Name: 마우스 수지상 세포 하위 집합의 분리를위한 효율적이고 높은 수율 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-04-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 9 s
Description: 배우세요 마우스 비장에서 Flt-3 리간드를 이용해 수지상 세포 하위 집합을 고효율로 분리하는 방법입니다. 자기 비드 기반 분리로 plasmacytoid, CD8α⁺, CD8α⁻ DC를 순차 정제하여 면역학 연구에 활용할 수 있습니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

연구는 에이즈 연구를위한 아인슈타인 암 센터 (NIH / NCI CA013330) 및 센터 (NIH / NIAID AI51519)에 의해 지원 FACS 코어 기능을 사용하여 수행 하였다 세포 계측법이 작품은 SAP 흐름에 NIH / NIAID 보조금 AI45889에 의해 지원되었다.

동물 실험 기관 동물 관리 및 사용위원회 (IACUC)에서 승인 된 지침에 따라 수행됩니다. 불임을 필요로하는 모든 절차는 바이오 안전성 캐비닛에서 수행된다. 마우스의 B16.Flt3L 흑색 종의 1 주입 <ol><li> 배양 37 ° C에서 10 % CO 2 완전 DMEM 배지에서 0.5 × 106 세포 / ml의 밀도로 T25 조직 배양 플라스크에서 FLT-3 발현 B16 흑색 종 세포주. 세포가 도달 할 때까지 ~ 90 %의 합류 (~ 20 시간)을 성장. </li><li> 트립신 분해 된 세포를 수확. 흡 인물 세포 배양 배지와 PBS로 부착 세포를 세척 하였다. 0.05 % 트립신 5 ML을 추가하고 37 ℃에서 5 분 동안 품어. 프로테아제 소화 급냉 차가운 20 ㎖를 완전 DMEM 배지 소 태아 혈청 (FCS)을 함유하는 (39 ° C)를 추가한다. 가볍게하여 세포를 리프트는 부드럽게 피펫 팅 아래 다음 탭핑. </li><li> (300)에서 원심 분리하여 세포를 수집4 ℃에서 10 분 동안 XG. 혈구 또는 자동화 된 세포 생존 계수기를 사용하여 세포를 카운트. PBS에서 108 세포 / ml의 밀도로 재현 탁. </li><li> 피하 주사하여 종양 세포를 이식 마우스 (C57BL / 6 또는 다른 조직 적합성 균주)를 세포 현탁액 100 ㎕ (107 세포)와 목의 기부에 Machholz 외. (19)에 의해 설명 된 바와 같이. </li><li> 수확 기관에 대한 동물을 희생 전 (12 일 - - 직경 10mm, 일반적으로 7 2) 종양이 만져 또는 볼 때까지 성장 할 수 있습니다. </li></ol> 종양 베어링 마우스에서 비장 단일 세포 현탁액 2. 준비 <ol><li> 이소 플루 란의 과다 복용 (&gt; 5 % 이소 플루 란의 유량을 조정하고 정지 호흡 후 노출 적어도 2 분 계속)와 마우스를 마취. 안락사에 대한 제도적 지침에 따라 자궁 전위에 의해 FLT-3 흑색 종 종양 베어링 마우스를 희생. </li><li> 디멸균 가위 (20)의 도움으로 무균 기술을 이용하여 70 % 에탄올과 수확 비장 피부 sinfect. </li><li> 바이오 안전성 캐비닛에 전송을위한 멸균 페트리 접시에 비장를 놓습니다. 무균 조건 하에서 여기에서 모든 단계를 수행합니다. </li><li> 신선한 페트리 접시에 비장을 전송하고 RPMI 배지로 세척한다. 메스를 사용하여 소형 (~ 0.2 cm 2) 조각으로 비장을 잘라. 콜라게나 제 / DNase의 용액 10 ㎖로 37 ° C에서 30 분 동안 인큐베이션. </li><li> 70 μm의 셀 스트레이너에 비장 조직의 부분적으로 소화 정지를 따르십시오. 5 mL의 주사기의 플런저를 사용하여 스트레이너의 메쉬를 통해 나머지 조직편 압축. </li><li> 새로운 배지 10 ml의 메쉬 필터를 세척하고 필터를 버리십시오. 세포 펠렛 4 ° C에서 10 분 동안 300 XG에 현탁액을 원심 분리기. </li><li> 상층 액을 흡인 및 RBC 용해 완충액 2 ㎖의 세포 펠렛을 재현 탁. RT F에서 품어또는 10 분. 완전한 RPMI 배지 10 ㎖를 첨가하여 RBC 용해 완충액을 해소. </li><li> 4 ℃에서 5 분 동안 300 × g으로 원심 분리하여 세포를 펠렛. 적절한 부피의 재현 탁 된 Fc는 블록 항체 (2.4G2) 20 ㎍ / ml를 함유하는 세포를 선별 완충액 (예, MACS)에 108 세포 / ml의 세포 밀도를 달성한다. </li></ol> 비장 단일 세포 현탁액에서 형질 DC가, CD8α 순위 수지상 및 CD8α NEG 수지상 3. 정제 . 단일 세포 현탁액으로부터 비장 DC 서브 세트의 분리는도 1에 도시 된 바와 같이 여러 단계의 과정 4에서 온도를 유지하기 위해 사전 - 냉각 완충액 및 빙수 조를 이용하여 모든 단계를 수행 - 8 °의 C를 참고. 프로토콜의 다음 섹션에서 모든 시약의 양이 108 세포 / ㎖)로 비장 세포 현탁액을 200 μL의 초기 입력에 대해 계산된다. 이 확장 할 수 있습니다 또는아래 비례 초기 단계 (3.1.1 및 3.2.1) 기타 시약 (항상 1 X 108 세포 / ㎖의 밀도) 세포 현탁액의 양을 변경하여 필요에 따라. 따라서 이후의 모든 단계에서 시약의 볼륨을 조정합니다. 예를 들어,는, 1 × 10 8 / ㎖에서 비장 세포 현탁액 100 ㎕로 시작하는 모든 단계에서 시약 절반 바와 볼륨을 사용한다. <ol><li> 형질 수지상 세포의 분리 (PDC) <ol><li> 비장 세포 현탁액 200 μL에 형질 DC 절연 키트에 비오틴 표지 항체 칵테일 300 μl를 추가합니다. </li><li> 철저하게 혼합하고 15 분 동안 얼음 수조에서 부화. 일시 중단 된 세포를 유지하고, 항체 결합을 극대화하기 위해 튜브마다 3 분을 누릅니다. </li><li> 39 ° C에서 5 분 동안 300 x g에서 원심 분리하여 세포를 선별 완충액 12 ml를 세포 펠렛을 추가. 대기음 뜨는는 언 바운드 비오틴 항체를 제거합니다. </li><li> 세포를 재현 탁셀 정렬 버퍼 500 μL에 펠렛. 안티 - 비오틴 항체 - 복합 비즈 300 μl를 추가합니다. 