는 처음 RSM 기반 실험을위한 가장 중요한 계획 단계를 설정 한 후 미상에 기반 디자인을 설명 할 것이다 소프트웨어 DesignExpert v8.1이. 그러나 유사한 디자인은 다른 소프트웨어 includi을 빌드 할 수 있습니다NG JMP, Modde 및 STATISTICA. 실험 절차는 데이터 분석 및 평가를위한 지침에 따른다. <img alt="그림 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51216/51216fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51216/51216fig1.jpg" /> 그림 1. OFAT 및 미상.의 비교. 실험 (검은 색, 빨간색과 파란색 동그라미)의 시간 (OFAT) 하나의 인자의 연속 변화는 설계 공간 (빗금 친 지역)의 낮은 범위를 달성 할 수있다. 대조적으로, 실험 (DOE) 전략 (녹색 원)의 디자인을 사용하여 한 번에 하나 이상의 인자의 변형에 따르면 얻어진 모델. 따라서 B의 정밀도를 향상시킨다. 바이어스 설계 공간의 범위는 OFAT 실험 (검은 색 원)도, 최적의 작업 영역 (빨간색)를 식별 및 하위 최적의 솔루션 (큰 검은 원)을 예측하는 데 실패 할 수 있다는 것을 의미하는 반면 피해자의 strategiES (검은 별) 바람직 조건 (큰 검은 별)를 식별 할 가능성이 높습니다.

