현지화 된 조직 병리학 적 분석을위한 망막 보철물로 이식 된 가공 눈을위한 기술 : 파트 망막 끌어 올릴 2 망막 임플란트

단단한 금속 부품이 있는 망막 보철물은 전통적인 조직학적 과정과 호환되지 않습니다. 여기에서 우리는 금속 T.This로 장악된 망막 임플란트에 직접 인접한 눈의 건강을 평가하기 위한 기술을 기술한다.이것은 첫째로 동반 영상에서 기술된 의정서에 따라 눈을 핵을 형성하고 고쳐 놓음으로써 달성되고, 그 후에 임플란트와 망막 T.The 두번째 단계는 점진적으로 조직 표본을 탈수하고 그 후에 에폭시 수지에서 그것을 끼워넣기 위한 것이다 2단계 임베딩 프로세스를 사용하여 원하는 방향. 다음으로, 최종 수지 블록을 특수 홀더에 장착하고 임플란트와 주변 안구 조직을 통한 단면이 원하는 수준으로 노출될 때까지 점진적으로 연마합니다.

마지막 단계는 노출된 조직을 표면 염색한 다음 고출력 해부 현미경으로 이미지와 사진을 촬영하여 이식된 보철물에 인접한 세포 구조를 시각화하는 것입니다. 그런 다음 필요에 따라 이러한 단계를 여러 번 반복합니다. 궁극적으로, 임플란트 현장을 포함한 조직 샘플을 통해 일련의 단면 이미지가 수집되어 장치 또는 수술의 설계를 개선하고 특정 보철물의 안전성을 평가하는 데 도움이 될 수 있습니다.

기존의 블레이드 기반 절단 조직학과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 금속 구성 요소를 포함하여 심장에 이식된 물체가 시술 중에 제자리에 남아 있을 수 있어 임플란트 조직 계면의 시각화가 가능하다는 것입니다. 이 방법은 이식된 망막 보철물에 인접한 섬세한 안구 조직의 구조적 무결성 평가와 같은 망막 보철물 분야의 주요 질문에 답할 수 있습니다. 동반 JoVE 비디오에 설명된 대로 눈의 적출 및 고정 후 임플란트와 임플란트가 눈 바깥쪽에 고정되는 지점을 시각화합니다.

15도 블레이드를 사용합니다. 각막 둘레를 절개하고 각막 캡을 제거하여 안구 내부를 드러냅니다. 이 수정체는 이전에 이 망막 외피 임플란트에 대한 수술 절차의 일부인 렌즈 절제술 중에 제거되었습니다.

그런 다음 홍채와 수정체의 잔여 Z 섬유를 삽입하여 망막 외상형물과 금속 T가 있는 후방을 드러냅니다. 임플란트와 수행되는 연구에 따라 추가 해부 전에 관련 없는 구성 요소를 제거하십시오. 본 예에서, 평가되고 있는 망막상외(epiretinal array)는 프로토타입 밀폐형, 다이아몬드 전극 및 컨포멀 실리콘 캐리어 내에 수용된 전자 패키지로 구성됩니다.

원하는 방향으로 압정과 주변 조직을 포함하는 샘플을 조심스럽게 해부합니다. 미세 해부 가위를 사용하여 공막, 맥락막, 망막을 포함한 눈 뒤쪽의 전체 두께를 자릅니다. 여기에서 메스로 미세 해부하여 다이아몬드 전극 패키지를 조심스럽게 추출합니다.

임플란트의 실리콘 본체를 망막 압정 및 백금 배선의 잔여물과 함께 남겨 둡니다. 압정에 인접한 모든 망막 층을 보여주는 압정의 세로 단면을 제공하는 샘플을 가져옵니다. 그런 다음 샘플을 70% 에탄올로 되돌립니다.

프로그레시브 에탄올 단계에서 3일에 걸쳐 샘플을 탈수합니다. 먼저 샘플을 70% 에탄올로 2시간, 2회 탈수합니다. 다음으로, 80% 에탄올에서 샘플을 두 번 탈수한 다음 다음날 밤새 90% 에탄올로 샘플을 두 번 탈수하고 2시간 동안 100% 에탄올로 샘플을 두 번 탈수한 다음 밤새 진행합니다.