단계를 반복 3.1.2과 3.1.3. </li><li> 뜨는을 취소하고 셀 정렬 버퍼의 2 ml의 세포 펠렛을 resuspend. 미리 냉각 된 버퍼를 사용하여 실온에서이 시점에 모든 단계를 수행합니다. </li><li> 자기 스탠드 LS 열을 정렬 신선한 자기 활성화 된 셀을 놓습니다. 세척 및 세포 정렬 버퍼의 5 ㎖로 열 평형. </li><li> 칼럼 상에 세포 현탁액을 피펫 칼럼 베드의 표면의 중심으로 부드럽게 도포. 을 통해 흐름을 수집합니다. </li><li> 셀 정렬 버퍼의 10 ml의 컬럼을 씻으십시오. 통해이 흐름을 수집하고 단계 3.1.7에서를 통해 흐름을 결합한다. 올라가고은 (FT1)을 통해이 열 흐름에 충실. </li><li> 2 ml의 세포 정렬 버퍼에 4 ° C,에 resuspend에서 5 분 동안 300 XG에서 원심 분리하여 FT1에서 세포 펠렛과 신선한 LS 칼럼을 통해 세포를 전달3.1.8 - 3.1.6 단계를 반복하여. 이 순차적으로 열 사용은 분리 된 세포의 향상된 순도를 산출한다. </li><li> 2 ml의 완전한 RPMI 4 ° C에서 5 분 300 XG에 원심 분리하고, 재현 탁하여 펠렛 세포. 필요할 때까지 얼음에 놓습니다. </li></ol></li><li> CD8α 순위 및 CD8α NEG 수지상 세포의 분리 참고 :이 절차의 첫 번째 단계는 B, PDC, T와 NK 세포의 고갈이다. <ol><li> 전체 비장 세포 현탁액 (단계 2.8에서 얻은 10 8 세포 / ml의 1 ml)로부터 CD8α 순위 DC 절연 키트에 바이오틴 결합 된 항체 칵테일 100 μl를 추가합니다. </li><li> 잘 섞어서 15 분 동안 얼음 수조에서 부화. 그들의 표적 세포에 비오틴 표지 항체의 결합을 극대화하기 위해 튜브를 부드럽게 매 3 분을 누릅니다. </li><li> 4 ° C에서 5 분 동안 300 XG에서 원심 분리하여 세포를 버퍼를 정렬 12 ml의 세포를 추가하고 펠렛. 기음 슈퍼언 바운드 비오틴 항체를 제거 natant. </li><li> 셀 정렬 버퍼 150 μL와 CD8α 순위 DC 분리 키트에서 제공하는 안티 - 비오틴 구슬의 100 μl를 추가합니다. 잘 섞어서 15 분 동안 얼음 수조에서 부화. </li><li> 4 ° C에서 5 분 동안 300 XG에서 원심 분리하여 세포를 버퍼를 정렬 10 ml의 세포를 추가하고 펠렛. </li><li> 재현 탁의 1 ml의 세포 정렬 버퍼에 세포 단계 3.1.8을 통해 3.1.6의 절차에 따라 새로운 LS 열을 통해 전달합니다. </li><li> 2 (FT2)를 통해 레이블이없는 흐름을 수집 및 열 잔류 물을 버린다. 이 레이블이없는 부분은 CD8α 순위 및 CD8α NEG DC에 대한 충실. </li><li> 4 ℃에서 5 분 동안 300 × g으로 원심 분리하여 FT2에서 세포 펠렛. </li><li> 1 ml의 세포 정렬 버퍼에있는 세포를 재현 탁하고 CD8α 순위 DC 절연 키트에 방지 CD8α 복합 자석 구슬 200 μl를 추가합니다. </li><li> 대표3.2.6 단계를 3.2.2을 먹는다. 컬럼을 통해 흐름은 CD8α NEG DC에 대한 풍부하고 CD8α 순위 DC에 대한 고갈된다. 이것은 3 (FT3)을 통해 흐름을 표시합니다. </li><li> CD8α 순위 수지상 컬럼에 유지 용출, 자석으로부터 열을 제거 세포 선별 완충액 5 mL를 추가하고 LS 열에 구비 플런저를 사용하여 열을 제거 행렬. </li><li> 4 ℃에서 5 분 동안 300 × g으로 원심 분리하여 세포를 펠렛. 1 ml의 세포 정렬 버퍼의 대기음 뜨는 및에 resuspend. 을 통해 흐름을 버리고 3.2.11에서와 같이 유지 세포를 수집 제외하고, 순도를 증가 3.1.8에 단계 3.1.6를 반복하여 신선한 LS 칼럼을 통해 다시 용출 세포를 실행합니다. </li><li> FT3 현탁액에서 CD8α NEG 수지상 세포를 정화하기 위해, 4 ° C에서 5 분 동안 300 XG에서 원심 분리하여 FT3 펠렛 세포 정렬 버퍼 300 μL에 재현 탁. </li><li> 안티의 CD11c 잡지의 100 μl를 추가네틱 비즈. 잘 섞어서 15 분 동안 얼음 수조에서 부화. </li><li> 4 ° C에서 5 분 동안 300 XG에서 원심 분리하여 10 ml의 세포 정렬 버퍼와 펠렛 세포를 추가합니다. </li><li> 반복 3.1.8을 통해 3.1.5 단계를 반복합니다. CD8α NEG DC가 긍정적하는 CD11c 구슬로 선택하고 열 바인딩됩니다. 흐름을 통해 폐기 될 수있다. </li><li> 정제 CD8α NEG 수지상 세포를 수집하는 단계 3.2.11에 기재된 컬럼에 유지 된 세포를 용출. </li></ol></li></ol> 항원 및 셀 전송 4. 펄싱 장갑차 <ol><li> 정화 라이브와 죽은 세포를 구별하는 트리 판 블루 배제 (21)를 사용한 후 살아있는 세포를 계산합니다. </li><li> 선택의 항원과 세포를 품어. 100 nM의 농도 (13)에 당지질 항원이라는 알파 - 갈 락토 실 세라마이드 (αGalCer)의 유사체를 사용합니다. 일반적으로, 매우 낮은 ATTAC를 사용하여 106 생존 세포 / 웰의 완전한 RPMI 매체를 판hment U-바닥 96 웰 플레이트 세포 부착을 최소화합니다. 4 시간 - 1 37 ℃에서 5 % CO 2 분위기에서 세포를 인큐베이션. </li><li> 부드럽게 여러 번 피펫 팅하여 수확 세포. 전단력에서 세포 손상을 최소화하기 위해 넓은 구멍 피펫 팁을 사용합니다. PBS로 우물을 세척하고 세포 수확을 극대화하기 위해 이러한 세척 수영장. </li><li> 4 ° C에서 5 분 동안 300 XG에 펠렛은 세포와 PBS에서 원하는 농도로 재현 탁. 일반적으로받는 동물 당 200 μL에 100 만 세포를 주입. 호스트 동물에 투여 전에 생존 능력을 극대화하기 위해 얼음에 세포를 유지합니다. </li><li> 정맥 마우스로 두 측면 꼬리 헛된 또는 레트로 - 궤도 정맥 얼기 (19)을 통해 세포를 주입한다. 1 ML의 주사기에 27 G 바늘을 사용하여 마우스 당 0.1 ML의 최대 볼륨을 주입. </li></ol>