<table><tbody><tr><td>디자인 전문가(R) 8</td><td>Stat-Ease, Inc.</td><td>n.a.DoE</td> <td>소프트웨어</td></tr><tr><td>Tryptone</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>8952.2</td><td>배지 성분</td></tr><tr><td>효모 추출물</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>2363.2</td><td>매체 성분</td></tr><tr><td>염화나트륨</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>P029.2</td><td>매체 성분</td></tr><tr><td>Ampicillin</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>K029.2</td><td>항생제</td></tr><tr><td>한천</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>5210.2</td><td>미디어 구성 요소</td></tr><tr><td>Escherichia coli K12 DH5a</td><td>Life Technologies</td><td>18263-012</td><td>Microorganism</td></tr><tr><td>pPAM</td><td>GenBank</td><td>AY027531</td><td>Cloning/expression vector; &nbsp;</td></tr><tr><td>NucleoSpin 플라스미드&nbsp;</td><td>MACHEREY-NAGEL GmbH</td><td>740588.250</td><td>플라스미드 DNA 분리 키트</td></tr><tr><td>NucleoSpin Gel 및 PCR Clean-up</td><td>MACHEREY-NAGEL GmbH</td><td>740609.250</td><td>플라스미드 DNA 정제 키트</td></tr><tr><td>NanoDrop 2000</td><td>Thermo Scientific</td><td>n.a.</td><td>분광 광도계</td></tr><tr><td>NcoI</td><td>New England Biolabs Inc.</td><td>R3193L</td><td>제한 엔도뉴클레아제</td></tr><tr><td>EcoRI</td><td>뉴잉글랜드 Biolabs Inc.</td><td>R3101L</td><td>Restrictionendonuclease</td></tr><tr><td>AscI</td><td>뉴잉글랜드 Biolabs Inc.</td><td>R0558L</td><td>Restrictionendonuclease</td></tr><tr><td>NEB 4</td><td>뉴잉글랜드 Biolabs Inc.</td><td>B7004S</td><td>Restrictionendonuclease buffer</td></tr><tr><td>TRIS</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>4855.3</td><td>매체 성분</td></tr><tr><td>Disodium tetraborate</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>4403.3</td><td>매체 성분</td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>8040.2</td><td>매체</td></tr><tr><td>성분 Agarose</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>6352.4</td><td>매체 성분</td></tr><tr><td>Bromophenol blue</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>A512.1</td><td>색상 표시기</td></tr><tr><td>Xylene cyanol</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>A513.1</td><td>색상 표시기</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>7530.2</td><td>매체 구성</td></tr><tr><td>요소 Mini-Sub Cell GT Cell</td><td>BioRad</td><td>170-4406</td><td>겔 전기 영동 챔버</td></tr> <tr><td>< >Agrobacterium tumefaciens 균주 GV3101 : pMP90RK</td><td>DSMZ</td><td>12365</td><td>미생물</td></tr><tr><td>Electroporator 2510</td><td>Eppendorf</td><td>4307000.658</td><td>Electroporator</td></tr><tr><td>쇠고기 추출물</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>X975.2</td><td>배지 성분</td></tr><tr><td>Peptone</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>2365.2</td><td>매체 성분</td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>4621.2</td><td>매체 성분</td></tr><tr><td>Magnesium sulfate</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>0261.3</td><td>매체 성분</td></tr><tr><td>Carbenicillin</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>6344.2</td><td>항생제</td></tr><tr><td>Kanamycin</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>T832.3</td><td>항생제</td></tr><tr><td>Rifampicin</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>4163.2</td><td>항생제</td></tr><tr><td>FWD 프라이머</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td>n.a.CCT</td> <td>CAG GAA GAG CAA TAC</td></tr><tr><td>REV 프라이머</td><td>Eurofins MWG Operon</td><td>n.a.CCA</td> <td>AAG CGA GTA CAC AAC</td></tr><tr><td>2720 열 cycler</td><td>응용 바이오 시스템</td><td>4359659</td><td>Thermocycler</td></tr><tr><td>RNAfold 웹 서버</td><td>비엔나 대학</td><td>n.a.Software</td><td></td></tr> <tr><td>Ferty 2 Mega</td><td>Kammlott</td><td>5.220072</td><td>비료</td></tr><tr><td>Grodan Rockwool 큐브 10 x10 cm</td><td>Grodan</td><td>n.a.Rockwool</td> <td>블록</td></tr><tr><td>온실</td><td>n.a.n.a</td><td>.</td><td>식물 재배</td></tr><tr><td>Phytotron</td><td>Ilka Zell</td><td>n.a.</td><td>식물 재배용</td></tr><tr><td>Omnifix-F Solo</td><td>B. Braun</td><td>6064204</td><td>주사기</td></tr>, <tr><td>Murashige 및 Skoog 염</td><td>Duchefa</td><td>M 0222.0010</td><td>미디어 구성 요소</td></tr><tr><td>Glucose</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>6780.2</td><td>미디어 구성</td></tr><tr><td>요소 Acetosyringone</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D134406-5G</td><td>Phytohormon analogon</td></tr><tr><td>&nbsp; BioPhotometer plus</td><td>Eppendorf</td><td>6132 000.008</td><td>광도계</td></tr><tr><td>Osram cool white 36 W</td><td>Osram</td><td>4930440</td><td>광원</td></tr><tr><td>Disodium phosphate</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>4984.3</td><td>매체 구성 요소</td></tr><tr><td>Centrifuge 5415D</td><td>Eppendorf</td><td>5424 000.410</td><td>Centrifuge</td></tr><tr><td>Forma -86C ULT Freezer</td><td>ThermoFisher</td><td>88400</td><td>Freezer</td></tr><tr><td>Synergy HT</td><td>BioTek</td><td>SIAFRT</td><td>형광 플레이트 리더</td></tr><tr><td>Biacore T200</td><td>GE Healthcare</td><td>n.a.SPR</td> <td>장치</td></tr><tr><td>Protein A</td><td>Life Technologies</td><td>10-1006</td><td>항체 결합 단백질</td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>9105.3</td><td>배지 구성 요소</td></tr><tr><td>Tween-20</td><td>Carl Roth GmbH</td><td>9127.3</td><td>배지 구성</td></tr><tr><td>요소 2G12 항체</td><td>Polymun</td><td>AB002</td><td>Reference 항체</td></tr></tbody></table>

