An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

Pooja Arora; Steven A. Porcelli

doi:10.3791/53824

JoVE Journal
Immunology and Infection

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JoVE Journal Immunology and Infection

An Efficient and High Yield Method for Isolation of Mouse Dendritic Cell Subsets

마우스 수지상 세포 하위 집합의 분리를위한 효율적이고 높은 수율 방법

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09:09 min

April 18, 2016

DOI: 10.3791/53824-v

Pooja Arora¹, Steven A. Porcelli^1,2

¹Department of Microbiology and Immunology,Albert Einstein College of Medicine, ²Department of Medicine (Rheumatology),Albert Einstein College of Medicine

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

뚜렷한 수지상 세포 부분 집합은 림프 기관에서 드문 집단으로 존재하므로 면역학 실험을 위한 충분한 수와 순도로 분리하기가 어렵습니다. 여기에서는 현재 알려진 마우스 비장 수지상 세포의 모든 주요 부분 집합을 분리하기 위한 고효율, 고수율 방법에 대해 설명합니다.

이 프로토콜의 전반적인 목표는 수지상 세포 또는 DC를 생성하기 위한 고효율, 고수율 방법을 개발하는 것이며, 이는 생체 내 표현형 및 기능적 발산을 운명적으로 반영합니다. 수지상 세포는 림프 기관에서 큰 개체군으로 존재합니다. 따라서 우리는 필터 리간드를 사용하여 기증자 조직에서 이러한 필수 세포의 빈도를 증가시켜 격리를 용이하게 합니다.

이 기술의 주요 장점은 상업적으로 이용 가능한 agent만을 사용하여 분석에 적합한 숫자의 모든 DC subset의 생성을 제거한다는 것입니다. 90% confluent 배양액에서 B16 흑색종 세포를 발현하는 flt-3 리간드를 수확하려면 먼저 PBS로 세포를 세척하고 섭씨 37도에서 05% 트립신으로 배양합니다. 5분 후, 섭씨 4도의 디마 배지 20ml로 프로테아제 활성을 소멸시키고 가벼운 탭핑과 부드러운 피펫팅으로 부착 세포 모델 층을 분리합니다.

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