Directed Evolution Method in <em>Saccharomyces cerevisiae</em>: Mutant Library Creation and Screening

Javier Vi&#241;a-Gonzalez; David Gonzalez-Perez; Miguel Alcalde

doi:10.3791/53761

진화 방법에 감독 사카로 마이 세스 세레 비지에 : 돌연변이 라이브러리 생성 및 검사

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Directed Evolution Method in Saccharomyces cerevisiae: Mutant Library Creation and Screening

진화 방법에 감독 사카로 마이 세스 세레 비지에 : 돌연변이 라이브러리 생성 및 검사

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10:50 min

April 1, 2016

DOI: 10.3791/53761-v

Javier Viña-Gonzalez¹, David Gonzalez-Perez¹, Miguel Alcalde¹

¹Department of Biocatalysis,Institute of Catalysis, CSIC

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

우리는 Saccharomyces cerevisiae에서 지시된 진화 캠페인을 위한 돌연변이 라이브러리를 구축하고 스크리닝하기 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다.

이 프로토콜의 전반적인 목표는 유도 진화 실험을 위해 Saccharomyces Cerevisiae에서 돌연변이 라이브러리를 구성하고 스크리닝하는 방법을 보여주는 것입니다. 이 방법은 어셈블리 및 복제에서 겹치는 영역을 할당하는 방법과 같은 집중적인 지시 진화 실험을 위한 실험실 생성 사용의 주요 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 단 한 번의 변환 단계에서 좋은 품질의 수준을 할당할 수 있기 때문에 단순성과 견고성입니다.

돌연변이 라이브러리를 생성하고 스크리닝하기 위한 이 프로토콜은 진균 아릴-알코올 산화효소 또는 AAO에 대해 시연될 것입니다. 집중된 지시 진화를 위한 영역은 사용 가능한 결정 구조 또는 효소의 상동성 모델을 기반으로 하는 계산 알고리즘의 도움으로 먼저 선택됩니다. AAO의 두 영역, 즉 M1 영역과 M2 영역이 무작위 돌연변이 유발 및 재조합을 대상으로 합니다.

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