사례 연구로 담배에 과도 단백질 발현 : 실험 접근의 디자인을 사용하여 복잡한 시스템의 특성

Characterization of Complex Systems Using the Design of Experiments Approach: Transient Protein Expression in Tobacco as a Case Study

식물은 낮은 비용, 확장 성 및 안전성을 포함한 생물 약제의 제조를위한 다수의 이점을 제공한다. 일시적 발현은 짧은 개발 및 생산 시간의 추가적인 장점을 제공하지만, 발현 따라서 좋은 제조 연습의 맥락에서 규제 우려로 상승을주는 일괄 처리 사이에 상당히 다를 수 있습니다. 우리는 일괄 간의 발현의 변동에 대한식이 동안 규정 식 구조 요소, 식물의 성장과 발달 파라미터 및 배양 조건 등 주요 요인의 영향을 결정하기 위하여 실험 (DOE) 접근법의 디자인을 사용했다. 우리는 모델 항 HIV 단일 클론 항체 (2G12)과 형광 마커 단백질 (DsRed를)을 표현하는 식물을 시험했다. 우리는 모델의 특정 속성을 선택하기위한 이론적 근거를 설명하고 잠재적 한계를 식별합니다. 일반적인 방법은 간단하게 다른 문제로 전송 될 수 있기 때문에 모델의 원리광범위하게 다시 적용 : 작은 모듈, 최적의 실험 조합의 소프트웨어 가이드 설정 및 단계적 디자인 증가로 초기 문제를 분할하여 지식 기반 파라미터 선택, 복잡성 감소. 따라서, 방법론뿐만 아니라 식물의 단백질 발현을 특성화뿐만 아니라 기계적인 설명이 부족한 다른 복잡한 시스템의 조사에 유용합니다. 파라미터 사이의 상호 접속을 설명하는 예측 식들은 다른 복잡한 기계적 시스템 모델을 확립하는데 사용될 수있다.

다른 발기인 및 5&#39;UTRs를 사용하여 일시적 발현시 DsRed를 축적에 대한 설명 모델 잎 추출물의 형광 DsRed를 재조합 단백질의 발현 수준을 나타 내기 때문에 미상 전략에 대한 응답으로 사용되었다 사용 하였다. 우리가 중요한 고려 최소 검출 가능한 차이가 20 ㎍ / ㎖의이었고 시스템의 추정 표준 편차는 초기 실험을 기준으로 13 ㎍ / ㎖의이었다. 일시적 발현 모델에 포함 된 요인은 문헌 데이터 7,8 우리의 이전 결과 9에 따라 선택되었다. 조사 범위는 이러한 데이터에 따라 선택되었다 (표 1). 적어도 세 레벨 차 기본 모델의 계산을 허용하는 모든 이산 숫자 요인으로 선정 하였다. D-최적 선택 알고리즘이 미상의 선택을 위해 선택되었다 대한 가장 정확한 추정치를 구하는 것이 실행회귀 모델의 계수. 처음 DesignExpert 의해 제안 설계는 90 런 이루어...

우리는 식물에서 단일 클론 항체와 리포터 단백질의 과도 발현 유전자 조절 요소, 식물의 성장과 발달 파라미터 및 배양 조건의 영향을 결정하고 모델링하는 데 사용될 수있는 실험 방법의 설계를 설명한다.

Plants provide multiple benefits for the production of biopharmaceuticals including low costs, scalability, and safety. Transient expression offers the ...