<ol><li>Steinman, R. M., Cohn, Z. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+cell+type+in+peripheral+lymphoid+organs+of+mice.+I.+Morphology%2C+quantitation%2C+tissue+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.</a> J Exp Med. 137 (5), 1142-1162 (1973).</li>
<li>Banchereau, J., Steinman, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+and+the+control+of+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells and the control of immunity.</a> Nature. 392 (6673), 245-252 (1998).</li>
<li>Dudziak, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+antigen+processing+by+dendritic+cell+subsets+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Differential antigen processing by dendritic cell subsets in vivo.</a> Science. 315 (5808), 107-111 (2007).</li>
<li>Belz, G. T., Nutt, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+programming+of+the+dendritic+cell+network%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">Transcriptional programming of the dendritic cell network.</a> Nat Rev Immunol. 12 (2), 101-113 (2012).</li>
<li>den Haan, J. M., Bevan, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Constitutive+versus+activation-dependent+cross-presentation+of+immune+complexes+by+CD8%28%2B%29+and+CD8%28-%29+dendritic+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Constitutive versus activation-dependent cross-presentation of immune complexes by CD8(+) and CD8(-) dendritic cells in vivo.</a> J Exp Med. 196 (6), 817-827 (2002).</li>
<li>Carbone, F. R., Kurts, C., Bennett, S. R., Miller, J. F., Heath, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cross-presentation%3A+a+general+mechanism+for+CTL+immunity+and+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol+Today%22%5BJournal%5D)">Cross-presentation: a general mechanism for CTL immunity and tolerance.</a> Immunol Today. 19 (8), 368-373 (1998).</li>
<li>Yamazaki, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD8%2B+CD205%2B+splenic+dendritic+cells+are+specialized+to+induce+Foxp3%2B+regulatory+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD8+ CD205+ splenic dendritic cells are specialized to induce Foxp3+ regulatory T cells.</a> J Immunol. 181 (10), 6923-6933 (2008).</li>
<li>Mukherjee, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((DEC-205-mediated+antigen+targeting+to+steady-state+dendritic+cells+induces+deletion+of+diabetogenic+CD8%28%2B%29+T+cells+independently+of+PD-1+and+PD-L1%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Immunol%22%5BJournal%5D)">DEC-205-mediated antigen targeting to steady-state dendritic cells induces deletion of diabetogenic CD8(+) T cells independently of PD-1 and PD-L1.</a> Int Immunol. 25 (11), 651-660 (2013).</li>
<li>Melief, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mini-review%3A+Regulation+of+cytotoxic+T+lymphocyte+responses+by+dendritic+cells%3A+peaceful+coexistence+of+cross-priming+and+direct+priming%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Mini-review: Regulation of cytotoxic T lymphocyte responses by dendritic cells: peaceful coexistence of cross-priming and direct priming.</a> Eur J Immunol. 33 (10), 2645-2654 (2003).</li>
<li>Bendelac, A., Savage, P. B., Teyton, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+biology+of+NKT+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Immunol%22%5BJournal%5D)">The biology of NKT cells.</a> Annu Rev Immunol. 25, 297-336 (2007).</li>
<li>Benlagha, K., Bendelac, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CD1d-restricted+mouse+V+alpha+14+and+human+V+alpha+24+T+cells%3A+lymphocytes+of+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Semin+Immunol%22%5BJournal%5D)">CD1d-restricted mouse V alpha 14 and human V alpha 24 T cells: lymphocytes of innate immunity.</a> Semin Immunol. 12 (6), 537-542 (2000).</li>
<li>Brennan, P. J., Brigl, M., Brenner, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invariant+natural+killer+T+cells%3A+an+innate+activation+scheme+linked+to+diverse+effector+functions%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews.+Immunology%22%5BJournal%5D)">Invariant natural killer T cells: an innate activation scheme linked to diverse effector functions.</a> Nature reviews. Immunology. 13 (2), 101-117 (2013).</li>
<li>Arora, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+subset+of+dendritic+cells+controls+the+cytokine+bias+of+natural+killer+T+cell+responses+to+diverse+glycolipid+antigens%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">A single subset of dendritic cells controls the cytokine bias of natural killer T cell responses to diverse glycolipid antigens.</a> Immunity. 40 (1), 105-116 (2014).</li>
<li>Semmling, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alternative+cross-priming+through+CCL17-CCR4-mediated+attraction+of+CTLs+toward+NKT+cell-licensed+DCs%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Immunol%22%5BJournal%5D)">Alternative cross-priming through CCL17-CCR4-mediated attraction of CTLs toward NKT cell-licensed DCs.</a> Nat Immunol. 11 (4), 313-320 (2010).</li>
<li>Duriancik, D. M., Hoag, K. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+identification+and+enumeration+of+dendritic+cell+populations+from+individual+mouse+spleen+and+Peyer%27s+patches+using+flow+cytometric+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Cytometry+A%22%5BJournal%5D)">The identification and enumeration of dendritic cell populations from individual mouse spleen and Peyer's patches using flow cytometric analysis.</a> Cytometry A. 75 (11), 951-959 (2009).</li>
<li>Karsunky, H., Merad, M., Cozzio, A., Weissman, I. L., Manz, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flt3+ligand+regulates+dendritic+cell+development+from+Flt3%2B+lymphoid+and+myeloid-committed+progenitors+to+Flt3%2B+dendritic+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Flt3 ligand regulates dendritic cell development from Flt3+ lymphoid and myeloid-committed progenitors to Flt3+ dendritic cells in vivo.</a> J Exp Med. 198 (2), 305-313 (2003).</li>
<li>Mach, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differences+in+dendritic+cells+stimulated+in+vivo+by+tumors+engineered+to+secrete+granulocyte-macrophage+colony-stimulating+factor+or+Flt3-ligand%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Differences in dendritic cells stimulated in vivo by tumors engineered to secrete granulocyte-macrophage colony-stimulating factor or Flt3-ligand.</a> Cancer Res. 60 (12), 3239-3246 (2000).</li>
<li>Vremec, D., Segura, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+purification+of+large+numbers+of+antigen+presenting+dendritic+cells+from+mouse+spleen%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">The purification of large numbers of antigen presenting dendritic cells from mouse spleen.</a> Methods Mol Biol. 960, 327-350 (2013).</li>
<li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Manual+restraint+and+common+compound+administration+routes+in+mice+and+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats.</a> J Vis Exp. (67), (2012).</li>
<li>Reeves, J. P., Reeves, P. A. Unit 1.9, Removal of lymphoid organs. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aReeves%2C+JP+%22Curr+Protoc+Immunol%22">Curr Protoc Immunol</a>. , (2001).</li>
<li>Strober, W. Appendix 3B, Trypan blue exclusion test of cell viability. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStrober%2C+W+%22Curr+Protoc+Immunol%22">Curr Protoc Immunol</a>. , (2001).</li>
<li>Vremec, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maintaining+dendritic+cell+viability+in+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Immunol%22%5BJournal%5D)">Maintaining dendritic cell viability in culture.</a> Mol Immunol. 63 (2), 264-267 (2015).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 금전적 이해관계가 없음을 선언합니다.