마지막으로 샘플을 100% 아세톤으로 2시간 동안 두 번 탈수합니다. 아세톤에서 샘플을 제거하고 실온에서 공기 건조되는 것을 광학 현미경으로 관찰합니다. 연조직에서 액체를 제거하면 세포가 붕괴되고 수축됩니다.

샘플은 말리고 무너지기 시작하기 직전에 에폭시로 옮겨집니다. 조직이 말리고 무너지는 시점에 대한 인식은 경험을 통해 개발됩니다. 샘플을 투명 에폭시 수지에 포함시키려면 적절한 밀봉 가능한 용기에 액화 에폭시에 눈 조직을 담그십시오.

진공 챔버에서 에폭시의 가스를 부드럽게 제거하고 실온에서 밤새 그대로 두어 경화시킵니다. 경화된 에폭시와 샘플의 크기를 띠톱과 리드로 조정하여 샘플을 원하는 방향으로 삽입하도록 주의하십시오. 압정의 장축이 금형 바닥과 평행을 이루도록 신선한 액화 에폭시로 눈 조직을 포함하는 크기가 조정된 블록입니다. 슈퍼 접착제 한 점을 사용하여 크기 조정 샘플을 샘플 홀더 바닥에 고정합니다.

샘플 홀더를 액화 에폭시로 채우고 밤새 경화시키기 위해 이전과 같이 가스를 제거합니다. 그런 다음 분쇄 시편 홀더에 수지를 장착하고 탄화규소 종이를 사용하여 물을 얹은 상태에서 230-250RPM으로 샘플을 수동으로 분쇄합니다. 염색을 위해 3-5분 동안 또는 얼룩이 생길 때까지 바닥 표면을 토인 블루 염색에 담그십시오.

샘플을 수돗물로 헹군 후 더 높은 출력의 해부로 표본의 지면 표면을 이미지화합니다. 범위. 망막의 세포층을 시각화하려면 표본 바로 위의 에폭시 상단 표면에 증류수 한 방울을 바르십시오. 공기 에폭시 계면에서 회절을 부드럽게합니다.

광섬유 구즈넥 광원을 사용하여 샘플을 비춥니다. 분쇄 및 이미징 단계를 반복하면 미리 설정된 두께의 샘플을 분쇄할 때마다 이를 수행할 수 있습니다. 시편 홀더의 정밀하고 재현 가능한 최소 연삭 증가량은 20미크론입니다.

이 과정은 임플란트와 주변 안구 조직을 통한 단면이 원하는 수준으로 노출될 때까지 점진적으로 반복됩니다. 표시. 다음은 연삭 공정 중 다양한 지점에서 티타늄 망막 T에 바로 인접한 망막 조직의 예시 이미지입니다. 이미지는 압정의 세로 부분이 눈을 관통하고 공막을 빠져 나와 실리콘과 톨루이딘 블루 염색 및 염색되지 않은 망막에 인접하는 것을 보여줍니다.

인공물이 없는 망막 박리와 접힘은 저출력과 고출력 모두에서 실리콘의 양쪽에서 볼 수 있습니다. 압정 샤프트는 실리콘에 박혀 있는 것으로 보이며 압정의 머리는 망막과 공막을 관통했습니다. 여기서 저출력과 고출력으로 시각화된 실리콘의 양쪽에 있는 염색되지 않은 망막에 비인공적 망막 박리

이 예는 비스듬한 삽입 각도로 인해 압정과 망막의 한쪽 압박에 인접한 망막 무질서가 있음을 보여주었습니다. 이 절차를 시도하는 동안 결과 지표면이 원하는 평면에 정렬되도록 샘플을 조심스럽게 삽입, 방향 지정 및 리드하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 또한, 지상 샘플은 오늘 회수할 수 없으므로 각 분쇄 단계에서 여러 장의 사진을 수집해야 합니다.

이 방법은 망막 보철물 조직학에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 또한 뇌심부 임플란트, 혈관 스텐트 또는 정형외과 보철물과 같은 하드 이식 구성 요소를 사용하는 다른 시스템에서 장치 조직 인터페이스를 시각화하는 데 적용할 수도 있습니다.