다음 실험의 전반적인 목표는 식물 잎에서 단백질의 일시적인 발현에 대한 예측 모델을 생성하는 것입니다. 이는 일시적인 발현에 대한 가장 중요한 매개변수를 식별하고 단백질 축적에 미치는 영향을 정량화하기 위해 실험 설계를 설정함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계로, 유전자를 복제하여 어그로 박테리아(agro bacteria)로 전달한 다음, 이 박테리아를 잎에 주입하여 일시적인 단백질 발현을 일으킵니다.단백질 발현 수준을 결정하기 위해 다음 잎 샘플을 분석합니다. 실험 모델 평가 설계를 기반으로 서로 다른 연령의 잎과 다양한 배양 조건에 대한 일시적인 단백질 발현 수준의 패턴을 보여주는 결과가 얻어졌습니다. 한 번에 하나의 요인과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 휴가 연령 또는 위치 잎과 같은 서로 다른 매개변수 간의 상호 작용을 감지하고 정량화할 수 있다는 것입니다.실험 결과에 대한 특정 요인의 효과를 특성화하는 데 자주 사용되는 한 번에 하나의 요인 접근 방식은 실험 중 개별 실행이 끈의 진주처럼 정렬되어 설계 공간의 적용 범위를 낮게 달성하기 때문에 차선책입니다. DOE 전략의 실험 설계와 대조적으로, 한 번에 두 개 이상의 요인을 변경하면 적용 범위가 향상되어 결과 모델의 정밀도가 향상됩니다. 또한, 한 번에 하나의 요인에서 편향된 설계 공간 적용 범위.또한 실험은 최적의 작동 영역을 식별하지 못하고 차선의 솔루션을 예측하지 못할 수 있는 반면, DOE 전략은 바람직한 조건을 식별할 가능성이 더 높습니다. 이 순서도는 DOE 전략을 계획하는 프로세스를 보여줍니다. 첫 번째 단계는 설계에 포함할 관련 요인과 반응을 식별하는 것입니다.본 시연에서는 항 HIV 단일클론 항체 2 G 12 모델 및 형광 마커, DS red 단백질의 발현 수준을 이전 실험을 기반으로 측정합니다. 관련성이 있는 것으로 간주되는 최소 감지 가능한 차이는 G 12 2개의 경우 밀리리터당 10마이크로그램이고 DS red의 경우 밀리리터당 20마이크로그램입니다. 또한 2개의 G 12 및 DS red에 대한 시스템의 예상 표준 편차에 대한 대략적인 값은 각각 밀리리터당 4마이크로그램 및 8마이크로그램이 됩니다.이 DOE 전략을 계획하기 위한 나머지 단계는 여기에서 논의되지 않지만 자세한 내용은 함께 제공되는 원고에서 확인할 수 있습니다. 두 개의 G 12 및 DS red는 담배 식물에서 일시적으로 발현됩니다. 식물 재배 절차를 시

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Research

연구

JoVE Journal

Bioengineering

생명공학

출처: 루피안, J. S. 외 식물 조직 내 슈도모나스 시링기 유전자 발현의 단세포 분석. J. Vis. 경험 (2022).이 영상은 형광 표지 전사 인자를 사용하여 식물 추출 병원성 박테리아의 단일 세포 수준에서 유전자 발현을 분석하는 방법을 시연합니다. 공초점 영상은 병원성 유전자 발현의 이질성을 드러내어 클론 박테리아 집단 내의 기능적 다양성을 강조합니다.

식물 추출 병원체에서 유전자 발현의 단세포 분석

식물은 현재의 표현 패러다임을보다 더 확장 가능한 비용 효율적이고 안전 상업적 규모에 제약 단백질의 생산을위한 새로운 시스템을 제공합니다. 본 연구에서는, 우리는 포함하는 대상 유전자를 소개하는 간단하고 편리하면서도 확장 가능한 접근...

재조합 단백질의 높은 수준의 과도 발현 식물의 효율적인 Agroinfiltration

이 작품은 선택적으로 바이오 래드 유전자 총을 사용하여 정량, 식물의 세포 내 소기관을 대상으로하기위한 새로운 방법을 설명합니다.