수지상 세포는 T 세포 반응의 프라이밍 관련된 제시 세포 주요 전문 항원 것으로 받아 들여진다. 이들의 주요 기능은 T 세포에 프리젠 테이션을 위해 항원을 복용하고 처리하여 조직의 미세 환경을 조사하는 것입니다. 특정 DC 서브 세트의 기능을 연구하기 위해, 이들은 정상적인 표현형 및 기능을 유지하는 방식을 사용하여 충분한 수 격리 될 필요가있다. 대부분의 프로토콜은 순진 생쥐의 특정 DC의 부분 집합의 분리에 의존하고 있습니다. 이들 세포는 드물기 때문에, 분리 과정은 비효율적이고 세포의 낮은 숫자를 얻었다. 전송 연구 수행 대부분의 실험 동물 세포 당 적어도이 값을 사용하는 반면, 1 백만 CD8 포스 수지상 - 예를 들어, 비장 약 0.5을 수득한다. 따라서, 기존의 방법의 중요한 한계는 공여 쥐 상당한 양의 매우 큰 숫자를 사용하지 않고 충분한 세포 수를 분리 할 수​​ 없다는이며시약. 우리의 방법은 실질적으로 면역 자기 정화 일련의 단계를 사용하여 세 개의 잘 인식 DC 서브 세트 훨씬 더 많은 수...

