A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

Regina Salvat; Leonard Moise; Chris Bailey-Kellogg; Karl E. Griswold

doi:10.3791/51308

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Biology

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A High Throughput MHC II Binding Assay for Quantitative Analysis of Peptide Epitopes

펩티드 에피토프의 정량 분석을위한 높은 처리량 MHC II 결합 분석

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07:59 min

March 25, 2014

DOI: 10.3791/51308-v

Regina Salvat¹, Leonard Moise², Chris Bailey-Kellogg³, Karl E. Griswold¹

¹Thayer School of Engineering,Dartmouth College, ²Institute for Immunology and Informatics,University of Rhode Island, ³Department of Computer Science,Dartmouth College

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

재조합 인간 MHC II 분자와 생화학 적 분석은 신속하고 정량적 인 면역 원성 항원 인식에 대한 통찰력, 삭제, 디자인을 제공 할 수 있습니다. 여기에, 384 - 웰 플레이트를 확장 펩타이드 MHC II 결합 분석을 설명한다. 이 비용 효과적인 포맷은 단백질 deimmunization 백신 디자인 및 개발의 분야에서 유용한다.

이 절차의 전반적인 목표는 고처리량 3 84웰 플레이트 분석을 사용하여 짧은 펩타이드와 인간 MHC 두 면역 단백질의 결합을 정량화하는 것입니다. 이는 먼저 용액 단계 경쟁 결합 분석을 관심 펩타이드와 함께 수행함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계에서, 평형 펩타이드 MHC 2 복합체는 고 결합 ELIZA 플레이트에 고정 된 항 MHC 2 항체로 포착됩니다.

다음으로, 포획된 복합체를 스트렙타비딘(streptavidin)이라고 표시된 아편으로 배양한 다음 결합되지 않은 스트렙타비딘을 씻어내고 포획된 아편을 활성화합니다. 궁극적으로, 시간 분해 형광 측정법은 MHC 2 포획 제어 펩타이드의 수준을 정량화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법은 표적 단백질의 면역원성 잠재력에 대한 예비 통찰력을 제공할 수 있습니다.

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