깁슨 조립 및 유전자 총을 사용하여 담배 일시적인 유전자 발현

생체 내에서 단백질 복합체의 형성은 이분자 형광 보완하여 시각하실 수 있습니다. 상호 작용 파트너는 형광 태그의 보완적인 부분에 융합 일시적으로 담배 잎으로 표현, 두 단백질의 근접에 따라 재구성 형광 신호의 결과로되어있다.

담배 원형질체 및 잎에 이분자 형광 보완에 의해 시각 단백질 - 단백질 상호 작용

담배 식물은 일시적 발현 시스템을 통해, 진균 셀룰라아제, TrCel5A을 제조 하였다. 발현은 형광 융합 단백질을 사용하여 모니터링 할 수 있고, 단백질 활성은 사후 발현 분석되었다.

재조합 셀룰라아제 Cel5A의 표현에서<em&gt; 트리코더마 reesei</em&gt; 담배 식물에서

이 연구에서는 서로 다른 생산 플랫폼에서 표적 인간 재조합 단백질의 발현을 비교했습니다. 우리는 전통적인 발효기 기반 배양과 식물에 초점을 맞추고, 각 시스템의 설정을 설명하고, 보고된 결과를 기반으로 각 플랫폼의 고유한 한계와 장점을 강조했습니다.

박테리아, 곤충 세포 및 공장 시스템 : 재조합 단백질 다른 Biofactories에서 표현의 비교 분석

세포 이하 수준에서 신호 이벤트는 발달 및 환경 단서에 의해 동적으로 조절됩니다. 여기에서는 담배 일시적 발현 시스템을 사용하여 동적 단백질-단백질 상호 작용을 모니터링하고 식물 세포에서 신호 전달의 공간적 조직을 공개하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

담배 과도 식 시스템을 사용하여 MAPK 신호 전달 통로의 공간 개편 이미징

높은 처리량, 자동화, 담배 원형질체 생산 및 변환 방법이 설명되어 있습니다. 로봇 시스템이 아닌 모델 작물로 번역해야한다 모델 BY-2 시스템에 대규모 병렬 유전자 발현 및 검색 할 수 있습니다.

높은 처리량 원형질체 분리 및 변환을위한 로봇 플랫폼

이종 발현 시스템을 통해 공부하는 이온 채널은 생물 의학 연구의 핵심 기술이되고있다. 이 논문에서는, 유도 성 프로모터의 조절하에 일시적인 형질 감염을 수행함으로써 엄격하게 제어 이온 채널 표현을 달성하는 시간 효율적인 방법을 제안한다.

유도 성 과도 형질을 통해 제어 이온 채널 식

이 원고 luciferase 활동의 측정에 기반 하는 단백질 단백질 상호 작용을 결정 하기 위한 간단 하 고 신속한 실험 절차를 설명 합니다.

Luciferase 보완성 이미징 분석 결과 Nicotiana benthamiana 잎 뚜렷이 결정 단백질 단백질 상호 작용 역동성에 대 한

Nicotiana benthamiana 잎에서 생 합성 효소의 일시적인 분리 식 생 공급 2, 3-oxidosqualene 새로운 고부가가치 보관 제품의 생산으로의 착륙 장이 있습니다. 여기는 triterpenes 그리고이 강력한 식물 기반 플랫폼을 활용 하 여 아날로그의 빠른 (5 일) 대리점 규모 생산을 위한 상세한 프로토콜을 설명.

Nicotiana Benthamiana 에 과도 식 보관 생산 대리점 규모에 대 한 나뭇잎

학습하세요 담배 잎에서의 단백질 과도 발현을 위한 실험 설계 접근법을 통해 주요 매개변수의 영향을 정량화하고 예측 모델을 생성하는 방법을. 이 기법은 다양한 인자 간 상호작용을 감지하여 단일 인자 실험보다 우수한 결과를 제공합니다.

사례 연구로 담배에 과도 단백질 발현 : 실험 접근의 디자인을 사용하여 복잡한 시스템의 특성

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