은 &quot;큰 별 모양 (그리스어 덴 드론) 셀은&quot;림프 기관 (1)에서 발견 수지상 세포 (DC)는 거의 사십년 전에 발견되었다. 많은 연구 수지상 효과적으로 나이브 T 세포 (2)를 자극 할 수있는 유일한 항원 제시 세포 인 것으로 나타났다. 이러한 세포의 주요 기능은 항원 제시 분자 상에 흡수 및 항원 제시 및 효율적인 처리 및 이들의 로딩을합니다. 마우스 비장 DCS는 형질 종래의 서브 세트들로 분리 될 수있다. 형질 DC가이 중 CD11c의 낮은 표현과 B220 및 GR-1의 높은 수준을 특징으로한다. 또한 표면 마커 mPDCA1에 대한 긍정적 인 내가 수용체 9 (TLR9​​) 리간드와 같은 수신자에 대한 응답으로 인터페론 유형을 분비한다. 종래의 수지상 세포는 중 CD11c 및 MHC 클래스 II 표현 높다. 그들은 같은 CD4, CD8α, DEC205, CD 등의 표현형 마커의 표면 발현에 따라 세 가지 하위 집합으로 분할 할 수 있습니다(11B) 및합니다 (33D1 항체에 의해 인식 DCIR2) 수지상 세포 억제 수용체 2 단백질 3,4. CD8α 순위 DC가도 cDC1로 알려져 있습니다, 이러한 CD11b를하고 33D1 같은 골수 마커 DEC205 긍정적, 그러나 음. 또한 cDC2라는 CD8α NEG의 DC는, 33D1, CD11b를하고 CD4 양성하지만 DEC205이 부족하다. 이중 음의 부분 집합 (CD4 및 CD8α 모두 즉, 부정적)은 비교적 드문이며, DEC205 및 33D1에 대한 부정적이다. 그것은 최소한의 특성화 된 부분 집합이며 CD8α NEG DC의 덜 차별화 된 형태 일 수있다. 다양한 DC 부분 집합의 표현형 차이는 또한 생체 내 기능을 확장 할 수 있습니다. CD8α NEG DC가 매우 식세포하고 주로 CD4 T 세포 3 MHC 클래스 II를 통해 외래 항원을 제시하는 것으로 생각된다. 반대로 CD8α 순위 수지상은 MHC 클래스 I에 가용성 단백질 항원 제시를위한 전문화메커니즘의 크로스 발표했다. 크로스 프레젠테이션의 결과는 이러한 수지상 (5)의 작동 상태에 따라 달라지며, 세포 독성 T 세포 (CTL을) 또는 조절 T 세포를 6 2,7- 개발 확장을 초래할 수 있습니다. 감염된 세포 사멸 세포로부터 유래 된 항원 제시 강한 CTL 응답 (9)을 유도하는 반면, 주로 T 세포 (8)의 삭제에 방지 DEC205 항체 매개 배달 결과를 사용하여 CD8α 순위 수지상 세포에 항원의 타겟팅. 펩타이드 항원의 인식에 더하여, 상기 포유 동물의 면역 시스템은 지질 및 당지질 항원을 인식하도록 진화했다. 이 항원은 다양한 포유 동물에서 여러 관련 형태로 존재하는 MHC 클래스 I-같은 세포 표면 단백질 CD1 분자에 의해 제공됩니다. 쥐에 CD1d이라는 고도의 보존 CD1 분자의 단일 유형은 당지질 항원 (10)에 대한 책임이다. 주요<html> CD1d / 당지질 복합체를 인식하는 T 세포 집단이 불변 NKT 세포 (하여 iNKT 세포)라고한다. 이들 세포는 11 다양성이 제한된 TCRβ 쇄와 결합하는 불변 사슬 TCRα 이루어지는 반 불변 T 세포 수용체 (TCR)를 표현한다. 증식 및 활성화 효과기 T 세포가 분화 할 필요가 종래의 T 세포를 달리하여 iNKT 세포 이펙터 집단으로 존재 당지질 12 투여 후 신속하게 응답을 시작한다. 생리 학적으로 중요한 지질 항원 제시 세포의 확인은 연구의 활성 영역이며, 이러한 B 세포, 대 식세포 및 수지상 세포와 같은 여러 독특한 세포 유형이이 기능을 수행하기 위해 제안되었다. 그러나, 수지상의 CD8α 순위 서브 세트 마우스 인 iNKT 세포 (13) 및 CD8 T 세포 14 당지질 매개로 프라이밍 간 지질 흡수 및 항원 제시를 매개하는 주요 세포 인 것으로 입증되었다. 다른 항원 제시 세포에 의해 항원 제시의 효율성을 비교하기 위해 &quot;&gt; ​​ove_content, 간단한 접근 방식은 이러한 종류의 세포 전달 실험 종종 면역 시험 수행된다 나이브 호스트로 항원 당량으로 펄싱. 정제 된 장갑차의 종류를 전달하는 것이다. 이러한 세포들은 전체 셀 (15)의 2 % 미만을 구성하는 림프 기관에서 희귀 집단이 존재하기 때문에, 생체의 항원 처리 된 수지상 세포로 전달 연구를 수행하는 것은 어려운 것이다. 이는 공여 동물에서 이들 세포의 발달을 향상시킬 필요가있다 분리 프로토콜의 효율을 증가시키기 위해. 이는 알려져있다 PDC, CD8 순위 및 CD8 NEG DC 서브 세트 명시 FMS 관련된 수용체 티로신 키나아제 3 (FLT-3)의 생성에 필요한 공통 림프 및 골수 조상 공통. 생체 FLT-3 리간드시 (FLT-3L) 관리, emigratFLT-3 골수 전구 세포를 발현 이온 말초 림프 기관의 증가 된 시드 및 성숙 DC 자손 (16)의 팽창의 결과로 증가된다. FLT-3의 발현은 B, T 또는 NK 세포 분화 경로에 헌신하는 동안 손실됩니다. 따라서, 최소한의 변경은 FLT-3L의 투여시 이들 세포에서 관찰된다. DC 집단에 비슷한 확장 FLT-3L (17, 18)의 지속적인 전신 수준을 제공하기위한 간단하고 경제적 인 방법을 제공한다 뮤린 FLT-3L를 분비 B16 흑색 종 세포주의 주입에 의해 생성 된 종양을 갖는 마우스에서 관찰된다. 이 방법을 사용하여, 우리는 따라서 크게 후속 실험에서 분리 될 수있는 이러한 세포의 수율을 증가시킨다 마우스 비장 모두 정상적인 DC 서브 세트의 확장을 자극하기 위해 FLT-3L 분비 B16 흑색 종 세포의 이식에 기초하는 프로토콜을 개발 . 십사일 피하 메신저 다음 - 우리는 일관되게 (10) 내에 발견총 비장 세포의 60 % - FLT-3 분비 종양의 농장은, 마우스 (40)를 구성하는 수지상 세포의 현저한 농축과 비장 비대 개발한다. 이 비장에서 다른 DC의 부분 집합은 고순도의 표준을 일부 특정 표현형 마커를 사용 시중에서 판매하는 세포 정제 키트를 이용하여 분리 할 수​​있다.

<table><tbody><tr><td>0.05% 트립신-EDTA&nbsp;</td><td>Life Technologies, Gibco</td><td>25300-054</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>CDS019936-250MG</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 분해효소 D&nbsp;</td><td>Roche Diagnostics</td><td>11088858001</td><td></td></tr><tr><td>DNase I (건조 분말)</td><td>QIAGEN</td><td>79254</td><td></td></tr><tr><td>200 프루프 에탄올&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>9-6705-004-220</td><td>70% 에탄올</td></tr><tr><td>RBC 용해 완충액</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7757</td><td></td></tr><tr><td>RPMI-1640 매체와 L-글루타민을</td> 준비하는 데 사용됩니다.<td>Life Technologies, Gibco</td><td>11875-119</td><td></td></tr><tr><td>DMEM 배지 및 L-글루타민&nbsp;</td><td>Life Technologies, Gibco</td><td>11995-073</td><td></td></tr><tr><td>200 mM L-글루타민&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>25030081</td><td></td></tr><tr><td>MEM 비필수 아미노산&nbsp;</td><td>Life Technologies, Gibco</td><td>11140-050</td><td></td></tr><tr><td>MEM 필수 아미노산&nbsp;</td><td>라이프 테크놀로지스</td><td>11130-051&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-메르캅토에탄올&nbsp;</td><td>Life Technologies, Invitrogen</td><td>21985-023</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 피루베이트&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>11360-070</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Life Technologies, Invitrogen</td><td>15630</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수(PBS Ca2+ 및 Mg2+ free pH 7.2)</td><td>Life Technologies, Invitrogen</td><td>20012-050</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco' s PBS (DPBS with Ca2+ and Mg2+)</td><td>Life Technologies, Gibco</td><td>14040-182</td><td></td></tr><tr><td>0.5 M 에틸렌디아민테트라아세테이트(EDTA) 용액&nbsp;</td><td>Life Technologies</td><td>15575-020</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민 (BSA)&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A2153</td><td></td></tr><tr><td>태아 종아리 세럼</td><td>Atlanta Biologicals</td><td>S11050&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>페니실린/스트렙토마이신&nbsp;</td><td>Life Technologies, Invitrogen</td><td>15140-163</td><td></td></tr><tr><td>Trypan 블루(건조 분말)&nbsp;</td><td>시그마-알드리치</td><td>T6146-5G&nbsp;</td><td>PBS로 0.08% 준비</td></tr><tr><td>Plasmacytoid 덴드래틱 세포 분리 키트 II, 마우스</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-092-786</td><td></td></tr><tr><td>안티-마우스 CD11c&nbsp와 결합된 자기 구슬;</td><td>Miltenyi 생명공학</td><td>130-152-001</td><td></td></tr><tr><td>CD8&알파; Pos 마우스 DC 절연 키트&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotech</td><td>130-091-169</td><td></td></tr><tr><td>Fc-gamma 수용체 차단 항체 (클론 2.4G2)</td><td>BD Biosciences</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>Anti-mouse CD11c-FITC&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>553801</td><td></td></tr><tr><td>안티 마우스 CD8&alpha;-PerCP&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>553036</td><td></td></tr><tr><td>안티-마우스 B220-PE&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>553090</td><td></td></tr><tr><td>1 ml 주사기&nbsp;</td><td>BD</td><td>26048</td><td></td></tr><tr><td>23 G1 바늘&nbsp;</td><td>BD</td><td>305145</td><td></td></tr><tr><td>100mm 페트리 접시&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>875712</td><td></td></tr><tr><td>수술 기구&nbsp;</td><td>Kent Scientific</td><td>INSMOUSEKIT</td><td></td></tr><tr><td>세포 여과기 (70 &micro; m)</td><td>BD</td><td>352350</td><td></td></tr><tr><td>대형 페트리 플레이트&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>FB0875712</td><td></td></tr><tr><td>진공 여과 시스템(500ml(0.22 &마이크로; m))</td><td>코닝</td><td>431097</td><td></td></tr><tr><td>LS 칼럼&nbsp;</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>자기 스탠드 MACS 분리기&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>와이드 보어 200 &mu; L 피펫 팁&nbsp;</td><td>PerkinElmer</td><td>111623</td><td></td></tr><tr><td>Corning 초저 부착 96웰 플레이트&nbsp;</td><td>Corning</td><td>CLS3474-24EA</td> 6-8주 <td></td></tr><tr><td>된 암컷 C57BL/6 마우스&nbsp;</td><td>Jackson Research Laboratories, Mach</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td>et al., 2000</td></tr><tr><td>혈청 무함유 DMEM 및 RPMI 배지 500 ml DMEM과 L-글루타민 또는 500 ml RPMI-1640 with L-glutamine 5 ml MEM 비필수 아미노산(100x, 10&nbsp; mM) 5 ml HEPES Buffer (1 M) 5 ml L-글루타민 (200&nbsp; mM) 0.5 ml 2-메르캅토에탄올 (5.5 x 10-2 M)</td><td></td><td></td><td>필요에 따라 생물 안전 캐비닛의 모든 성분을 DMEM 또는 RPMI 배지와 혼합합니다. 필터는 0.22 &micro를 통과하여 매체를 살균합니다. M 진공 여과 시스템.</td></tr><tr><td>complete RPMI 및 DMEM media</td><td></td><td></td><td>50ml의 열 비활성화 태아 송아지 혈청을 혈청이 없는 RPMI 또는 DMEM 배지에 추가하여 완전한 배지를 얻습니다.</td></tr><tr><td>MACS buffer</td><td></td><td></td> <td>0.5 M EDTA 2 ml와 열 비활성화 태아 송아지 혈청 10 ml를 인산염 완충 식염수 500 ml (PBS, Ca2+ 및 Mg2+ Free, pH 7.2) 및 2&nbsp; &마이크로; g/ml 2.4G2 (Fc 블록 항체).</td></tr><tr><td>FACS 염색 완충액</td><td></td><td></td><td>MACS 완충액에서 아지드화나트륨을 0.05%(500ml당 0.25g)로 용해하여 FACS 염색 완충액</td></tr><tr><td>10x Collagenase D 및 DNase 1 원액 
Ca2+ 및 Mg2+를 함유한 PBS 20ml에 콜라겐분해효소 D 1g과 DNase 1 스톡(1mg/ml, 100x) 0.2ml를 용해시켜 ml당 약 1,000-2,000 단위의 콜라겐분해효소 활성의 용액을 얻습니다.</td><td></td><td></td><td>이 10x 스톡 솔루션은 미리 준비하고 -20°C로 보관할 수 있습니다. C를 몇 주 동안 사용합니다. 이 1ml를 사용 직전에 9ml의 무혈청 RPMI로 희석하십시오.</td></tr></tbody></table>

마우스 수지상 세포 하위 집합의 분리를위한 효율적이고 높은 수율 방법

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

수지상 세포 (DC가)를 취득 처리 및 T 세포 성 면역을 시작하는 분자를 제시 항원에 항원을 제시하는 주된 책임 전문 항원 제시 세포이다. 수지상 세포는 여러 표현형 기능적 이종 서브 세트들로 분리 될 수있다. 비장 수지상 세포의 세 가지 중요한 부분 집합은 CD8α 순위 및 CD8α NEG 세포 형질 있습니다. 형질 DC가 내가 인터페론 유형의 자연 생산자 및 항 바이러스 T 세포 면역에 중요하다. CD8α NEG DC의 부분 집합은 MHC 클래스 II 항원 제시를위한 전문 중앙 CD4 T 세포를 프라이밍에 참여하고있다. CD8α 순위 수지상 세포는 외래 항원과 CD8 T 세포 프라이밍의 크로스 프리젠 테이션 주로 책임이 있습니다. CD8α 순위 수지상는 전문 T의 CEL에 CD1d 분자에 의해 당지질 항원의 프레 젠 테이션에서 가장 효율적인 것으로 입증되었다불변 자연 살해 T (하여 iNKT) 세포로 알려진 리터 인구. FLT-3 리간드의 관리는 궁극적으로 쥐 모델에서 말초 림프 기관에 수지상 세포의 확장의 결과로, 골수에서 수지상 세포의 전구 세포의 이동의 빈도를 증가시킨다. 우리는 다른 DC 서브 세트의 생체 내 능력을 비교하는 셀 이전 실험에서 사용하기 위해 기능 수지상 세포 다수의 정제이 모델을 채택하고있다.

이 절차의 결과는 주입 된 흑색 종 세포에서 발현 뮤린 FLT-3L 의해 DC 서브 세트의 확장에 의존하고있다. B16.Flt3L 종양은 C57BL / 6 마​​우스에서 유래하고, 거부로 인해 설립 될 수있는 종양의 실패를 방지하기 위해 그 변형 배경으로 동물에 이식한다. 경우에 따라서는 경로 또는 관심 수용체 시그널링에 공지 결함 수지상 세포를 유도 유전자 변형 마우스를 사용하는 것이 바람직 할 수있다. 이 종양은 다른 동물 동역학으로 개발할 수 명심해야이므로 접종 부위 모양 촉진에 기초하여 종양 성장을 모니터하는 것이 중요하다. 종양이 만져되면 우리의 경험에서, 마우스 베어링 B16.Flt3L 종양은 지속적으로 모든 DC의 부분 집합 (그림 2A)의 확장과 상관 비장 세포 수의 현저한 증가를 보여줍니다. 우리는 일반적으로 2 ~ 3 배의 increas 참조나이브 동물에 비해 흑색 B16.Flt3L 담 마우스로부터 얻은 전체 비장 세포 ...

뚜렷한 수지상 세포 부분 집합은 림프 기관에서 드문 집단으로 존재하므로 면역학 실험을 위한 충분한 수와 순도로 분리하기가 어렵습니다. 여기에서는 현재 알려진 마우스 비장 수지상 세포의 모든 주요 부분 집합을 분리하기 위한 고효율, 고수율 방법에 대해 설명합니다.

Dendritic cells (DCs) are professional antigen-presenting cells primarily responsible for acquiring, processing and presenting antigens on antigen ...

이 프로토콜의 전반적인 목표는 수지상 세포 또는 DC를 생성하기 위한 고효율, 고수율 방법을 개발하는 것이며, 이는 생체 내 표현형 및 기능적 발산을 운명적으로 반영합니다. 수지상 세포는 림프 기관에서 큰 개체군으로 존재합니다. 따라서 우리는 필터 리간드를 사용하여 기증자 조직에서 이러한 필수 세포의 빈도를 증가시켜 격리를 용이하게 합니다.이 기술의 주요 장점은 상업적으로 이용 가능한 agent만을 사용하여 분석에 적합한 숫자의 모든 DC subset의 생성을 제거한다는 것입니다. 90% confluent 배양액에서 B16 흑색종 세포를 발현하는 flt-3 리간드를 수확하려면 먼저 PBS로 세포를 세척하고 섭씨 37도에서 05% 트립신으로 배양합니다. 5분 후, 섭씨 4도의 디마 배지 20ml로 프로테아제 활성을 소멸시키고 가벼운 탭핑과 부드러운 피펫팅으로 부착 세포 모델 층을 분리합니다.원심분리로 세포를 모으고 계수합니다. 그런 다음, C57 블랙 6 수용 마우스에 피하 주사하기 위해 PBS의 밀리리터당 8 세포 농도의 1배로 단일 세포 현탁액을 다시 현탁시킵니다. 종양의 직경이 2-10밀리리터에 이르면 종양을 가진 동물에서 비장을 적출하고 새로운 RPMI 배지가 들어 있는 페트리 접시에 비장을 넣습니다.메스를 사용하여 조직을 0.2제곱센티미터 조각으로 자른 다음 섭씨 37도에서 10밀리리터의 콜라겐 분해 효소와 드나제에 조각을 배양합니다. 30분 후, 부분적으로 소화된 조직 슬러리를 70미크론 세포 여과기에 붓고 5ml 주사기 플런저를 사용하여 여과기의 그물망을 통해 나머지 조직 조각을 누릅니다. 필터를 10ml의 새 배지로 헹구고 나머지 단일 세포 현탁액과 함께 세척액을 풀고 세포를 펠릿화합니다.우리는 세포 펠릿을 2ml의 적혈구 용해 완충액에 10분 동안 실온에서 현탁시킵니다. 그런 다음 10ml의 새로운 RPMI 배지로 세포를 세척하고 FC 블록을 포함하는 세포 분류 버퍼에서 10 - 밀리리터당 8 세포로 다시 현탁시킵니다. 혈장 사이토드 DC를 분리하려면 플라즈마 사이토드 DC 분리 키트에서 300마이크로리터의 비오틴 표지 항체 칵테일을 200마이크로리터의 비장 단일 세포 현탁액과 철저히 혼합합니다.세포를 얼음물 욕조에 15분 동안 넣고 3분마다 부드럽게 두드립니다. 그런 다음 12ml의 세포 분류 버퍼로 세포를 세척하고 펠릿을 500마이크로리터의 새 분류 버퍼에 다시 현탁시킵니다. 다음으로, 300

an-efficient-high-yield-method-for-isolation-mouse-dendritic-cell

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

Miltenyi 맥스 키트를 사용 lymphocytes의 격리는 전체 림프 조직 homogenates에서 세포를 정화하는 안정적인 방법입니다. Miltenyi 시스템을 사용하여 정화 세포는 일반적으로 ≥ 96% 순수하고 있습니다. 여기, 우리는 CD4 + T 세포, Miltenyi에서 제공하는 많은 키트 중 하나를 분리하기 위해 취한 단계를 보여줍니다.

CD4의 분리 + Miltenyi 맥을 정제를 사용하여 마우스 림프절에서 T 세포

마우스 폐 돌기 세포의 고도 정화 준비가 설명되어 있습니다. 구체적인 중점이 종래의 돌기 세포 집합의 고립에 제공됩니다.

마우스 폐에 돌기 세포의 분리

여기서는 자세하게 마우스 장 돌기 세포 (DC가)와 macrophages의 급속한 분리를위한 방법론. 창자 DCS 및 macrophages의 Phenotypic 특성은 세포 정렬 뒤에 자석 구슬 농축은 기능적 연구를위한 매우 순수 인구를 얻을하는 데 사용하는 동안 멀티 컬러 플로우에게 cytometric 분석을 사용하여 수행됩니다.

마우스 소장에서 돌기 세포 및 Macrophages의 분리 및 특성화

이 비디오는 성체 쥐의 골수에서 수지상 세포(T 세포를 활성화하는 핵심 항원 제시 세포)를 생성하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

골수 유래 수지상 세포 생성: 마우스 골수에서 수지상 세포를 생성하는 방법

이 비디오는 고염 처리된 항원 제시 수지상 세포(DC)를 마우스로 입양하는 절차를 보여줍니다. 쥐 CD11c+ 수지상 세포(DC)는 다량의 나트륨을 함유한 배지에 노출되어 세포에서 이소레부글란딘(IsoLG)-단백질 부가물을 형성합니다. 이러한 부가물은 신생항원 역할을 하며 DC 표면에 표시됩니다. 고염 처리된 세포는 입양 세포 전달을 통해 마우스에 주입됩니다.

수지상 세포의 고염 처리 및 마우스로의 채택 전달 방법

이 프로토콜은 항원 밀도 단일 세포 현탁액을 원심 분리하고 그 세포 집단의 마지막 자석 및 / 또는 FACS 정렬 뒤에 조직의 소화 효소의 여러 단계를 통해 인간 흉선에서 제시 세포 분리하는 방법을 자세히 설명.

인간의 흉선에서 골수 수지상 세포와 상피 세포의 분리

기본 microglia murine 두뇌에서의 격리에 대 한 프로토콜 제공 됩니다. 이 기술은 신경 상황의 현재 이해를 발전에 에이즈. 조밀도 기온 변화도 원심 분리와 자력 분리 매우 순수한 샘플의 충분 한 수확량을 생산 하기 위해 결합 됩니다. 또한, 우리 microglia의 특성에 대 한 단계를 설명합니다.

특성화 및 조밀도 기온 변화도 원심 분리 하 여 마우스 기본 Microglia의 절연

여기 분리 하 고 그들의 phenotypical 및 기능 특성의 평가 대 한 인간의 여성 재생산 지역에 다른 해 부 격실에서 수지상 세포를 정화 하는 방법을 설명 합니다. 이 메서드는 다른 면역 세포 또는 다른 점 막 조직에서 수지상 세포를 분리 적용할 수 있습니다.

Phenotypical 및 기능 연구에 대 한 인간의 여성 생식 관에서 수지상 세포의 고립

Monocyte 파생 된 DC (MoDC) 위험 관련 된 분자의 작은 금액을 느낄 수 및 따라서 쉽게 끝났다. 우리는 혈액과 종양과 그들의 조기 활성화를 피하기 위해 고려해 야 하는 주요 조치를 강조 하면서 면역성이 있는 복합물으로 그들의 활성화에서 MoDC의 격리에 대 한 상세한 프로토콜을 제공 합니다.

마우스 Monocyte 파생 된 모 수석 세포 및 종양 면역 단지와 활성화 후속 생체 외에서 그들의 격리 프로토콜

여기, 선물이 자기 세포 분류와 순진한 쥐로 후속 입양 전송 murine spleens에서 수지상 세포를 분리 하는 프로토콜. 높은 소금 활성화 수지상 세포의 모델 입양 전송 및 cytometry의 단계별 절차를 설명 하기 위해 선택 되었다.

절연 및 높은 소금의 입양 전송 처리 수지상 세포를 항 원 제시

여기에서는 10 ng / mL GM-CSF / IL-4로 7 일 배양 한 후 마우스에서 고순도 골수 유래 수지상 세포를 분리하고 생성하는 경제적이고 효율적인 방법을 제시합니다.

마우스로부터 골수 유래 수지상 세포를 분리하고 배양하기 위한 경제적이고 효율적인 프로토콜

배우세요 마우스 비장에서 Flt-3 리간드를 이용해 수지상 세포 하위 집합을 고효율로 분리하는 방법입니다. 자기 비드 기반 분리로 plasmacytoid, CD8α⁺, CD8α⁻ DC를 순차 정제하여 면역학 연구에 활용할 수 있습니다.

마우스 수지상 세포 하위 집합의 분리를위한 효율적이고 높은 수율 방법

더 많은 동영상 탐색